- 年份
- 2024(4666)
- 2023(6685)
- 2022(5527)
- 2021(5142)
- 2020(4382)
- 2019(9680)
- 2018(9841)
- 2017(18123)
- 2016(10112)
- 2015(11533)
- 2014(12054)
- 2013(11391)
- 2012(10995)
- 2011(9670)
- 2010(10006)
- 2009(9341)
- 2008(9284)
- 2007(8824)
- 2006(7775)
- 2005(7041)
- 学科
- 济(42408)
- 经济(42361)
- 管理(30938)
- 业(28816)
- 企(23193)
- 企业(23193)
- 方法(19005)
- 数学(16585)
- 数学方法(16303)
- 技术(12906)
- 中国(11805)
- 农(11239)
- 学(11148)
- 财(10423)
- 制(9124)
- 地方(8410)
- 理论(8373)
- 业经(7867)
- 农业(7776)
- 体(7634)
- 贸(7175)
- 贸易(7169)
- 银(7163)
- 银行(7135)
- 易(6972)
- 融(6923)
- 金融(6916)
- 行(6827)
- 技术管理(6765)
- 教学(5855)
- 机构
- 学院(148213)
- 大学(148164)
- 济(57852)
- 经济(56430)
- 研究(54170)
- 管理(51561)
- 理学(43332)
- 理学院(42811)
- 管理学(41715)
- 管理学院(41445)
- 中国(40683)
- 科学(35104)
- 京(33360)
- 农(29565)
- 所(29013)
- 财(27160)
- 研究所(26261)
- 中心(25127)
- 江(24596)
- 业大(24228)
- 农业(23480)
- 北京(20917)
- 财经(20850)
- 技术(20718)
- 院(19858)
- 范(19577)
- 师范(19262)
- 州(19173)
- 经(18843)
- 省(18646)
- 基金
- 项目(96412)
- 科学(73944)
- 研究(68498)
- 基金(67411)
- 家(60622)
- 国家(60155)
- 科学基金(49814)
- 社会(41738)
- 社会科(39544)
- 社会科学(39537)
- 省(38814)
- 基金项目(34388)
- 划(32452)
- 教育(32407)
- 自然(32123)
- 自然科(31454)
- 自然科学(31442)
- 自然科学基金(30821)
- 资助(28810)
- 编号(27747)
- 成果(23488)
- 重点(22326)
- 部(20904)
- 发(20647)
- 课题(20349)
- 创(20117)
- 创新(19008)
- 计划(18531)
- 科研(18114)
- 国家社会(17629)
共检索到235904条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
庞建虎 乔龙亮 朱鹏 高威芳 章礼萍
有别于费力和费时的传统病原体检测方法,基于靶基因的分子生物学检测方法以其快速和灵敏的特点逐渐成为现代水产病原体检测的首选.在众多分子生物学检测方法中,尤以核酸等温扩增技术备受关注.本文对各种核酸等温扩增技术在水产病原体检测中的应用进行了综述,阐述了各种核酸等温扩增技术的原理,对比分析了各种核酸等温扩增技术的优劣,介绍了该技术在水产病原体检测中的应用现状,展望了该技术的发展趋势,旨在促进我国水产病原体现场快速检测技术的发展.
关键词：
核酸等温扩增 水产病原体 快速检测
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
戴婷婷 陆辰晨 郑小波
环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)采用特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶,在等温条件(60~65℃)下60 min左右进行核酸扩增,其扩增效率可达到109~1010个数量级,具有特异性强、灵敏度高、等温、操作简单和检测结果快速等优点。该技术已广泛应用于病毒、细菌、寄生虫、菌物等病原物的检测中,在人、畜和植物病原生物的快速检测和病害诊断等领域具有广阔的应用前景。本文对LAMP技术原理及其在病原物检测中的应用做了简要综述,并对LAMP技术的应用前景进行了展望。
关键词：
环介导等温扩增技术 应用 检测 病原物
[期刊] 林业科学
[作者]
戴婷婷 吴小芹
【目的】棕榈疫霉是农林业生产上的一种危害严重的病原菌，建立棕榈疫霉的快速分子检测技术对于预测疫病发生情况、及时采取有效的防治方法控制疫病的传播和流行、减少经济损失具有重要意义。【方法】采用环介导等温核酸扩增技术（ｌｏｏｐ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｌａｍｐ），建立了以基因间隔区（ｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃ ｓｐａｃｅｒ，ｉｇｓ）为靶标的快速、简单、特异和灵敏的棕榈疫霉菌的检测方法。以ｉｇｓ基因为靶序列，利用环介导等温核酸扩增技术，设计了多组ｌａｍｐ引物，同时建立并优化了ｌａｍｐ反应体系与条件，最终筛选出１组扩增反应结果较好的ｌａｍｐ引物，采用该组引物进行特异．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李庆玲 沈丹宇 于佳 赵媛媛 朱也 窦道龙
[目的]建立一种快速、准确的检测瓜果腐霉菌(Pythium aphanidermatum)的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,为诊断和防治瓜果腐霉菌引起的植物病害提供技术支撑。[方法]通过比较基因组学方法,在瓜果腐霉菌基因组上筛选有序列特异性的基因作为检测的靶标基因,设计LAMP特异性引物,建立一种基于颜色判定的快速、准确的LAMP检测方法,随后对该检测方法的特异性、灵敏度和发病组织实际检测等进行分析评价。[结果]鉴定到1个编码T
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
贾蒙骜 陈兴江 林叶春 商胜华
针对烟草青枯病的防控,开发快速、高效的病原菌检测方法是必要的。环式等温扩增(LAMP)是一种在等温条件下快速完成靶标基因扩增的新方法。将青枯病菌贵州分离株FQY4基因组序列(NCBI号:CP004013)与其他已发表菌株序列比对分析,确定编码鞭毛蛋白的fliC基因的保守区域可被选作检测靶标。根据LAMP原理以及靶标序列的特点,设计了一组由6条引物组成的环式等温扩增反应体系。结果表明:61℃条件下孵育45min,可完成对青枯病病原菌单菌落和带菌烟草叶片的检测,结果判定可以通过颜色变化被肉眼直接识别,也可以通过琼脂糖凝胶电泳检测。通过这种新方法,可以实现对青枯病菌菌落的快速鉴别,还可以用于对田间疑...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
田擎 曾丹丹 李彬 张海峰 王源超 郑小波
［目的］黑白轮枝菌（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ａｌｂｏ－ａｔｒｕｍ）能够危害苜蓿等多种作物，是我国重要的检疫性病原真菌。我们基于环介导等温扩增技术（ｌｏｏｐ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｌａｍｐ），建立基于颜色判定的简单、快速和灵敏的黑白轮枝菌检测方法。［方法］基于ｌａｍｐ技术，通过比对分析黑白轮枝菌与其相似种不同靶标序列间的差异，选取ｔｕｂ（β－ｔｕｂｌｉｎ，编码β－微管蛋白）基因作为靶标基因，设计并筛选了４条特异性强、灵敏度高的ｌａｍｐ引物和１条环引物，在此基础上建立了检测黑白轮枝菌的ｌａｍｐ体系，并进行特异性、灵敏度试验及田间发病组织的检测。该方法．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
戴婷婷 陆辰晨 沈浩 王源超 郑小波
应用环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了基于颜色判定的简单、快速和灵敏的橡树疫霉菌(Phytophthora ramorum)检测方法。以ITS为靶序列对橡树疫霉菌的分子检测存在无法区分近似种的问题,笔者在橡树疫霉菌的基因组研究中,发现了PrA3aPro类转座子序列。生物信息学分析表明,该序列非常适合作为大豆疫霉分子检测的靶标。利用LAMP技术,以PrA3aPro为靶序列,设计LAMP特异性引物,建立LAMP反应体系与条件,并进行灵敏度和特异性试验。结果表明:整个检测过程仅需1 h,即可通过肉眼直接目测试验结果。...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
王克日 庞辉
泡桐组培苗丛枝病原体ＰＣＲ检测王克日，庞辉关键词泡桐，类菌原体，ＰＣＲ检测泡桐（Ｐａｕｌｏｗｎｉａｓｐｐ．）是优良的速生用材树种，在我国总栽植量达１１亿株。泡桐丛枝病是泡桐最重要的病害，在我国泡桐主栽区，平均发病率约５０％，造成严重的危害［１］，已成...
关键词：
泡桐,类菌原体,PCR检测
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
曾丹丹 张海峰 田擎 许苗 王源超 郑小波
［目的］通过对黄淮地区大豆种子带菌的快速检测，了解该地区大豆种子携带病原菌的情况。［方法］采用环介导等温扩增技术（ｌｏｏｐ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｌａｍｐ）检测黄淮地区２９个大豆主栽品种种子上平头炭疽菌、胶孢炭疽菌、尖镰孢菌、木贼镰孢菌、层出镰孢菌、黄色镰孢菌、禾谷镰孢菌、茄腐镰孢菌、大豆拟茎点种腐病菌、立枯丝核菌、大豆炭腐病菌、冬青丽赤壳菌、大豆疫霉病菌等大豆主要病原菌的携带情况。［结果］供试的２９个品种中有２０个品种的种子样本检出携带上述病原菌，分别携带所检测的１３种病原菌中的７种，检出率由高到低依次为平头炭疽菌、大豆拟茎点种腐病菌、木贼镰孢菌．．．
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
陈旭 毛瑞 李堂正 乔宇 彭晴 杜昱光
食源性致病菌污染是食品安全问题的重要隐患之一,沙门氏菌是食品中最常见的食源性致病菌。为快速检测食品中的沙门氏菌,满足食品生产过程中实时检测监控的需要,基于竞争性互补介导核酸恒温扩增(competitive annealing mediated isothermal amplification,CAMP)技术,建立一种操作简便、准确性高、灵敏度高的沙门氏菌快速检测方法。以沙门氏菌invA基因保守区域片段为靶序列,利用DNAMAN设计特异性引物,并在己筛选获得沙门氏菌的CAMP引物基础上,应用CAMP引物设计推荐规则及作用位点,进行加速引物的设计和筛选,评估加速引物对扩增反应的影响;并且对建立的方法进行特异性及灵敏性的检测评估。同时与PCR方法进行比较。结果表明:以沙门氏菌invA基因为目标核酸所设计的一对CAMP引物可以实现对沙门氏菌的快速检测,而且在反应体系中引入加速引物可以将检测时间缩短15min;PCR方法的检测限为103CFU·mL-1,而本研究所建立的方法在65℃恒温条件下80min内检出沙门氏菌,检测限为10CFU·mL-1,检测效率和灵敏度均优于传统PCR方法,而且操作简便,无需精密、复杂的变温仪器;对3株沙门氏菌和10株非沙门氏菌进行特异性检测,3株阳性对照株检测全部为阳性,10株阴性对照菌检测全部为阴性,说明本试验所建立沙门氏菌快速检测方法具有良好的特异性,而且对沙门氏菌无漏检,具有较好的通用性。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
赵雪 梁祖源 张琛 王倬 毛瑞 刘雪莲 杜昱光
为了解猪源致病性沙门氏菌的耐药状况,建立一种可以快速准确灵敏的确定沙门氏菌耐药表型的检测方法,以满足生产中的实时检测监控及用药指导的需求。所开发的检测方法基于竞争性互补介导核酸恒温扩增(competitive annealing mediated isothermal amplification, CAMP)与微流控芯片于一体的检测技术,分别以β-内酰胺类耐药基因bla_(TEM-1),四环素类耐药基因tetB,氨基糖苷类耐药基因aadA1,这些基因的保守区域片段为靶序列,应用CAMP引物设计推荐规则,设计特异性CAMP引物,通过条件优化建立一种快速检测沙门氏菌耐药基因的方法,并且对该方法的特异性及灵敏度等方面进行了评估。结果表明:所开发的CAMP检测体系可有效检出沙门氏菌,并检测养殖场所实地采集的沙门氏菌不同菌株中bla_(TEM-1)、tetB、aadA1共3种耐药基因,检测结果与测序结果一致,显示出良好的特异性。并且应用本试验建立的CAMP检测方法,沙门氏菌invA基因检测灵敏度最低限为10拷贝,bla_(TEM-1)基因检测灵敏度最低限为102拷贝,aadA1基因检测灵敏度最低限为102拷贝,tetB基因检测灵敏度最低限为103拷贝。本研究所开发的CAMP检测体系,可快速有效地检测沙门氏菌耐药基因,检测体系可使用实时荧光定量PCR设备进行结果判读,也可以使用实验室水浴等温控设备进行基于颜色变化的裸眼结果判读,并可结合微流控芯片进一步提高反应体系密封性,显著减少了试剂用量,降低了对检测设备的需求,从而节约检测成本,将为养殖现场对沙门氏菌耐药状况的实时监测及用药参考提供便捷有力的技术手段。
关键词：
沙门氏菌 耐药基因 等温扩增 微流控芯片
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王永 兰青阔 赵新 朱珠 程奕
【目的】建立转基因作物外源转基因成分环介导等温扩增技术检测方法。【方法】以转基因作物中常用的花椰菜花叶病毒35S启动子(CaMV35S)为主要研究对象,利用环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermal amplification,LAMP),针对CaMV35S基因的6个区域设计4种特异引物,利用1种链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在65℃保温1h,通过荧光显色即可完成对转基因作物鉴定工作。同时对7种转基因作物进行LAMP检测。【结果】该LAMP方法通过特异性检测含有CaMV35S启动子的转基因作物,其检测结果的特异性与常规PCR方法结果一致,灵敏...
关键词：
转基因作物 环介导等温扩增技术 检测
[期刊] 中国农业科学
[作者]
徐义刚 李丹丹 田长永 刘忠梅 李苏龙 张国财
【目的】空肠弯曲菌是一种重要的人畜共患病致病菌,主要经被污染的水源、乳制品、生禽肉进行传播,建立快速、准确的诊断方法是防控空肠弯曲菌感染的重要措施。【方法】本文引入一种新型的核酸检测技术——DNA环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),以空肠弯曲菌ORF-C序列为检测靶基因,建立了空肠弯曲菌LAMP快速检测方法。【结果】利用本LAMP方法对21种病原菌进行检测,仅空肠弯曲菌为阳性结果,说明该方法具有高度的特异性。该LAMP方法对空肠弯曲菌纯培养菌的检测灵敏度达6CFU/反应管,对污染材料中空肠弯曲菌的检测灵敏度为9CFU/反应管...
关键词：
空肠弯曲菌 环介导恒温扩增 快速检测
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李琼 岳志芹 凌宗帅 刘荭 梁成珠 陈晓 陈昌福
根据淋巴囊肿病毒的主要衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)基因保守序列,利用PrimerExplorer 3软件设计了5条引物,对LAMP反应温度和反应时间等参数进行了优化。与流行性造血器官坏死病毒、虎纹蛙病毒、蛙虹彩病毒、新加坡石斑虹彩病毒、鳜传染性脾肾坏死病毒、真鲷虹彩病毒等其它虹彩病毒及对虾白斑综合症病毒都没有交叉反应。将LAMP检测方法与常规PCR进行灵敏度的比较分析,结果显示LAMP的检测灵敏度约为15 fg,比常规PCR灵敏度高一个数量级。该方法检测时间短,在1 h内即可完成检测。用建立的LAMP方法对临床鱼样进行了检测,结果表明12尾外观有淋巴囊肿病症状的...
[期刊] 水产学报
[作者]
曲朋 王崇明 任伟成 梁彦韬 贾志磊 黄倢 潘鲁青
奥尔森帕金虫是重要的贝类病原性寄生虫之一,为建立快速、灵敏、准确和使用简便的检测方法,实验根据奥尔森帕金虫5.8S rDNA中的内转录间隔区(internal transcribedspacer,ITS)序列,建立了环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,并对反应温度、反应体系中Mg2+浓度和反应时间进行了优化。该方法的检测灵敏度约为30拷贝质粒DNA,并且特异性较强,与海水帕金虫、包纳米虫、波豆虫及急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)等病原均无交叉反应。使用LAMP法对两...
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
