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[期刊] 华北农学报
[作者]
徐培华 李唯 杨德龙 王旺田 张亚林
乙烯是调控果实成熟衰老的内源激素,有效地调控乙烯的生物合成便是控制果实成熟的关键,而ACC氧化酶是植物乙烯生物合成途径中的限速酶之一。本研究以成熟的白粉桃为材料提取果实总RNA,克隆ACC氧化酶基因,旨在利用反义技术抑制乙烯合成,延迟桃果实成熟,提高硬度。将克隆片段与pMD18-T载体连接并转化到E.coliDH5α,经PCR、酶切和测序鉴定。分析表明该基因全长为1246bp,其中编码区长960bp,共编码319个氨基酸,与已登陆的ACC氧化酶基因(AF319166)核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分别为99%和98%,表明成功的克隆了ACC氧化酶基因。经生物信息学分析,推测该蛋白的分子式为C1...
关键词：
桃 ACC氧化酶 克隆 生物信息学分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
王俊英 张开春 王俊平 张军科
以樱桃基因组DNA为模板定向克隆其ACC氧化酶基因。对PCR扩增的目的片段用 1%琼脂糖凝胶电泳检测后 ,进行回收、连续转化 ,通过蓝白筛选挑取白色菌落提取质粒DNA进行酶切鉴定 ,确定重组子后采用双脱氧终止法测定DNA全序列。DNA测序结果显示 ,樱桃的ACC氧化酶基因序列全长为 1310bp ,由 2个外显子和 3个内含子构成 ,外显子总长为 10 0 0bp。同源性分析可知 ,樱桃与桃的ACC氧化酶基因DNA序列同源性达 97 8%。
关键词：
樱桃 ACC氧化酶 基因克隆 DNA测序
[期刊] 华北农学报
[作者]
张丽 唐霞 马俊莲 刘月英
以富有柿果为材料,用RNA提取试剂盒提取总RNA,根据已报道的柿果ACC氧化酶(1-aminocyclopropane-l-carboxylic acid oxidase,ACO)基因的序列设计并合成1对引物,通过RT-PCR方法获得1条约1.2 kb特异片段,把该片段连接到pGEM-T easy vector上进行测序,其全长共1 237 bp,编码区697 bp,共编码231个氨基酸残基。序列分析结果表明,该序列与DK-ACO1的cDNA序列同源性达99%,氨基酸的同源性达98%。
[期刊] 华北农学报
[作者]
郝金凤 高峰 博彦泰 李凤 哈斯阿古拉
根据GenBank上登录的甜瓜ACC氧化酶基因1(Cm-ACO1)序列,设计特异性引物,应用RT-PCR从甜瓜品种河套蜜瓜成熟果实中克隆得到了ACO1的全长cDNA,共1035bp,并对其进行了序列分析,结果表明,所克隆的cD-NA与已报道的甜瓜品种Cantaloup charentais的ACO1cDNA序列完全一致。该基因的克隆为进一步研究ACC氧化酶基因在甜瓜中的表达特性以及功能奠定了基础。
关键词：
甜瓜 ACC氧化酶基因1 cDNA
[期刊] 华北农学报
[作者]
李桂琴 李会宣 刘坤 许冬倩 张玉星
以4种不同来源的梨基因组DNA为模板,根据已经发表的多酚氧化酶基因序列设计引物,利用PCR技术,克隆到了鸭梨、雪花梨、砂梨、黄冠梨约1.8 kb的完整多酚氧化酶基因,将纯化后的扩增产物克隆到质粒pGEM-T vec-tor中,转化DH-5α菌,挑选阳性克隆进行测序。利用Clustalx软件对PPO核苷酸序列进行了同源性分析,用DNAStar软件对PPO核苷酸序列进行进化树分析,并进行部分植物PPO氨基酸的同源性分析。结果表明,4种梨多酚氧化酶基因的蛋白编码区含有1 782个核苷酸,鸭梨基因已经在GenBank上登录,登录号为EU048225。梨多酚氧化酶基因与其他植物中的多酚氧化酶基因有较高的...
关键词：
梨 PPO基因 克隆 序列比较
[期刊] 中国农业科学
[作者]
齐玉洁 张鑫 杨夏 高中山 贾惠娟
【目的】根据国际桃基因组序列信息,进行克隆和表达分析与桃果实内酯类合成相关的果肉组织酰基辅酶A氧化酶(Acyl-CoA oxidase,ACX)的5个候选基因,为进一步开展桃香气物质代谢分子机理的研究提供新的研究方向。【方法】根据Phytozome(www.phytozome.org/peach)发布的桃ACX全基因组序列设计特异引物对5个基因全长进行克隆测序,与参考编码序列进行比对和编码蛋白性质进行分析,并对这些成员进行组织特异性表达分析。【结果】获得了桃果肉组织中表达的5个ACX编码基因全长序列,PpACX1、PpACX3的CDS区没有突变,PpACX2核苷酸序列871位处A突变为G,导致...
关键词：
桃 酰基辅酶A氧化酶 基因克隆 序列分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
张帅 张明 寇天舒 马俊莲 唐霞 张子德
为进一步利用基因工程手段调控无花果乙烯的合成,以无花果果肉为材料提取基因组DNA,根据已报道的无花果ACC合成酶基因序列设计引物,采用PCR技术扩增得到一条约600 bp的特异片段,将该片段克隆到pGM-Teasy vector上经PCR、酶切和测序鉴定。序列分析结果表明,基因全长590 bp,编码196个氨基酸,该序列与GenBank上已登陆的Masui Dauphine-ACS1的cDNA序列同源性达99%,氨基酸同源性达98%。结果表明,成功克隆到了无花果ACS基因片段。
关键词：
无花果 ACC合成酶 基因克隆 序列分析
[期刊] 中国农业科学
[作者]
万嗣宝 张斌 战吉宬 陈建业 尹京苑
【目的】克隆桃果实中的磷脂酶Dα基因,并对其进行序列分析和低温表达模式分析。【方法】采用电子克隆与RT-PCR相结合的方法分离桃果实PLDα基因cDNA全长序列;半定量RT-PCR和Northern杂交检测目的基因在桃果实低温贮藏过程中的表达情况。【结果】成功获得全长为2859bp的桃果实PLDα基因序列,该序列具有完整的开放阅读框架(ORF,172～2604bp),编码810个氨基酸。对ORF进行的RT-PCR验证结果与电子克隆序列一致。序列分析显示,桃果实PLDα基因编码的氨基酸序列与草莓、番茄、葡萄等物种的磷脂酶Dα氨基酸序列之间具有高度的保守性,含有N端C2结构域及两个保守的活性中心。...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
田燚 马增艳 常亚青
以仿刺参Apostichopus japonicus为材料,利用cDNA末端快速扩增(RACE)方法首次得到仿刺参MnSOD的全长cDNA。该全长cDNA大小为955bp,其中5′端非编码区67bp,3′端非编码区216bp,开放阅读框(ORF)672bp,在3′端有多聚腺苷酸信号序列ATTTA,并有polyA加尾,符合有效翻译的基因全长cDNA的特征。MnSOD全长cDNA可编码223个氨基酸的前体蛋白,预测蛋白分子质量为24.64kD,理论等电点是6.66,为亲水性蛋白。该蛋白序列没有信号肽和跨膜结构,仅有一段线粒体导肽。其二级结构主要以α-螺旋为主,无规则卷曲和延伸链构成了蛋白中量最大的...
关键词：
仿刺参 MnSOD 基因克隆 序列分析
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张静文 张力文 严云香 常义 陈艳 李欣勇
【目的】铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)在保护细胞和组织免受氧化损伤方面起重要作用。对滨海植物草海桐盐胁迫诱导的Cu/Zn-SOD进行克隆和序列分析，为揭示草海桐适应盐碱环境提供理论依据。【方法】以盐胁迫的草海桐为材料，运用RACE技术克隆草海桐Cu/Zn-SOD,命名为SsCSD,采用生物信息学方法进行序列分析，构建pBinGlyRed-SsCSD重组质粒。【结果】通过RACE技术获得SsCSD基因全长共1148 bp,其最大开放阅读框(ORF)为687 bp,编码228个氨基酸。氨基酸保守结构域分析表明，该序列具有铜锌超氧化物歧化酶保守结构域，属于SOD家族。生物信息学分析表明其定位于叶绿体中，氨基酸序列分析显示其与已知植物叶绿体Cu/Zn-SOD的氨基酸残基高度同源。同时将SsCSD基因与植物表达载体pBinGlyRed进行重组，并成功转入农杆菌GV3101中。【结论】草海桐铜锌超氧化物歧化酶氨基酸序列与同源物种相似度高，在进化上高度保守，对进一步通过转基因验证该酶生物学功能具有重要意义。
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
王建勇 谭晓风 龙洪旭 陈鸿鹏 刘凯 朱凤云
以油茶近成熟种子为材料,根据油茶EST文库中已知的脂氢过氧化物裂解酶EST序列,利用3’RACE与5’RACE技术,克隆到脂氢过氧化物裂解酶的全长cDNA序列。该基因全长1648bp,,包含一个1476bp开放阅读框长,编码491个氨基酸,5’与3’非编码分别为52bp、121bp。预测该蛋白相对分子量为54.7779KDa,等电点为6.77,是个叶绿体转运肽,N端包含有22个疏水氨基酸残基组成的序列,不仅具有转运肽富含的丝氨酸,还含有大量转运肽中很少存在的脯氨酸。多序列比对发现油茶脂氢过氧化物裂解酶核苷酸序列与茶的相似性达到96%,因此将该基因命名coHPL。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
薛丽君 周精华 邢虎成
【目的】克隆苎麻中的一个ACO基因(BnACO1),并对其进行生物信息学分析、表达分析、胁迫应答分析。【方法】通过RT-PCR结合RACE技术从湘苎3号中克隆该基因的全长cDNA序列,利用生物信息学软件对获得的基因序列及编码的蛋白质序列进行分析。利用实时荧光定量PCR分析BnACO1在苎麻不同部位的表达量以及在ABA、干旱和高盐胁迫下的应答。【结果】BnACO1的cDNA序列全长为1 476 bp,其开放阅读框为981 bp,编码326个氨基酸多肽,预测其分子量和等电点分别为36.81 kD和4.95,基因登录号为JX878855。与无花果(AB307720)、香叶天竺葵(U19856)、柿树...
关键词：
苎麻 乙烯 ACC氧化酶 表达
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
赵凯 黄银燕 王倩 王革娇
通过反向PCR和细菌Fosmid文库筛选,克隆得到1株三价砷[As(Ⅲ)]氧化细菌Acidovorax sp.GW2的As(Ⅲ)氧化酶Aox基因簇,包括aoxRSXABCD7个基因,分别预测编码双组分信号传导系统转录调控子AoxR(同源性68%),周质感应组氨酸激酶AoxS(同源性55%),周质结合蛋白AoxX(同源性55%),砷氧化酶AoxAB(同源性分别为74%和71%),硝基还原酶AoxC(同源性46%),细胞色素c AoxD(同源性63%)。反转录PCR结果显示,编码双组分系统的aoxRS基因共转录,而与之转录方向相反的结构基因aoxABCD处于同一操纵子中,aoxX基因和aoxRS基...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
刘洋 姚艳丽 胡小文 徐磊 邢淑莲 张树珍
斑茅是栽培种甘蔗最重要的近缘物种之一，具有抗逆性强等特点。本文以高粱过氧化氢酶基因（ＮＣＢＩ登录号为ＸＭ００２４３７５８６．１）Ｃ ＤＮＡ序列为探针，对甘蔗属ＥＳＴ数据库进行同源检索、筛选和拼接，后经基因组ＰＣＲ、分子克隆、序列分析验证成功分离了１个斑茅过氧化氢酶基因ＤＮＡ序列（ＥＡ ＣＡＴ－１Ａ，ＧＥＮ ＢＡＮｋ登录号为ｋＦ８６４２２３）。该序列全长３８３１ ＢＰ，包含８个外显子和７个内含子，Ｃ ＤＮＡ序列长为１５３２ ＢＰ，包含１０ ＢＰ的５’非翻译区（ＵＴＲ）和４３ ＢＰ的３’ＵＴＲ，以及一个１４７９ ＢＰ的开放读码框，编码４９２个氨基酸，此蛋白序列具有过氧化氢酶保守结构域，属于ＣＡＴ家．．．
关键词：
斑茅 过氧化氢酶 基因克隆 同源进化分析
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