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[期刊] 林业科学研究
[作者]
田国忠 朱水芳 罗飞 李怀方 裘维蕃
采用含有激素合成相关基因的根癌农杆菌 ,伤口接种已感染植原体的泡桐丛枝组培苗和健康组培苗 ,结果发现对丛枝苗的致瘤能力明显低于健康对照苗 ,且被接种病苗的丛枝症状缓解。从健苗获得的 T- DNA转化泡桐瘤组织细胞能在无激素培养基上稳定生长和连续继代培养 2年以上 ,说明瘤组织细胞自身已获得了细胞分裂素和生长素合成能力。根据已报道的根癌农杆菌株系p Til5955T- DNA的异戊烯基转移酶基因 ( ipt)的保守序列 ,设计了一对引物 ( CYT和 CYT′) ,用多聚酶链式反应 ( PCR)扩增了我国杨树致瘤农杆菌 ipt基因部分序列 ( 4 2 7bp片段 ) ,也从遗传转化的两个泡桐无性...
[期刊] 林业科学
[作者]
田国忠 李永 梁文星 朴春根 黄钦才 郭民伟
用保存的不同泡桐无性系染病和健康组培苗为试材,对染病苗、机械损伤、嫁接接种和健康组培苗组织中H2O2及过氧化物酶的变化进行研究。用DAB组织染色方法对H2O2组织定位结果显示,在未损伤情况下多数染病泡桐苗和健康苗H2O2积累皆较少。机械损伤后,病与健苗皆出现H2O2过量积累,其中健苗强于病苗。在维管束部位,重症苗POD活性最强,轻症苗次之,无症和健康苗活性较低;而且所有苗在脉间叶肉组织POD活性都明显低于叶脉组织。用病接穗嫁接健康泡桐砧木的早期(3天以内)似乎与损伤反应类似(包括POD和H2O2产生);6天后损伤反应减弱。嫁接接种成功的组合至20天,在嫁接接口处仍维持高的H2O2释放和强POD...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
龚一富 高峰
【目的】研究根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株N9-1侵染甘薯外植体后其生理生化特性的变化规律。【方法】用根癌农杆菌菌株N9-1侵染甘薯品种"新大紫"的茎段、叶片和叶柄为外植体,分别在共培养0、1、3、5d后取样,测定根癌农杆菌感染甘薯外植体后的生理生化特性变化。【结果】根癌农杆菌感染甘薯茎段、叶片和叶柄外植体后,可溶性蛋白质含量随共培养天数的增加而逐渐下降。在感染初期,由于逆境的出现,消耗了外植体内大量的POD和SOD,从而使其POD活性和SOD活性下降。感染后期由于植物抗病机制的作用使POD和SOD活性升高。感染后的甘薯外植体中的内源ABA和GA3含量均表...
关键词：
甘薯 根癌农杆菌 生理生化特性
[期刊] 林业科学
[作者]
田国忠 张锡津 罗飞 朱水芳
用感染了植原体并表现典型丛枝症状的组培苗作接穗或砧木，在无杂菌条件下嫁接７个表现不同田间抗性的无性系健康组培苗，并用ＤＡＰＩ荧光显微镜和１６ＳｒＲＮＡ基因扩增（ＰＣＲ）技术检验嫁接传病效果。Ｃ１２５和ＸｕＨ表现出较强的特异性接种诱发坏死反应，ＺＨ和Ｔ３５０２８坏死反应中等，ＱＬＭ、Ｃ０２０和Ｃ１６１的坏死反应较弱。培养基中添加植物生长调节剂（６ＢＡ或ＮＡＡ）可降低坏死程度，提高嫁接成功率，水杨酸处理或去掉健株砧木叶片和根系皆加重坏死反应程度。用病接穗嫁接抗病的ＱＬＭ无性系时，用ＰＣＲ检测到侵染砧木的植原体，但未表现丛枝症状，而将此无性系健康接穗嫁接到丛枝病砧木上时可诱致典型丛枝症状，从而表...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
林木兰 石小岩 梁世平 张春立
以菟丝子(Cuscuta australis)为媒介,将泡桐丛枝病(Paulownia witches broom)类菌原体(Mycoplasma—like organisms,MLO)接种至长春花上(Vinca rosea),对感病长春花施用激动素(Kinetin)后,结果表明,叶片韧皮部MLO显著减少,叶绿体形态结构正常,没有出现病株所出现的空腔;叶绿素和类葫罗卜素合成量是未施激动素病株的6.8倍和7.3倍;核酸合成量也显著增多。
关键词：
泡桐丛枝病类菌原体 激动素 叶绿体 核酸
[期刊] 林业科学研究
[作者]
王克日 庞辉
泡桐组培苗丛枝病原体ＰＣＲ检测王克日，庞辉关键词泡桐，类菌原体，ＰＣＲ检测泡桐（Ｐａｕｌｏｗｎｉａｓｐｐ．）是优良的速生用材树种，在我国总栽植量达１１亿株。泡桐丛枝病是泡桐最重要的病害，在我国泡桐主栽区，平均发病率约５０％，造成严重的危害［１］，已成...
关键词：
泡桐,类菌原体,PCR检测
[期刊] 林业科学
[作者]
李江山 金开璇 汪跃 熊耀国 邱并生
An oligonucleotide primer set (PaF/PaR) was designed for polymerase chain reaction (PCR) amplification of an approximately 1. 2kb fragment DNA from Paulownia Witches' broom(PaWB) MLO on the basis of 16S rRNA sequence from O-MLO. Amplification of a 1. 2kb DNA fragment from PaWB-MLO-infected plants D...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
宋晓斌 郑文锋 张学武 马松涛
通过类菌原体ＭＬＯ侵入泡桐筛管，引起寄主细胞变化的观察和对细胞差别透性的分析、病健组织结构的观察，研究了ＭＬＯ侵入泡桐后对寄主组织和细胞的影响。结果表明：ＭＬＯ的侵入使筛管细胞产生胼胝质，胼胝质的聚集堵塞了筛板孔和由胞间连丝连接筛管与相邻细胞的通道，使得皮部细胞的差别透性增大，木质部的差别透性减小，形成层相对厚度变薄。
关键词：
泡桐,类菌原体,细胞差别透性
[期刊] 华北农学报
[作者]
高武军 魏开发 孙富丛 卢龙斗 王景雪
以油菜下胚轴和玉米的幼胚为材料,研究19,22,25,28和31℃5个培养温度对含有Bar基因和几丁质酶基因的根癌农杆菌菌株LBA4404的转化效率的影响。结果表明,温度对玉米、油菜的转化效率都有明显的影响,玉米和油菜转化的最佳温度为25℃;25℃条件下,玉米的转化效率与其余4个温度条件下的转化效率有显著的差异;22℃条件下的油菜转化效率和25℃下的差异不显著。
关键词：
温度 根癌农杆菌 转化效率
[期刊] 林业科学研究
[作者]
田国忠 温秀军 李永 孙朝晖 赵玉芬 郭晓军 黄钦才 李志清 赵俊芳
分别从河北唐县赞皇大枣、辽宁凌源梨枣和河南濮阳扁核酸3个品种的枣疯病和来自山东、江西和北京的不同无性系的泡桐丛枝病树上采集丛枝枝条作为组织培养材料,获得的枣疯病和泡桐丛枝病组培苗皆表现典型的丛枝症状。其中感染植原体的赞皇大枣组培苗(Ft)和扁核酸组培苗(HPD)在未加任何激素的MS培养基和其它培养基交替继代培养1a以上仍能维持丛枝苗生长;而发病梨枣(LD)除产生丛枝外,还出现叶片黄化和植株矮化、枯梢等衰退症状。泡桐丛枝病植原体可在不同无性系组培苗上通过各种培养基交替和单纯的MS培养基继代培养,并已在实验室内连续保藏达10a,其引致丛枝症状的能力无明显的改变。用枣树Ft染病材料作接穗,以健康冬枣...
[期刊] 林业科学
[作者]
张锡津 田国忠 黄钦才
将患有丛枝病的泡桐组培苗进行温度处理，结合茎尖培养用来脱除病原ＭＬＯ。结果表明，在４５℃下，病茎段２４—４８小时内脱水枯死；在４０℃下３周内病苗黄化枯萎；但在３０℃和２５℃处理的茎段萌发新枝条仍表现典型丛枝症状。而在３５℃下处理的茎段，１周后，新生长茎叶外观恢复正常，继续处理至８０天，植株仍能正常生长。组织经ＤＡＰＩ染色后荧光显微镜检查显示出在３５－４０℃下处理的病苗体内ＭＬＯ４周之内的变化和降解情况。分别剪取３５℃下处理２９、３３、５５和８０天的组培苗０．５ｃｍ的茎尖，转入ＭＳ培养基或改良的ＭＳ培养基上，在２５℃下培养，长成的组培苗一直生长正常。荧光显微镜和电镜检察结果均显示病原ＭＬＯ已被脱...
[期刊] 林业科学
[作者]
范国强 张胜 翟晓巧 刘飞 董占强
The effects of different concentrations of 5-fluorouracil, rifampicin and tetracycline on the phytoplasmas in the Paulownia tomentosa?Paulownia fortunei seedling and the pathogenic protein related to the witches' broom symptom were studied with PCR based on 16S rRNA gene of the phytoplasmas and 2-di...
关键词：
泡桐 丛枝病 蛋白质 双向电泳 PCR
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张磊 韩翔 李正男 吴云锋 韩崇选
【目的】利用分子生物学方法分析泡桐丛枝植原体转运蛋白secY基因及转录延伸因子nusA基因,从亚组水平上确定陕西泡桐丛枝植原体的分类地位。【方法】采集陕西杨凌、彬县、旬邑、永寿、周至和宝鸡等6个泡桐栽培区的泡桐丛枝样品,提取病样总核酸;设计引物对secY-F/R和nusA-F/R,对泡桐丛枝植原体secY、nusA基因进行PCR扩增及核苷酸序列测定与系统发育分析。【结果】获得了泡桐丛枝病植原体secY基因序列的全长,大小为1 358bp,编码414个氨基酸;获得了部分nusA基因序列,大小为946bp,编码315个氨基酸。序列同源性分析结果表明,陕西各县区泡桐丛枝植原体的secY、nusA基因...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
孙玉宏 韩长磊 张椿雨 肖勇 曾红霞 彭金光 代书桃 孟金陵
利用包含双元载体pBI121的农杆菌LBA4404转化西瓜子叶外植体,获得转基因西瓜植株。结果表明:转化受体材料西瓜品种早花、克伦生、黑美人母本F23的分化效率没有明显差别;外植体浸染菌液10 min的处理较为合适;125 mg/L卡那霉素和300 mg/L羧苄青霉素适合于外植体筛选培养。通过PCR检测获得了3株转基因植株,转化效率为1.5%,其中只有2株整合了gus报告基因。Southern杂交和gus染色检测证明2株的基因组中整合了外源基因,报告基因在植株T0-1-3后代呈现3∶1分离。
关键词：
西瓜 转化 农杆菌 gus 转基因植株
[期刊] 农业现代化研究
[作者]
肖媛 李落叶 徐孟亮 崔延春 夏新界
以水稻两用不育系培矮64S成熟胚为外植体,以不同组合培养基为诱导和继代培养基,建立了适合水稻培矮64S转化的高效再生体系,并通过农杆菌EHA105介导,将大肠杆菌C1基因转入培矮64S,获得再生植株。结果表明,J0N1D3为合适的愈伤组织诱导培养基,诱导率达56.44%;通过潮霉素筛选后,获得的抗性愈伤组织分化率为73.08%,经分化,获得133株再生植株;随机挑选67株再生植株经PCR检测,其中46株检测到目的条带,阳性检出率占68.66%;对PCR阳性植株进行荧光定量实时PCR分析,结果表明C1基因能在转基因植株中表达。通过对T1代PCR分析,得到目的条带,表明C1基因能在转基因后代稳定遗...
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