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[期刊] 中国农业科学
[作者]
吴关庭 陈锦清 胡张华 郎春秀 陈笑芸 王伏林 金卫 夏英武
为改良草坪型高羊茅(Festuca arundinacea Schreb.)的耐逆性,以成熟种子来源的胚性愈伤组织为受体材料,通过农杆菌介导法将拟南芥(Arabidopsis thaliana)耐逆相关CBF1基因导入4个供试品种的基因组,经GUS染色、PCR检测和Southern杂交分析验证,获得了112株转基因植株,转化频率为0.92%~2.87%,不同品种间存在差异。试验表明,在高盐与高渗胁迫下,转基因植株具有显著生长优势,存活率极显著高于非转化对照植株,经低温、高温、干旱和高盐等逆境胁迫处理后的叶片相对电导率平均较对照植株低25%~30%,证明转基因植株的耐逆性有所增强。考察发现,非胁...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
孙玉宏 韩长磊 张椿雨 肖勇 曾红霞 彭金光 代书桃 孟金陵
利用包含双元载体pBI121的农杆菌LBA4404转化西瓜子叶外植体,获得转基因西瓜植株。结果表明:转化受体材料西瓜品种早花、克伦生、黑美人母本F23的分化效率没有明显差别;外植体浸染菌液10 min的处理较为合适;125 mg/L卡那霉素和300 mg/L羧苄青霉素适合于外植体筛选培养。通过PCR检测获得了3株转基因植株,转化效率为1.5%,其中只有2株整合了gus报告基因。Southern杂交和gus染色检测证明2株的基因组中整合了外源基因,报告基因在植株T0-1-3后代呈现3∶1分离。
关键词：
西瓜 转化 农杆菌 gus 转基因植株
[期刊] 华北农学报
[作者]
张艳敏 郭北海 丁占生 温之雨 蒋春志 李辉 李洪杰 陈受宜
针对农杆菌转化系统的诸多影响因素进行了系统研究,建立了有效的小麦农杆菌转化系统;利用石4185、石6365的花药愈伤组织为受体,进行了甜菜碱醛脱氢酶和胆碱氧化物酶等目的基因的转化研究。
关键词：
小麦 农杆菌 转基因 转化效率
[期刊] 中国农业科学
[作者]
叶兴国 Shirley Sato 徐惠君 杜丽璞 Tom Clemente
以预培养 4 d的小麦幼胚愈伤组织为受体 ,L B培养基上激活培养 3 d或 AB培养基上激活培养 4 d,并在WCC培养基中重悬的 C5 8c1农杆菌菌系为供体 ,将含有目的基因、标记基因的 p PTN2 4 9、p PTN 2 5 4、p PTN2 70、p SIS-GFP等重组 DNA质粒转入了小麦 ,经在含 10～ 5 0 mg/ L geneticin( G4 18)、5 0 mg/ L cefotaxime、5 0 m g/ L vancomycin、5 0 m g/ L ticillicin选择培养基上多次选择 ,移栽前利用 npt EL ISA检测 ,移栽后利用叶片离体退绿、P...
关键词：
小麦 农杆菌 转基因植株 单拷贝整合
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王新颖 文晓鹏 胡鹏
以贵州珍珠半夏Pinellia ternate(Thunb.)Breit为材料,采用根癌农杆菌介导法,探索了影响半夏遗传转化效率的主要因子。结果表明,卡那霉素的最佳筛选浓度是100 mg/L,侵染时间、共培养时间、乙酰丁香酮浓度对转化频率都有一定的影响。其中侵染时间为20 min,共培养时间为3 d,乙酰丁香酮的浓度控制在60~100 mg/L时可以有效提高遗传转化效率。在此基础上辅以超声波处理5 min,可以有效提高叶柄转化的瞬时表达率。对抗性转化植株进行Gus染色和PCR检测,结果表明外源基因ipt已经整合到半夏基因组中。
[期刊] 华北农学报
[作者]
梁雪莲 孙毅 郭平毅 刘惠民 刘少翔 王景雪 解志红
用农杆菌转化小麦授粉10d后的幼胚,经5‰PPT筛选获得大量正常再生植株。PCR及PCR Southern杂交检测证明其中23%(18株)再生苗为转化bar基因植株,这些植株可明显提高对basta的抗性。还总结了农杆菌转化小麦幼胚高效获得转基因再生植株的处理程序。
关键词：
农杆菌 转化 小麦 幼胚 bar基因
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
马洪亮 杨瑞芳 潘刚 张晓波 黄海清 凃巨民
通过农杆菌介导法将Bt融合型基因cry1Ab/cry1Ac导入籼稻温敏核雄性不育系03B198S和03B199S的愈伤组织,经过多轮潮霉素筛选,获得了一批独立转化体,同时,从每一个独立转化体至少再生出5株绿苗。经PCR、RT-PCR检测证实该Bt融合型基因已整合到部分受体基因组中,并表现出不同程度的表达。这些阳性转基因植株在异地异季低温条件下割蔸栽植,部分恢复可育,且表现出很强的抗螟虫性能。
关键词：
籼稻 温敏核雄性不育系 Bt基因
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
章镇 孙爱君 房经贵 盛炳成
通过根癌农杆菌介导手段 ,将来自发根农杆菌的rolC基因转化到烟草 (Nicotianatabacum )植株的基因组 ,并借助GUS组织化学法 ,PCR扩增法和Southern杂交进行了鉴定证实。rolC基因改变转基因烟草植株某些性状的特点 ,如植株高度变矮、花冠变小、雄蕊变短等 ,还发现rolC基因具有延迟转基因烟草植株花期的作用
关键词：
烟草 农杆菌 rolC基因 转化
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
乔桂荣 栾维江 潘红伟 卓仁英
随着我国林业生态工程和退耕还林的开展,木材生产与需求之间的矛盾愈加严重,培育速生优质大径材的研究更加重要。基于LEAFY基因在植物生长发育中的特性,利用PCR和Gateway技术构建了含有LEAFY基因保守序列的RNA干涉植物表达载体LFY-RI,利用根瘤农杆菌Agrobacterium tumefaciems介导法获得转基因植株,利用RNA干涉技术抑制转基因植株中LEAFY基因的表达,从而获得枫香Liquidambar formosana不育转基因植株。并利用聚合酶链式反应(PCR)技术和PCR-Southern杂交技术检测了转基因植株中外源基因整合情况。共获得了5株枫香转基因植株,分子检测...
[期刊] 华北农学报
[作者]
董云洲
构建了 Imtl(Inositol methyltransferase,肌醇甲基转移酶)基因的高效植物表达载体pDH01。通过农杆菌介导的遗传转化法,得到了转基因植株。将收获的转基因 F_1烟草种子,发芽后以1.5％NaCl溶液浇灌,转Imtl基因烟草后代具有明显的耐盐能力,在株高、单株鲜重、生长势等指标上具有显著优势。
关键词：
烟草 肌醇甲基转移酶 转基因 耐盐性
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
万丙良 张献龙
以质粒pBI12 1作外源DNA ,对基因枪介导转化水稻花药愈伤的有关参数进行了优化 ,优化值分别为射程 9cm ,枪膛氦气压力 110 0psi,真空度 36 0 0～ 3733Pa ,轰击次数 2次。轰击前后愈伤经 0 .4mol/L甘露醇处理可提高转化效率。在优化条件下将Xa2 1基因导入籼型光敏核不育水稻W945 1S ,获得了单倍体植株 ,经人工染色体加倍得倒二倍体转基因植株。白叶枯病菌接种鉴定结果表明其抗性有明显提高
关键词：
水稻 花药愈伤 基因枪 转基因
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
欧阳波 李汉霞 张俊 叶志彪
通过根癌农杆菌介导转化番茄 (LycopersiconesculentumMill.)下胚轴 ,将外源双价基因导入番茄 ,获得了一批卡那霉素抗性苗 ,经PCR检测证明外源基因已经整合到番茄基因组中。研究表明番茄下胚轴是良好的遗传转化受体 ,具有操作简便 ,节省番茄材料和再生速度快的特点。烟草细胞看护培养能够提高外植体的转化效率和减少农杆菌对外植体的污染
关键词：
番茄 下胚轴 转化再生
[期刊] 中国农业科学
[作者]
霍秀文 云锦凤 米福贵 魏建华 张辉
【目的】利用基因工程技术对冰草属植物进行遗传改良在国内外尚属空白,为加快冰草属植物种质改良进程,培育更为优良的冰草品种,本研究在多年冰草种质资源搜集与育种的基础上,开展冰草基因工程研究。【方法】以冰草属(Agropyron Gaertn.)中的一个优质种间杂种–“蒙农杂种”冰草(A.cristatum×A.desertorum cv.‘Hycrest-Mengnong’,)为材料,在以幼穗为外植体建立的冰草组织培养再生体系基础上,以调控脯氨酸生物合成最后一步的关键酶的突变体基因p5CS为目标基因,bar基因为筛选标记基因,进行共转化,利用基因枪轰击冰草幼穗诱导的愈伤组织。【结果】获得转基因植株...
关键词：
冰草 p5CS基因 共转化 转基因植株
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨丽娜 刘捷 庄智敏 章镇 周蓓蓓 陶建敏
以‘美人指’葡萄离体叶片及叶柄为农杆菌介导转化Barnase基因的受体,对农杆菌侵染时间、共培养时间、预培养时间、卡那霉素选择压以及头孢霉素浓度等因素进行了研究。结果表明:最佳的农杆菌介导‘美人指’葡萄遗传转化体系为农杆菌侵染4 min,共培养3 d,预培养3 d,卡那霉素选择压3.0 mg.L-1,头孢霉素质量浓度250 mg.L-1。采用此体系对‘美人指’葡萄进行转化,共获得了12株抗性苗,农杆菌感染后的不定芽再生率为1.78%。利用GUS组织化学染色、PCR扩增的方法进行检测,结果表明,其中只有2株GUS染色呈阳性,阳性率为16.67%;有3株通过了PCR检测,初步证实Barnase基因...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
何业华 熊兴华 林顺权 吴会桃 林良斌 何钢 陈建华
以枣树鲜食品种鸡蛋枣为材料,通过根癌农杆菌介导ACC合成酶反义基因转化,得到了转基因植株.预培养1d的枣树幼嫩茎段经根癌农杆菌感染后共培养3d,转移至分化选择培养基MS(1/2NO3)+0.15mg/LNAA+1.75mg/LZT+10mg/LKm+500mg/LCarb上诱导产生不定芽,将抗Km不定芽先后在15mg/LKm的生长、增殖和生根培养基上继续选择,诱导成完整植株.经PCR检测从抗Km植株中选择到7株阳性植株,进一步经Southern杂交证实有6株外源基因已整合到了枣树基因组中.Real timePCR定量检测表明,ACC合成酶反义基因在5株转基因植株中得到表达.
关键词：
枣树 ACC合成酶反义基因 转化
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