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[期刊] 中国水产科学
[作者]
李茜茜 秦贞奎 魏茂凯 张志峰
DMRT1是DMRT家族重要成员之一，主要参与动物性别决定和分化调控，但在不同动物中其表达和功能调控作用存在差异。本研究采用生物信息学方法分析了栉孔扇贝 (Chlamys farreri) Dmrt1的序列特征，采用半定量RT-PCR技术确定了其mRNA在成体性腺、闭壳肌、外套膜、鳃和肾等组织中的分布，定量RT-PCR和原位杂交技术揭示了Dmrt1 mRNA在性腺中的时空表达特征。结果显示：栉孔扇贝Dmrt1序列中含有DMRT家族保守的DM结构域；其mRNA仅在栉孔扇贝性腺中表达, 在精巢中的表达明显高于卵巢，并且以生长期精巢的表达水平最高；原位杂交检测Dmrt1阳性信号主要定位于生殖细胞的细胞质中。研究结果表明，Dmrt1在栉孔扇贝性腺中的表达特征与大部分动物性腺中的表达特征基本一致，推测其可能参与性别分化和精巢发育的功能调节。
[期刊] 海洋渔业
[作者]
罗冬艳 翟晓桐 刘晓玲 崔龙波
对栉孔扇贝（Chlamys farreri）STARD3基因序列特征及表达模式进行了分析。结果表明，该基因的编码序列（Coding sequence，CDS）长1512bp，编码503个氨基酸，含有START和MENTAL 2个主要结构域及FFAT基序，与其他物种一致；采用荧光定量PCR（qRT-PCR）检测了STARD3在栉孔扇贝不同组织及性腺发育周期的表达，结果显示，STARD3基因在两性性腺中的表达量显著高于其在其他组织中的表达量（P<0.05），在肾和鳃中也有较高表达；STARD3基因在性腺发育各期中均有表达，其在增殖期的表达量高于其他两个时期，暗示STARD3在栉孔扇贝性腺发育早期发挥主要作用，但其生物学功能还有待深入研究。
关键词：
栉孔扇贝 STARD3基因 表达
[期刊] 中国水产科学
[作者]
冯政夫 邵明瑜 孙大鹏 张志峰
DMRT家族是一类转录因子,在性别决定与分化、器官形成等早期胚胎发育中起重要的作用。本研究采用简并PCR扩增和cDNA末端快速扩增技术(RACE),从栉孔扇贝(Chlamys farreri)精巢中克隆得到1个全长为2312bp的dmrtcDNA序列,其开放阅读框(Open reading frame,ORF)1110bp,编码369个氨基酸,具有dmrt基因家族共有的DM保守结构域。同源比对和系统进化分析结果显示,其为Cf-dmrt4-like基因。半定量RT-PCR结果显示,该基因从受精卵至匍匐幼虫各发育时期均有表达,卵裂期表达量较高;在雄性成体的鳃和精巢以及雌性成体的外套膜、鳃、肾和闭壳...
[期刊] 海洋渔业
[作者]
慕雪娇 刘晓玲 贠晗 崔龙波
为研究栉孔扇贝(Chlamys farreri)FTZ-F1基因功能,对其序列特征和表达模式进行了分析。结果显示,该基因编码序列(coding sequences, CDS)长1 668bp,编码555个氨基酸,含DBD (DNA binding domain)保守区、FTZ-F1盒(FTZ-F1 box)、LBD(ligand binding domain)保守区,其保守区与其他物种较为一致。采用半定量PCR(RT-PCR)和荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测了FTZ-F1基因在栉孔扇贝中的表达,发现在雌性栉孔扇贝的闭壳肌、肾、鳃组织和雄性栉孔扇贝的精巢、肝胰腺、闭壳肌、肾中表达较强,在其他组织中表达较弱;在性腺发育周期中,FTZ-F1基因主要在成熟期精巢中表达,表达量显著高于其他时期性腺,表明FTZ-F1基因主要在成熟期精巢中发挥重要作用,推测可能与成熟期精巢睾酮含量升高相关。
关键词：
栉孔扇贝 FTZ-F1 序列特征 表达
[期刊] 水产学报
[作者]
王丹 李海龙 毕颖 刘建国 张志峰
为了研究17β-hsd4基因在无脊椎动物生殖过程中的作用,实验从栉孔扇贝转录组数据库中获得一个表达序列标签,采用cDNA末端快速扩增技术克隆得到1条全长为2 417 bp的cDNA序列,其开放阅读框为2 223 bp,编码740个氨基酸,推测的氨基酸序列含有17β-HSDs特有的4个保守区和17β-HSD4的3个酶结构域,且与人等脊椎动物的序列相似性均在58%以上。半定量RT-PCR显示,该基因在栉孔扇贝精巢、卵巢、肌肉、外套膜、鳃、肝胰腺和肾脏等各组织中均有表达,其中在肝胰腺和肾脏中表达量明显高于其他组织。对不同发育时期性腺中该基因表达的qRT-PCR检测发现,其在精卵巢发育周期的表达模式不...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李海龙 刘建国 刘晓玲 张志峰
由栉孔扇贝(Chlamys farreri)转录组数据库获得wnt4基因的一段表达序列标签(EST)序列,利用SMART-RACE技术克隆了wnt4基因cDNA全长序列,该序列长1 239 bp,其中开放阅读框为1 068 bp,可以编码355个氨基酸,推导的氨基酸序列含有WNT家族特有序列,且与沙蚕(Platynereis dumerilii)、海胆(Heliocidariserythrogramma)、人(Homo sapiens)等物种WNT4同源性都在60%以上。半定量RT-PCR结果显示,除肾脏外,wnt4基因在栉孔扇贝的精巢、卵巢、闭壳肌、肝胰腺、鳃、外套膜组织中均有表达,但表达量...
关键词：
栉孔扇贝 wnt4基因 克隆 表达
[期刊] 海洋渔业
[作者]
温思民 翟毅 黄洋 朱春华 李广丽
克隆了斑鱾(Girella punctata)dmrt1(doublesex and mab-3 related transcription factor 1)基因，用DNAMAN 9软件比较了Dmrt1蛋白的氨基酸同源性，用MEGAX软件构建了Dmrt1系统进化树，并应用实时荧光定量PCR方法检测dmrt1 mRNA在斑鱾雌雄性腺和不同胚胎发育阶段的表达。结果显示，斑鱾dmrt1的开放阅读框(ORF)全长894 bp,编码297个氨基酸，氨基酸序列含有典型的DM结构域。斑鱾Dmrt1氨基酸同源性比对分析发现，它与黄金鲈(Perca flavescens)的同源性最高，为85.71%;与人类(Homo sapiens)同源性最低，为32.89%。斑鱾Dmrt1与其他鲈形目鱼类在系统进化树上聚为一支，与传统分类地位一致。斑鱾dmrt1在精巢中有较高表达(P<0.05),在卵巢中微弱表达。此外在胚胎发育过程中，dmrt1的表达水平呈先升后降的趋势，在桑葚期表达水平最高(P<0.05)。综上所述，dmrt1可能参与了斑鱾性腺分化和早期胚胎发育。
[期刊] 水产学报
[作者]
吕珍立 黄晓文 孙凤芝 邢强 王静 刘平平 安行健 吕佳
为了解AMPK基因家族在虾夷扇贝中的特征、进化及生物学功能，实验采用比较基因组学及生物信息学的方法对虾夷扇贝AMPK基因家族进行了鉴定、基因与蛋白结构分析、系统发生分析以及时空表达分析，通过虾夷扇贝亚致死温度胁迫实验，研究了AMPK基因家族在高温胁迫时的表达规律。结果显示，虾夷扇贝基因组中共存在3个AMPK家族基因，即PyAMPKα、PyAMPKβ、PyAMPKγ。时空表达分析发现，PyAMPK的3个家族基因在D型幼虫期之前均呈现较高的表达量，其中PyAMPKα基因在受精卵时期表达量最高，PyAMPKβ基因在囊胚时期表达量最高，PyAMPKγ基因在受精卵和2～8细胞时期的表达量达到最高水平。PyAMPK在虾夷扇贝成体器官中呈现不同的表达模式，其中肾脏表达量最高，其次是鳃。受高温胁迫后，肾脏和鳃中的PyAMPK基因短时间内呈现显著的上调表达，并随着时间延长呈现先上升后下降的趋势。研究结果表明AMPK基因家族参与了虾夷扇贝早期胚胎发育过程的能量代谢调节以及机体面对高温胁迫的应激调节过程。本研究有助于理解贝类AMPK基因的功能和进化，并为深入阐明贝类应对高温胁迫时的能量调节机制提供理论基础。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘晓玲 刘建国 王丹 张子炎 张志峰
Foxl2基因在哺乳动物中是雌性相关基因,参与卵巢发育和功能维持。本研究利用荧光定量PCR和原位杂交技术,对栉孔扇贝(Chlamys farreri)foxl2(Cf-foxl2)在发育过程中的表达图式进行了分析。研究发现Cf-foxl2在受精卵中呈低水平表达,随着发育进行表达量增高,D形幼虫期表达量最高,之后表达量迅速下降。原位杂交结果显示Cf-foxl2表达量在担轮幼虫之前在体内均匀分布;强阳性信号在担轮幼虫口凹附近呈对称分布;至D形幼虫期强阳性信号主要集中在内脏团和外套膜边缘处;之后信号消失,直到性别分化后在卵巢中再次出现。本实验结果暗示Cf-foxl2与卵巢发育相关,鉴于该基因在发育早...
关键词：
栉孔扇贝 foxl2 发育 表达
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
赵丹 周丽青 郑言鑫 孙秀俊 吴彪 刘志鸿 吴宙 吴磊
Foxl2是叉头状转录因子(forkhead transcription factor， Fox)基因家族的重要成员之一，在卵巢发育和性别调控中发挥着重要作用。为探究Foxl2在虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)性腺发育中的表达调控模式，利用生物信息学方法分析了虾夷扇贝Foxl2的序列特征；采用半定量PCR(RT-PCR)检测了Foxl2在不同组织中的表达差异。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和原位杂交技术(ISH)揭示了Foxl2在性腺发育4个时期(增殖期、生长期、成熟期和排放期)的时空表达变化。结果显示，虾夷扇贝Foxl2序列包含Fox基因家族共有的FH结构域；多重序列比较分析显示，虾夷扇贝与栉孔扇贝(Chlamys farreri)、欧洲大扇贝(Pecten maximus)的相似性最高，分别为98%、96%。系统进化树分析显示，在不同物种以及进化的过程中，Foxl2基因具有较高的保守性。定量分析和原位杂交结果显示，原位杂交阳性信号主要定位在生殖细胞的细胞质中。在虾夷扇贝的鳃、肾、肝胰腺、精巢中，都可检测到少量Foxl2转录本的存在，在卵巢中表达量最高，且在卵巢成熟期达到最高值。随着性腺发育和精细胞的逐级分化，Foxl2的表达量呈下降趋势，这与原位杂交的结果一致。研究结果表明，Foxl2在虾夷扇贝卵巢发育中可能发挥重要作用，推测其是雌性虾夷扇贝性腺发育调控中的关键基因，可为今后阐明其在虾夷扇贝性别分化进程中的功能提供理论依据。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李林 梁宏伟 李忠 罗相忠 张志伟 朱媛媛 邹桂伟
利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)克隆了黄颡鱼DMRT1基因cDNA全长序列,并利用实时荧光定量RT-PCR技术对该基因在黄颡鱼成体不同组织及不同发育阶段的表达情况进行研究。结果表明,黄颡鱼DMRT1基因cDNA序列全长1 381bp,其中5′端非翻译区30bp,3′端非翻译区454bp[不包括poly(A)],开放阅读框885bp,编码295个氨基酸。氨基酸序列同源性分析表明,黄颡鱼DMRT1基因与革胡子鲶同源性最高(为81%),与黑鲷、虹鳟、斑马鱼、青鳉的同源性分别为60%、59%、64%和52%,与小鼠...
[期刊] 海洋渔业
[作者]
张红燕 朱文旭 赵诚 张宏叶 王涛 陈树桥 尹绍武 贾永义
以河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)为研究对象,采用c DNA末端快速扩增(RACE)技术对DMRT1的全长基因进行了克隆,并利用生物信息学技术分析其结构和功能;采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)技术检测了河川沙塘鳢DMRT1基因在8种组织(鳃、肠、心、肌肉、脑、肝、脾、性腺)、胚胎发育的8个时期(受精卵期、桑椹胚期、原肠胚期、神经胚期、体节期、口裂期、出膜后1 d和出膜后3 d)以及性腺发育的4个时期(Ⅰ~Ⅳ期)中的表达变化。结果表明,河川沙塘鳢DMRT1基因c DNA序列的全长为2025 bp,编码297个氨基酸,其中包括894 bp的开放阅读框(ORF),73 bp的5’非编码区和1058 bp的3’非编码区。与已知物种的氨基酸序列比对后发现,河川沙塘鳢DMRT1的氨基酸序列与军曹鱼(Rachycentron canadum)、欧洲鲈鱼(Dicentrarchus labrax)的同源性最高。DMRT1基因在河川沙塘鳢的精巢组织大量表达,而在卵巢、肌肉、心以及肝4种组织中表达较少,在其它组织中几乎不表达; DMRT1基因在胚胎发育的各个时期都有表达,在原肠期的表达量最高;此外,DMRT1基因表达量在精巢发育的不同时期呈先下降后上升的趋势,在精子成熟期(Ⅳ期)达到最大值,而在卵巢发育的不同时期表达量较少且表达强度差异不明显,因而推测河川沙塘鳢DMRT1基因与精巢的发生和功能的维持有关。研究结果为解析河川沙塘鳢DMRT1基因的功能及其性别决定机制提供了基础资料,也为开展河川沙塘鳢单性育种奠定了基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
于涛 杨爱国 吴彪 周丽青
运用甲基化敏感扩增多态性(methylation-sensitive amplification polymorphism,MSAP)技术对栉孔扇贝(♀)、虾夷扇贝(♂)及其杂交子一代、子二代基因组DNA胞嘧啶甲基化水平进行了研究,并分析了DNA甲基化与各性状的相关性及其与杂种优势的关系。结果表明,(1)DNA甲基化率与壳宽、总重等表型值呈正相关的关系,而与壳长、壳高、软体重和闭壳肌重4个性状表型值呈负相关的关系,其中闭壳肌重与甲基化率的相关性达到极显著水平(P<0.01);(2)虾夷扇贝、栉孔扇贝、F1代、F2代的总甲基化率分别为32.79%、24.13%、19.98%、20.18%,杂交种...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
梁少帅 于潇含 杨丹丹 秦贞奎
SOX9是SOX家族的SOXE亚族成员,在脊椎动物骨骼发育、胰腺发育、性别决定与分化以及肿瘤形成中发挥重要的作用。sox9在不同种类脊椎动物性腺中的表达存在差异,在无脊椎动物性腺中的表达特征尚不清楚。本研究利用RACE技术克隆了栉孔扇贝(Chlamys farreri)sox9(Cf-sox9)全长的c DNA序列,其长度为2835 bp,开放阅读框为1413 bp,编码470个氨基酸。预测的氨基酸序列具有SOX家族的HMG-box和SOXE亚族的高保守区域,但没有脊椎动物羧基端的Pro-Gln-Ser
关键词：
栉孔扇贝 sox9 性腺 配子发生
[期刊] 水产学报
[作者]
杨彩霞 李赟 王崇明 曲朋 黄倢
急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)是一种能导致栉孔扇贝大规模死亡的DNA病毒,研究通过检测不同养殖模式和不同苗种来源的栉孔扇贝样本携带AVNV的情况,以寻找合理的养殖模式和苗种,降低疾病的发生。以扇贝单一养殖的青岛流清河海区和贝藻间养的荣成桑沟湾海区为采样点,每月(2010年3月—2011年4月)定期采集2个海区野生苗养殖和人工苗养殖的栉孔扇贝样品各10只,共得到扇贝样本480只。取扇贝外套膜组织,提取DNA,采用巢式PCR检测扇贝感染AVNV的情况,并对2个海区2类栉孔扇贝AVNV感染率进行比较。结果显示,在2个海区的2类栉孔扇贝体内均检测到...
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