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[期刊] 西南农业学报
[作者]
王建辉 刘建军 陈克玲 李洪雯 何建 关斌
本研究以‘丰香’草莓(Fragaria ananassa cv. Toyonoka)试管苗叶片为外植体材料,运用根瘤农杆菌(包含pBI121-DHN)介导法转‘丰香’草莓,构建青稞(Hordeum vulgere L. var. nudum Hook. f.)脱水素基因(dhn4)编码区的过量表达载体pBI121-DHN。结果表明,经过抗生素筛选,获得再生草莓植株,提取转基因草莓叶片DNA,经PCR扩增,获得预期大小的外源插入片段。此"丰香"草莓转基因技术,为未来开展生物技术育种打下了基础。
关键词：
青稞 脱水素 草莓 转基因
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
谢志兵 钟晓红 邓子牛
为了得到优良的草莓抗病植株,采用根癌农杆菌介导法进行几丁质酶基因(chit42)对草莓叶片的转化,对转化过程中的一些因素进行研究,并得到了转化最优方案:乙酰丁香酮AS浓度80~120μmol/L,10~20 min侵染,3 d共培养.经PCR检测初步鉴定外源基因已经导入.
关键词：
草莓 几丁质酶基因 转化
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
吴晓庆 谭华山 张静静 包满珠 傅小鹏
以石竹(Dianthuschinensis)叶片为外植体,通过根癌农杆菌介导的遗传转化体系,转ACO基因获得花期延长的石竹材料.结果表明:以MS为基本培养基,BA和NAA质量浓度分别为1.0、0.3 mg/L时,供试材料H58II、X82I和H68Ⅲ分化率较高,分别为56.9%、31.7%、93.2%;遗传转化筛选过程中,Kan、Hyg、Cef的最适筛选质量浓度分别为40、4和400mg/L;染色检测表明,转化成功的叶片或植株染色后呈现蓝色;PCR检测转ACO基因植株,阳性率达到89%.田间观察转ACO基因植株的瓶插花期和单朵花期可达到12d,比未转ACO基因植株的花期(6d)增加1倍;转AC...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
孟楠 刘月学 孙立茹 杜安楠 李贺 张志宏
利用农杆菌注射法对草莓果实细胞进行了转化研究。以草莓(Fragaria×ananassa)品种丰香和红脸颊为试材,研究了农杆菌菌株的种类及其浓度、不同注射部位、果实发育时期和草莓基因型对转化效率的影响。结果表明:选用菌液OD600值为2.4的EHA105菌株,取花后19d大小的果实,从果蒂部位进行注射时转化效果最好,GUS染色率可达95%。本研究初步建立了能使外源基因在草莓果实细胞中高效表达的注射法转化体系,是草莓果实发育特性相关基因功能鉴定的可行方法。
关键词：
草莓果实 GUS表达 农杆菌注射 转化
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
章镇 孙爱君 房经贵 盛炳成
通过根癌农杆菌介导手段 ,将来自发根农杆菌的rolC基因转化到烟草 (Nicotianatabacum )植株的基因组 ,并借助GUS组织化学法 ,PCR扩增法和Southern杂交进行了鉴定证实。rolC基因改变转基因烟草植株某些性状的特点 ,如植株高度变矮、花冠变小、雄蕊变短等 ,还发现rolC基因具有延迟转基因烟草植株花期的作用
关键词：
烟草 农杆菌 rolC基因 转化
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
乔桂荣 栾维江 潘红伟 卓仁英
随着我国林业生态工程和退耕还林的开展,木材生产与需求之间的矛盾愈加严重,培育速生优质大径材的研究更加重要。基于LEAFY基因在植物生长发育中的特性,利用PCR和Gateway技术构建了含有LEAFY基因保守序列的RNA干涉植物表达载体LFY-RI,利用根瘤农杆菌Agrobacterium tumefaciems介导法获得转基因植株,利用RNA干涉技术抑制转基因植株中LEAFY基因的表达,从而获得枫香Liquidambar formosana不育转基因植株。并利用聚合酶链式反应(PCR)技术和PCR-Southern杂交技术检测了转基因植株中外源基因整合情况。共获得了5株枫香转基因植株,分子检测...
[期刊] 华北农学报
[作者]
钟鸣 黄国涛 白丽萍 张丽 马慧 张立军 郭志富
根据植物转基因载体的特点和局限性,利用几种商业化载体进行克隆、酶切和重组,从而重构方便快捷的转基因植物表达载体。首先用PCR方法从pCAMBIA 1301质粒中扩增到含启动子CaM35S、完整GusA基因和终止子NOS三部分的片段,经TA克隆重组入pGM-T载体中获得pGM-35S-GUS-NOS重组质粒。然后对来源于新疆沙冬青的抗寒基因AnGPAT片段和pGM-35S-GUS-NOS重组质粒进行双酶切,连接获得中间载体pGM-35S-GPAT-NOS。再对中间载体和双元真核表达载体pCAMBIA 2300双酶切后连接,转化入大肠杆菌和农杆菌。经PCR、酶切及测序鉴定后确认得到改造后的植物表达...
关键词：
转基因 表达载体 载体改造 新策略
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
施利利 孙宗修 王松文 蔡宝立 张欣 刘霞 郭玉华
以2个北方粳型恢复系津稻162和津稻18为受体,经农杆菌EHA105/pDSBar1300转化,分别获得77和55个转植株。用0.25%浓度的Basta对转基因在T0代进行了涂布试验,其抗性植株率分别为92%和78%,对除草剂抗性转基因株系做PCR检测,均能扩增出400bp的Bar基因特异条带,证明外源基因已整合到水稻基因组中。对转基因T1代进行潮霉素抗性鉴定,大多数转基因株系表现为3∶1的分离比。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
孙玉宏 韩长磊 张椿雨 肖勇 曾红霞 彭金光 代书桃 孟金陵
利用包含双元载体pBI121的农杆菌LBA4404转化西瓜子叶外植体,获得转基因西瓜植株。结果表明:转化受体材料西瓜品种早花、克伦生、黑美人母本F23的分化效率没有明显差别;外植体浸染菌液10 min的处理较为合适;125 mg/L卡那霉素和300 mg/L羧苄青霉素适合于外植体筛选培养。通过PCR检测获得了3株转基因植株,转化效率为1.5%,其中只有2株整合了gus报告基因。Southern杂交和gus染色检测证明2株的基因组中整合了外源基因,报告基因在植株T0-1-3后代呈现3∶1分离。
关键词：
西瓜 转化 农杆菌 gus 转基因植株
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王旭达 丰明 王鹤 张高华
通过农杆菌介导的方式将獐茅液泡膜Ｎａ～＋／Ｈ～＋逆向转运蛋白基因（ａｌＮＨＸ）表达在马铃薯中，并对影响马铃薯转化的几种因素（抗生素浓度、农杆菌菌液浓度、共培养时间等）进行优化。结果表明：最适农杆菌菌液浓度是ＯＤ６００＝０．６，最适侵染时间是５ｍｉＮ，最适共培养时间是２Ｄ，马铃薯转化中最适头孢霉素浓度是４００ｍｇ／ｌ；经ＰＣＲ检测确认的转基因马铃薯植株在含０．７％ＮａＣｌ的培养基中可以生长，而野生型马铃薯无法在此培养基中正常生长。在盐胁迫条件下，转基因马铃薯的Ｎａ～＋、Ｋ～＋含量及Ｋ～＋／Ｎａ～＋的比值均高于野生型马铃薯。研究证实马铃薯植物的的耐盐性可以通过农杆菌转化导入獐茅液泡膜Ｎａ～＋／Ｈ～．．．
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王世全 李平 刘熔山
以水稻的两个亚种籼稻和粳稻作为受体, 比较了不同外值体、vir诱导物等对根癌农杆菌转化的影响, 建立了农杆菌介导的水稻高效转基因实验体系。依据该体系,以粳籼DREW 的幼愈伤组织和籼稻D汕B的幼穗愈伤组织为受体,经农杆菌AGL1/pCAMBIA1301转化后, 获得了超过50% 的潮霉素抗性愈伤筛选率, 并获得再生植株。
关键词：
根癌农杆菌 水稻 基因转化 再生植株
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
谢玉明 郭琛 张家银 韩健 袁飞荣 邓子牛
以枳壳(Poncirus trifoliate(L.)Raf.)实生苗上胚轴为试材,利用农杆菌介导法将光敏色素基因phyB导入其中,建立了枳壳实生苗的遗传转化体系,共获得27株抗性植株,PCR检测结果表明其中有5株扩增出phyB基因的特异目的带;RT-PCR分析结果表明phyB基因在phyB3,phyB4株系枳壳基因组中能表达;Li-6400光合测定仪对转基因枳壳进行的光合特性测定结果显示,转基因枳壳光合效率高于对照;转phyB基因枳壳植株在形态上与对照也存在差异,表现出植株矮化、节间缩短、叶面积变小.
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘静 李湘利 徐继忠 邵建柱
以嘎拉苹果叶片为外植体,利用GUS瞬时表达率,对农杆菌介导法转化苹果的因素进行优化。结果表明:卡那霉素(Km)选择压在30 mg/L时,外植体预培养2~3 d后以OD600=0.3~0.5农杆菌菌液浸泡3~5 min,共培养3 d,延迟筛选3 d可明显提高M26叶片转化效率,GUS阳性率达50%。PCR检测初步证明,LFY基因已整合到苹果再生植株中。
[期刊] 华北农学报
[作者]
李俊兰 张寒霜 高鹏 王海波
以棉花无菌苗下胚轴为外植体 ,通过愈伤组织培养 ,使供试的 2 0个棉花新品种 (系 )中 19个培养出体细胞胚或再生植株。在此基础上 ,选用易获得再生植株的邯 93- 2、邯无 2 0 31、衡无89- 30、C2 0 1、C312 ,利用农杆菌介导转化Bt基因 ,抗卡那霉素愈伤组织诱导率约为 5 0 % ,其中约 4 0 %表现GUS阳性。从邯 93- 2GUS阳性愈伤中获得再生植株 ,其 5 0 %呈GUS阳性 ,且Bt基因的导入经Southern杂交验证。
关键词：
农杆菌介导 棉花 基因转化
[期刊] 华北农学报
[作者]
孟玉平 曹秋芬 周慧 杜建中 曹尚银
用农杆菌介导法对苹果品种嘎拉转化FT基因进行了研究,建立了苹果离体叶片高效再生体系,在含BA 5mg/L+IAA 0.5 mg/L的MS培养基上,以离体叶片远轴面(叶背面)向上,经过14 d的暗培养获得再生不定芽和再生植株,再生率达97%。在转基因再生体系中,以头孢噻肟钠500 mg/L和卡那霉素5 mg/L,作为脱菌培养和选择培养的条件,经过感染携带拟南芥FT基因的农杆菌,获得了一批转FT基因的植株,经PCR检测,目的基因已经整合到苹果基因组中。
关键词：
苹果 农杆菌 FT基因 遗传转化
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