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[期刊] 中国农业科学
[作者]
魏周玲 彭浩然 潘琪 张永至 蒲运丹 吴根土 青玲 孙现超
【目的】克隆获得苦瓜α-MC、商陆PAP,在烟草中异源表达观察两个蛋白在细胞中的定位情况。研究α-MC对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的抑制作用及其引起的抗性防御反应。【方法】根据已报道的商陆抗病毒蛋白PAP基因全序列和苦瓜素基因全序列,设计并合成扩增PAP和α-MC基因全长引物,通过RT-PCR及基因克隆方法,从苦瓜和商陆春叶克隆得到苦瓜α-MC、商陆PAP;用Wolf PSORT预测蛋白定位,将苦瓜α-MC、商陆PAP分别融合在GFP和Ds Red2的N端,构建融合蛋
[期刊] 中国农业科学
[作者]
阮小蕾 刘丽芳 何云蔚 刘福秀 李华平
【目的】克隆在植物抗病虫过程中具有重要作用的核糖体失活蛋白新基因,为该类蛋白基因功能研究和有效利用创造条件。【方法】通过分析多种不同来源的植物核糖体失活蛋白的氨基酸序列,据其保守区域设计1对植物通用简并引物P1和P2,对药用植物望江南基因组进行PCR扩增,获得一种新的RIP基因片段。通过RACE法,获得了其全长cDNA序列-CassinⅠ。【结果】CassinⅠ基因全长为882bp,其推导的氨基酸序列与葫芦科两个代表核糖体失活蛋白β-luffin和Trichosanthin(TCS)的相似性分别为58.2%和34.7%,与GenBank中其它核糖体失活蛋白的序列无显著相似性。多重序列比对发现:...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
阮小蕾 刘丽芳 陈秀 何自福 李华平
通过分析多种不同来源的植物RIPs的氨基酸序列,据其保守区域设计1对植物通用简并引物P1、P2,对基因组进行PCR扩增,分别从海芋Araceae macrorrhiza、烟草Nicotiana tobaccum、剑麻Agavaccae aga-ve、望江南Cassia occidentalis、那坡指天蕉Musaspp.(BB)、邻水野蕉Musaspp.(AA)中获得1个基因片段。BLAST分析表明:它们推导的氨基酸序列只与多种不同来源的RIPs有相似性。其中,与葫芦科2个代表RIP相应区段的相似性最高,与-βluffin基因的相似性分别为97.2%、98.5%、97.9%、89.4%、97....
关键词：
核糖体失活蛋白 基因克隆 序列分析
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
贾睿1 2 杜金梁2 曹丽萍2 徐跑1 2 殷国俊1 2 柏爱旭3
为探讨黄芪多糖对鲤肝细胞的保护作用，利用8 mmol/L的四氯化碳（CCl4）作用肝细胞4 h来构建鲤肝细胞体外损伤模型，用不同质量浓度（0.2、0.4和0.8 mg/mL）的黄芪多糖分别前处理、后处理和前后处理肝细胞，然后观察肝细胞形态，检测肝细胞活力，细胞上清中谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量以及肝细胞中细胞色素P450酶1A和3A（CYP1A和CYP3A） mRNA的相对表达量。结果显示：黄芪多糖显著地抑制由CCl4损伤引起的肝细胞培养上清中GPT、GOT、LDH活性和MDA含量的升高，提高SOD活性及肝细胞...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
贾睿 杜金梁 曹丽萍 徐跑 殷国俊 柏爱旭
为探讨黄芪多糖对鲤肝细胞的保护作用,利用8 mmol/L的四氯化碳(CCl4)作用肝细胞4 h来构建鲤肝细胞体外损伤模型,用不同质量浓度(0.2、0.4和0.8 mg/mL)的黄芪多糖分别前处理、后处理和前后处理肝细胞,然后观察肝细胞形态,检测肝细胞活力,细胞上清中谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量以及肝细胞中细胞色素P450酶1A和3A(CYP1A和CYP3A)mRNA的相对表达量。结果显示:黄芪多糖显著地抑制由CCl4损伤引起的肝细胞培养上清中GPT、GOT、LDH活性和MDA含量的升高,提高SOD活性及肝细胞的...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
贾晶晶 土志涵 练颖康 郁东晨 沈和定
体外试验研究瘤背石磺多糖(Onchidium reevesii polysaccharides, OSP)和硫酸酯化修饰后瘤背石磺多糖(Sulfated Onchidium reevesii polysaccharides, S-OSP)对人宫颈癌Hela细胞生长的影响，并以阳性药物顺铂(0.5、0.75、1.5μg/mL)作为对照。将不同质量浓度(50、75、150μg/mL)的OSP和S-OSP作用于Hela细胞，用CCK-8法分析Hela细胞在12、24、48和72 h的增殖情况，用流式细胞仪分析细胞周期，并应用qRT-PCR检测相关凋亡基因的表达变化。结果表明，OSP和S-OSP均能降低Hela细胞活性并诱导其凋亡，而且S-OSP比OSP更能显著抑制Hela细胞增殖活性，表明硫酸酯化修饰改变了多糖结构进而影响多糖抗肿瘤活性。作用48 h后，3种质量浓度OSP组Hela细胞生长抑制率分别为60%、67%和71%;S-OSP组Hela细胞生长抑制率分别为74%、77%和84%;顺铂组Hela细胞生长抑制率分别为82%、86%和90%。流式细胞术检测显示OSP和S-OSP作用24 h后，细胞早期和晚期凋亡的比率显著，G0/G1期细胞比例增多，S期细胞比例不断降低；实时荧光定量表明促凋亡基因Caspase-3的表达量随药物质量浓度的提高显著增加，抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xL的表达量随药物质量浓度的提高无明显变化，说明OSP和S-OSP可通过调节Caspase信号通路诱导Hela细胞凋亡。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
沈小英 牛小义 段军娜 刘伟 宋双 安德荣
【目的】筛选对烟草花叶病毒(TMV)有良好抑制作用的多糖。【方法】采用半叶法,测定了云芝、金针菇、姬松、杏鲍菇、双孢蘑菇、灵芝、猪苓菌、蜜环菌、黑木耳、虫草、白桦茸和平菇等12种真菌多糖在枯斑三生烟(Nitcotiana tabacumvar.Samsun NN)上对TMV的抑制作用,并测定了其对烟草(普通烟NC-89)生长的影响。【结果】云芝多糖、猪苓菌多糖、虫草多糖和蜜环菌多糖对TMV均有较好的抑制效果,其中1g/L云芝多糖对TMV具有良好的预防作用,提前48h多糖处理的预防效果高达92.12%。云芝多糖对烟草具有促生作用,1g/L云芝多糖处理烟苗的地上部鲜质量和最大叶面积增效最为显著,分...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘彬 王小龙
将不同质量浓度 (0 3、 0 5、 0 6、 0 8、 1 0、 1 2、 1 5和 2 0 μg·mL-1)的亚硒酸钠加入大鼠的肝癌细胞 (RH 35 )和正常肝细胞 (BRL)的体外培养液中 ,分别在不同时间 (2 4、 4 8、 72和 96h ;2 4、 5 6和 96h)检测肝癌细胞和正常肝细胞的活性、增殖能力、生长曲线等指标。结果表明 ,随着浓度和时间增加 ,亚硒酸钠对肝癌细胞的生长抑制作用逐渐增强 ;随时间的延长 ,亚硒酸钠对正常肝细胞的生长呈现一定的抑制作用 ,但浓度变化对正常肝细胞生长抑制的作用不明显。
关键词：
亚硒酸钠 大鼠 肝癌细胞 抑制作用
[期刊] 林业科学
[作者]
袁红雨 马宁 杨会敏 庞秋芬 谢素霞 程琳
【目的】克隆茶树Ⅱ型核糖体失活蛋白基因CsRIP1和CsRIP2,探讨CsRIPs基因的组织表达特异性以及假眼小绿叶蝉和机械伤害处理对其表达的影响。【方法】Cs-Ev2(Gen Bank登录号:GH618807)为一受假眼小绿叶蝉取食诱导的茶树Ⅱ型核糖体失活蛋白基因的c DNA片段,利用RACE技术克隆该基因的全长c DNA,命名为CsRIP1(Gen Bank登录号:FJ648831)。利用RT-PCR技术从茶树子叶中分离出一个新的Ⅱ型核糖体失活蛋白基因的c DNA序列,命名为CsRIP2(Gen Bank登录号:GU951535)。利用PCR技术克隆CsRIPs的基因组序列。设计基因特异性...
[期刊] 华北农学报
[作者]
严海燕 宗成志 马国华 单世华
已知与编码核糖体蛋白L41(RPL41)的CD399094相似的基因序列在黄曲霉敏感品种发育中种皮中上调表达。从花生黄曲霉抗性品种J11中克隆了相似基因。通过分析比较来自开放数据库中黄曲霉抗性和敏感品种花生发育中种子表达的RPL41序列,并对黄曲霉抗性和敏感品种果实不同发育时期和部位及叶片用荧光定量PCR做进一步的分析,研究在不同花生品种中核糖体蛋白L41与黄曲霉抗性的关系。结果表明,发育中种子表达的RPL41在抗性品种中多于敏感品种,而且多出的EST序列与在敏感品种中表达的不同,可能是特异地在抗性品种中表达。RPL41在抗性品种中发育中果实的果荚和子叶以及叶片上调表达,可能与该特定类型的RP...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
阿力米热·阿布都外力 吉利伟 冯慧勇 卫丁一 海婷玉 万政良 冯浩强 戴小华
[目的]野山杏作为药食两用的天然植物，多数研究表明野山杏具有良好的抗炎作用，尤其是其总黄酮成分，但是相关的抗炎机制尚较缺乏。[方法]该研究基于脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）刺激RAW264.7细胞产生炎症，构建体外细胞炎症模型，以MTT法检测不同浓度野山杏总黄酮对RAW264.7巨噬细胞活性的影响以筛选适宜的实验浓度；分别采用Griess法和酶联免疫吸附试验（ELISA）测定50、100、200 μg·mL-1野山杏总黄酮作用后各组细胞中NO、TNF-α、PEG2、IL-1β、IL-6、IL-10和COX-2的释放量；RT-PCR分析各组中COX-2、IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA的相对表达水平；免疫印迹实验（WB）观察各组中NF-κBp65、p-NF-κB p65以及COX-2的蛋白表达。[结果]细胞活力实验表明野山杏总黄酮在50～200 μg·mL-1内对细胞无毒性作用，为安全浓度范围。野山杏总黄酮可以显著抑制LPS刺激RAW264.7细胞NO释放，且呈剂量依赖性抑制。野山杏总黄酮不同剂量组(50、100、200 μg·mL-1)呈剂量依赖性抑制COX-2、TNF-α的mRNA表达，100 μg·mL-1和200 μg·mL-1时显著抑制IL-1β的mRNA表达。蛋白印迹结果表明，经野山杏总黄酮处理可显著下调NF-κB p65、p-NF-κB p65以及COX-2的蛋白表达。[结论]野山杏总黄酮可能通过抑制NF-κB/COX-2信号通路减少细胞炎症因子的释放和炎症相关蛋白的表达，从而发挥良好的抗炎作用。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
倪德江 陈玉琼 余志 彼得R.埃利斯 克里斯托弗P.科尔佩
利用水提法制备绿茶、乌龙茶、红茶、青砖茶和普洱茶提取物,研究5种提取物对体外小肠Caco-2细胞吸收葡萄糖的抑制效果。结果表明:在相同质量浓度(0.5mg/mL)条件下,5种茶叶提取物均能抑制Caco-2细胞吸收葡萄糖的活性,抑制能力大小依次为绿茶!乌龙茶!红茶!青砖茶!普洱茶;与对照相比,绿茶、乌龙茶、红茶和青砖茶提取物极显著抑制葡萄糖的吸收,但普洱茶提取物的抑制效果并未达到显著水平(P>0.05)。茶叶提取物抑制小肠Caco-2细胞吸收葡萄糖的能力可能与加工过程中儿茶素的转化有关。
[期刊] 水产学报
[作者]
赵永强 杨贤庆 李来好 吴燕燕 魏涯 岑剑伟 孙祖莉 张红杰
为研究EGCG对尼罗罗非鱼肌原纤维蛋白在贮藏过程中降解的抑制作用,实验采用质量分数为0.0025%、0.01%、0.02%、0.03%的EGCG对罗非鱼肌肉进行处理,考察不同浓度EGCG对贮藏过程中罗非鱼肌肉肌原纤维蛋白盐溶性的影响,并采用SDS-PAGE凝胶电泳结合质谱技术筛选EGCG抑制降解靶向蛋白质。结果显示,实验条件下不同浓度的EGCG对肌原纤维蛋白降解均有抑制作用,其中,质量分数为0.01%的EGCG抑制作用效果最佳,肌原纤维蛋白质含量由贮藏初期的(82.42±0.65)mg/g降至第12天的(
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王永斌 王允祥 陆兆新
从雷蘑(Clitocybe gigantean)AS 5.105深层发酵的滤液中分离得到胞外粗多糖CEP,以KM系S180荷瘤小白鼠为试验模型,用免疫器官重量法,进行高、中、低剂量CEP的腹腔注射试验。结果表明,CEP能明显提高小白鼠的免疫功能,具有较高的抑瘤活性,并与剂量呈显著相关性;高剂量组与对照组相比较,小白鼠胸腺指数和脾脏指数均有显著增加(P<0.05);与低剂量组相比较,脾脏指数有显著增加(P<0.05)。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张文振 张松 王力 王晓宇 Rajwali Khan 成功 昝林森
【目的】探究bta-miR-33b对牛前体脂肪细胞分化的作用,并对此过程中潜在的靶基因进行验证。【方法】分离培养秦川牛前体脂肪细胞并进行诱导分化,PCR检测bta-miR-33b在前体脂肪细胞分化过程中的时序表达。对牛前体脂肪细胞体外转染bta-miR-33b的mimic、mimic negative control (mimic NC)、inhibitor、inhibitor negative control (inhibitor NC)进行诱导分化培养,于分化培养的不同时间取样,检测脂肪细胞分化标志基因(过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)基因、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)基因)的mRNA表达量及甘油三酯和脂滴含量。预测bta-miR-33b的靶基因,并通过双荧光素酶报告系统验证靶向关系、Western Blot检测靶蛋白的表达量。【结果】在秦川牛前体脂肪细胞分化过程中,bta-miR-33b的表达量呈下降趋势。在前体脂肪细胞分化过程中,bta-miR-33b mimic可抑制脂肪分化标志基因的表达,降低细胞中甘油三酯和脂滴的含量; bta-miR-33b inhibitor可促进脂肪分化标志基因的表达,提高甘油三酯和脂滴的含量。高迁移率族蛋白A2(High mobility group AT-hook 2,HMGA2)基因、扭曲相关蛋白(Twist family bHLH transcription factor 1,TWIST1)基因是bta-miR-33b的靶基因;脂肪细胞分化过程中,bta-miR-33b能够调控HMGA2和TWIST1蛋白水平的表达。【结论】bta-miR-33b对秦川牛前体脂肪细胞体外分化具有抑制作用;HMGA2和TWIST1是bta-miR-33b的靶基因。
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