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[期刊] 中国农业科学
[作者]
龚一富 高峰
【目的】研究根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株N9-1侵染甘薯外植体后其生理生化特性的变化规律。【方法】用根癌农杆菌菌株N9-1侵染甘薯品种"新大紫"的茎段、叶片和叶柄为外植体,分别在共培养0、1、3、5d后取样,测定根癌农杆菌感染甘薯外植体后的生理生化特性变化。【结果】根癌农杆菌感染甘薯茎段、叶片和叶柄外植体后,可溶性蛋白质含量随共培养天数的增加而逐渐下降。在感染初期,由于逆境的出现,消耗了外植体内大量的POD和SOD,从而使其POD活性和SOD活性下降。感染后期由于植物抗病机制的作用使POD和SOD活性升高。感染后的甘薯外植体中的内源ABA和GA3含量均表...
关键词：
甘薯 根癌农杆菌 生理生化特性
[期刊] 林业科学研究
[作者]
田国忠 朱水芳 罗飞 李怀方 裘维蕃
采用含有激素合成相关基因的根癌农杆菌 ,伤口接种已感染植原体的泡桐丛枝组培苗和健康组培苗 ,结果发现对丛枝苗的致瘤能力明显低于健康对照苗 ,且被接种病苗的丛枝症状缓解。从健苗获得的 T- DNA转化泡桐瘤组织细胞能在无激素培养基上稳定生长和连续继代培养 2年以上 ,说明瘤组织细胞自身已获得了细胞分裂素和生长素合成能力。根据已报道的根癌农杆菌株系p Til5955T- DNA的异戊烯基转移酶基因 ( ipt)的保守序列 ,设计了一对引物 ( CYT和 CYT′) ,用多聚酶链式反应 ( PCR)扩增了我国杨树致瘤农杆菌 ipt基因部分序列 ( 4 2 7bp片段 ) ,也从遗传转化的两个泡桐无性...
[期刊] 华北农学报
[作者]
高武军 魏开发 孙富丛 卢龙斗 王景雪
以油菜下胚轴和玉米的幼胚为材料,研究19,22,25,28和31℃5个培养温度对含有Bar基因和几丁质酶基因的根癌农杆菌菌株LBA4404的转化效率的影响。结果表明,温度对玉米、油菜的转化效率都有明显的影响,玉米和油菜转化的最佳温度为25℃;25℃条件下,玉米的转化效率与其余4个温度条件下的转化效率有显著的差异;22℃条件下的油菜转化效率和25℃下的差异不显著。
关键词：
温度 根癌农杆菌 转化效率
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王学斌 司龙亭 孟茜 李坤
选用再生能力较强的黄瓜自交系M8为试验材料,在再生体系建立的基础之上,采用根癌农杆菌介导法将转化酶抑制子基因转入黄瓜中。将农杆菌菌液浸泡过的子叶节分别接种在浓度梯度为1mg.L-1到10 mg.L-1的选择培养基上,研究子叶节对潮霉素的耐受性和敏感度。使用农杆菌菌液浸泡5,10,15,20min,分别接种到筛选培养基上,研究浸泡时间对转化效率的影响。结果表明:HygB的选择压浓度为6mg.L-1,侵染时间为15min时,再生频率最高,为18.9%。经PCR检测表明转化酶抑制子基因已经整合到黄瓜基因组中,转化率为2.0%。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
吴转娣 刘新龙 姚丽 苏火生 张敏 吴才文
综述开展甘蔗基因工程育种工作20多年来,从最初的利用农杆菌介导法研究抗除草剂和抗虫转基因成功,到目前高转化效率的转基因方法应用过程中取得的成果,分析影响农杆菌转化甘蔗的关键因素,并对农杆菌介导的甘蔗遗传转化研究前景作了展望。
关键词：
根癌农杆菌介导法 甘蔗 遗传转化
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘翠 李喜焕 常文锁 张春锋 张彩英
以MYB转录因子GmPHR1为目的基因,冀豆12、冀豆16和绥农14为转化受体,比较农杆菌介导大豆不同外植体的遗传转化技术,为大豆转基因育种提供技术支撑。结果表明,以茎尖转化系统的不定芽诱导率、植株再生率和转化效率最高,且对基因型的依赖性最小,但由于对抗生素的敏感性较差,因而存在一定程度的假阳性;其次,以胚尖转化系统的不定芽诱导率、植株再生率和转化效率较高,对基因型的依赖性较小,同时对抗生素的敏感性较强,因而是一种较为理想的转化系统。而子叶节、下胚轴转化系统则表现出不定芽诱导率、植株再生率和转化效率均较低,且存在较强的基因型依赖性等不足。同时,利用上述4种转化系统,获得了3个供试大豆品种的转基...
关键词：
大豆 农杆菌介导转化 外植体类型 转基因
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
代红艳 李文然 刘霁菡 刘月学 张志宏
以近轴端子叶为外植体,研究了菌液浓度、菌液浸泡时间、共培养时间及推迟筛选对根癌农杆菌介导的苹果属植物平邑甜茶转化效率的影响,建立了平邑甜茶高效的转化体系。结果表明:较优转化体系是将成熟胚接种在胚萌发培养基上培养,7～10d后剪取近轴端子叶,子叶外植体在OD600=0.5的EHA105菌液中浸泡10min后在再生培养基上共培养5d,然后在附加20mg.L-1Kan和400mg.L-1Cef的再生培养基上选择培养,在此转化体系上平邑甜茶抗性芽再生率达9.0%。对27个Kan抗性株系的叶片进行GUS组织化学染色分析,23个株系呈现出GUS染色阳性反应。本研究为平邑甜茶的基因工程育种奠定了重要基础。
关键词：
平邑甜茶 子叶 转化 再生 农杆菌
[期刊] 华北农学报
[作者]
王瑞霞 田宏先 杜珍 鲁喜荣 岳新丽
马铃薯脱毒苗经环腐病菌悬液浸根后,再用A-10'生防菌液处理,结果表明:叶片内的苯丙氨酸解胺酶(PAL)、过氧化氢酶(CAT)和叶绿素的含量与对照相比均有明显的增加,表明植物的抗病性增强;可溶性蛋白的释放减少,表明降低了病菌对组织的破坏作用,说明嗜热脂肪芽孢杆菌对马铃薯植株的抗病性具有诱导效应。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
侯丽娟 马永强
【目的】由黑腐果胶杆菌（Pectobacterium atrosepticum，Pa）引起的马铃薯黑胫病，是影响马铃薯产量和品质的主要病害之一。本研究旨在比较不同抗性品种对马铃薯黑胫病菌的生理反应，以期阐明马铃薯抗病品种如何调节防御酶活性及生化物质的含量来抵御病原菌的侵害。【方法】选用抗病品种青薯9号和感病品种乐薯1号为试验材料，温室中进行盆栽种植，植株生长到10～15 cm时在茎基部接种10 μL 106cfu / mL浓度的病原菌Pa，分析接种后不同时间点（1、2、3、4d）时SOD、CAT、POD、PPO、PAL和β-1，3-葡聚糖酶的酶活性，以及木质素和总酚含量的变化情况。【结果】接种Pa后，在抗病品种中，CAT、SOD、PPO和PAL酶的活性，以及木质素含量与对照组相比显著升高，且明显高于感病品种。感病品种在侵染初期表现出较高的POD活性，但随着侵染时间的增加，POD活性的增长速率和峰值在2～3 d逐渐低于抗病品种。尽管，β-1，3-葡聚糖酶活性和总酚含量在不同抗性品种间未表现出显著差异，但两者在接种后1～4 d的变化趋势存在差异。【结论】SOD、CAT、POD、PPO、PAL的酶活性水平以及木质素和总酚含量在抗病和感病品种中存在显著差异，并且抗病品种在接种病原菌后部分生理指标的变化速率明显高于感病品种。
关键词：
马铃薯黑胫病 防御性酶活 木质素 总酚
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王欢 付小蕾 毛洪玉 祝朋芳
为建立稳定的羽衣甘蓝遗传转化体系,以羽衣甘蓝自交系’Mark 10’,’W02-7’和’Curly 6’为试材,通过单因子试验,比较羽衣甘蓝子叶、子叶柄、子叶片、下胚轴4种外植体的再生能力,筛选培养基中的适宜激素浓度,优化了羽衣甘蓝不同外植体的再生体系。将播种后6d的子叶于最适再生培养基上进行黑暗预培养,以根瘤农杆菌为介导侵染子叶后,于黑暗条件下进行农杆菌与植物材料的共培养。随后转入含有头孢霉素的抑菌培养基中进行抑菌培养,再将子叶移入含有卡那霉素浓度的筛选培养基中进行抗性芽选择,并提取植物基因组DNA进行目的基因的PCR验证,从而建立高效的羽衣甘蓝遗传转化体系。结果表明:最佳的外植体是羽衣甘蓝的子叶,在培养基MS+6-BA 1.0mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1上,不定芽分化率可达100%;子叶经2～3d预培养,将OD600值为0.3～0.5的携带DFR基因表达载体的农杆菌菌液离心,以50mL MS重悬液重悬,侵染外植体5min,共培养2d;采用头孢霉素300mg·L-1,抑菌培养3d后,采用10mg·L-1卡那霉素进行抗性芽选择。在播种后30～40d共获得了24个抗性芽,以抗性芽的基因组DNA为模板进行PCR扩增,9株呈DFR阳性,显示外源基因已经成功整合到羽衣甘蓝基因组中,平均转化率为37.5%。本研究结果可以为羽衣甘蓝重要性状基因的遗传转化提供依据。
关键词：
根癌农杆菌 羽衣甘蓝 遗传转化 外植体
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
孙玉宏 韩长磊 张椿雨 肖勇 曾红霞 彭金光 代书桃 孟金陵
利用包含双元载体pBI121的农杆菌LBA4404转化西瓜子叶外植体,获得转基因西瓜植株。结果表明:转化受体材料西瓜品种早花、克伦生、黑美人母本F23的分化效率没有明显差别;外植体浸染菌液10 min的处理较为合适;125 mg/L卡那霉素和300 mg/L羧苄青霉素适合于外植体筛选培养。通过PCR检测获得了3株转基因植株,转化效率为1.5%,其中只有2株整合了gus报告基因。Southern杂交和gus染色检测证明2株的基因组中整合了外源基因,报告基因在植株T0-1-3后代呈现3∶1分离。
关键词：
西瓜 转化 农杆菌 gus 转基因植株
[期刊] 西南农业学报
[作者]
周志林 唐君 金平 刘恩良 曹清河 赵冬兰 张安
为挖掘抗旱甘薯基因资源，为甘薯抗旱育种及种植区域的拓宽提供科技支撑。本试验以全国各育种单位近年来选育的２７个甘薯品种（系）为试验材料，在蒸发量远大于降雨量的新疆，设置正常灌水和干旱胁迫２个处理，采用抗旱指数法，对品种抗旱性进行鉴定评价。结果表明，根据抗旱指数及旱胁迫下鲜薯产量表现，筛选到抗旱指数高且产量高的种质材料６份（商薯９号、徐薯２２、川薯２０、湘薯１５等），并且抗旱性好的品种随着旱胁迫时间的持续，具有较高的脯氨酸（Ｐｒｏ）含量、过氧化物酶（ＰｏＤ）活性、较低的丙二醛（ＭＤＡ）含量；在本试验中，各品种抗旱指数与叶片Ｐｒｏ含量呈极显著正相关（ｒ＝０．８３），与叶片ＰｏＤ活性呈显著正相关（ｒ＝．．．
关键词：
甘薯 旱胁迫 鉴定 生理特性
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张书环 聂品 舒少武 杜浩 Foo Khong Lee 杨月梅 邵纯 邸军 黄君 曾令兵 危起伟
[期刊] 华北农学报
[作者]
尹虹 宋春丽 马俊莲 张子德 唐霞
以磨盘柿叶片为外植体,通过农杆菌介导法,建立了ACC合成酶基因(ACS)遗传转化体系。研究了预培养时间、农杆菌菌液浓度、侵染时间、共培养时间和乙酰丁香酮(AS)浓度等因素对基因转化的影响。结果表明:适宜的预培养时间为2 d;用OD600值为1.0的菌液侵染15 min、共培养3 d,AS浓度200μmol/L有利于提高转化频率。经PCR分子检测,初步确定ACC合成酶基因已转入磨盘柿组培苗中。
[期刊] 华北农学报
[作者]
梁超 王景雪 裴雁曦 杨婷
以番茄无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,通过农杆菌介导法,对其遗传转化条件进行了优化,建立了高效番茄子叶和下胚轴农杆菌介导的遗传转化体系。结果表明:在农杆菌浸染前(浸染浓度为OD600=0.3)进行2 d的预培养浸染6 min的外植体在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/LIAA的培养基上转化效率最高。PCR检测初步证明,NPTII基因已整合到番茄再生植株中。
关键词：
农杆菌介导法 遗传转化 番茄
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