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[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
王丽媛 孙鹏 李华威 傅建敏 刁松锋 韩卫娟 索玉静 买旖旎
为描述柿Diospyros kaki性器官败育现象,以中国林业科学研究院经济林研究开发中心原阳试验基地10年生的雌雄同株柿品种‘禅寺丸’‘Zenjimaru’为研究对象,通过制作石蜡切片结合外部形态变化,同时利用实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术对6个性别分化相关基因进行表达模式分析,对柿花芽分化过程中的性器官败育的关键时期及分子调控机制进行了研究。结果表明:柿雌花中的雄蕊原基和雄花中的雌蕊原基均在4月中旬发生败育。此时,顶端着生雌花的枝条长为5.0～6.0 cm,着生雄花的枝条长为6.0～8.0 cm,雌花芽长约1.0 cm,雄花芽长为1.0～2.0 cm。除了4月5日和4月8日外, ANT和LYK3基因在其他发育阶段均差异显著(P<0.05)且在雌花芽中的表达量明显高于雄花芽,而AP2和ABCC10基因则是在雄花芽中的表达水平显著高于雌花芽(P
关键词：
经济林学 柿 性器官败育 基因表达
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
陈雨晴 杜兵帅 王胜楠 曹一博 袁德义 张凌云
【目的】油茶胚珠败育现象严重，只有少数胚珠能发育为成熟种子，但其败育机制尚不清楚。本研究对油茶胚珠败育时期、组织结构变化和败育原因展开探究，旨在明确油茶胚珠的败育过程，为提高油茶产量提供一定的理论基础和实践意义。【方法】本研究以‘华硕’品种果实为试验材料，在体视显微镜下观察油茶果实内胚珠的形态，统计败育率，采用荧光素二乙酸酯（FDA）染色观察败育胚珠失去活性的时间；通过石蜡切片和显微镜观察明确可育胚珠和败育胚珠的组织结构变化，通过碘-碘化钾染色和PAS反应标记可育胚珠与败育胚珠中淀粉粒的分布。利用CFDA荧光示踪和激光共聚焦成像技术揭示同化物在可育胚珠与败育胚珠中的运输路径，通过实时荧光定量PCR试验分析与糖和能量代谢、活性氧代谢、细胞凋亡等过程相关的基因在可育胚珠与败育胚珠中的表达情况。【结果】（1）体式显微镜的观察结果显示26 WAA（花后周数）后油茶可育胚珠与败育胚珠的大小产生差异；FDA标记结果说明，败育胚珠在果实发育过程中逐步失去活性。（2）37 WAA时，胚珠败育率达到64.08%。（3）显微观察显示：可育胚珠的胚和胚乳均正常发育，内外珠被结合紧密；败育胚珠无胚乳细胞，内珠被与外珠被之间的空隙较大；可育胚珠的胚柄和胚乳中均有淀粉粒存在，败育胚珠仅在萎缩的内珠被上观察到少量淀粉粒。可育胚珠的内珠被上无胼胝质沉积，败育胚珠的内珠被上可见胼胝质沉积。（4）CFDA荧光示踪结果发现，败育胚珠与可育胚珠的同化物运输方式存在差异。（5）与糖和能量代谢、活性氧代谢、细胞凋亡等过程相关基因在败育胚珠和可育胚珠中存在差异性表达。【结论】败育胚珠的结构异常，胚珠内缺乏淀粉的积累，内珠被上有胼胝质沉积，同化物的运输方式与可育胚珠不同，参与胚珠物质和能量代谢、抗氧化作用和细胞凋亡等过程的基因的差异表达可能与油茶胚珠的败育有关。
关键词：
油茶 胚珠 败育 组织学特性
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
龙丽君 马英姿 曾慧杰 李昌珠 张岗 刘思思 李依民
【目的】克隆灰毡毛忍冬MADS-box家族基因SOC1(SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CO 1)，对其进行生物信息学和表达模式分析，为探究灰毡毛忍冬花冠不开放机制奠定理论基础。【方法】基于花蕾型灰毡毛忍冬转录组数据，筛选到开花调控基因LmSOC1的Unigene序列并克隆全长cDNA序列，通过生物信息学分析和实时荧光定量PCR技术分析编码蛋白特性和不同品种中LmSOC1基因的表达特异性，最后将LmSOC1基因插入到原核表达质粒载体pTOPO-D1中，并在表达宿主BL21(DE3)中进行蛋白表达。【结果】LmSOC1基因包含645 bp的ORF区，LmSOC1蛋白不含信号肽、无跨膜区，为稳定的亲水性蛋白。系统进化树分析表明，LmSOC1蛋白与黄花蒿、榴莲、可可等的SOC1蛋白亲缘关系更近。实时荧光定量PCR分析表明，在2个花蕾型灰毡毛忍冬品种的花蕾和叶片中均检测到LmSOC1基因的表达，而叶片中表达量明显高于花蕾。同时，在早期花蕾中LmSOC1基因的表达量高于晚期花蕾，在‘金翠蕾’品种中这一表达差异极显著（P <0.01）。最后成功在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出重组蛋白。【结论】通过对LmSOC1基因的克隆和表达分析发现，该基因可能在灰毡毛忍冬花器官发育过程中发挥重要作用，为进一步研究该基因在植物花发育中的生物学功能奠定了基础。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
孙迎坤 李纪元 殷恒福 范正琪 周兴文
为研究A功能基因在山茶花重瓣形成过程中所发挥的功能,利用同源克隆和RACE扩增方法,从重瓣山茶花品种‘金盘荔枝’发育早期的花芽中获得了山茶花AP基因全长cDNA,命名为CjAPL1,GenBank登录号JX657332。该基因全长1 149 bp,其中,开放阅读框(ORF)长度为741 bp,5’非编码区长度206 bp,3’非编码区长度202 bp。经氨基酸序列分析表明:CjAPL1基因编码一条含有246个氨基酸的蛋白质,与猕猴桃、八仙花等植物的Ap1蛋白同源性均在75%以上。Rea-time PCR结果显示,CjAPL1基因在‘金盘荔枝’不同发育时期花芽中的表达量为:花芽发育早III期>花...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
王钱保 赵振华 黎寿丰 黄华云 李春苗 薛龙岗 黄正洋
选用540只0日龄的优质肉鸡S3系母鸡放于3间封闭式鸡舍内,分别在育雏和育成期设计3组不同类型的光照模式,研究不同光照模式对优质肉鸡性成熟启动前生长和性器官发育的影响.结果表明:(1) 3组光照模式在鸡育雏阶段并无显著影响(P>0.05),从6周龄开始光照影响初现; 7周龄时,II组鸡的体重显著高于I和III组(P0.05); 14周龄时开始出现显著性差异,II组鸡的输卵管长度达到16.26 mm,显著大于I和III组(P<0.05).综合比较,II组的光照模式最优.
关键词：
光照 优质肉鸡 性成熟启动 性器官发育
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李秀珍 李学强
为探讨不同温度条件下日光温室甜樱桃性器官发育及受精进程的差异,以6年生甜樱桃‘红艳’为试材,利用石蜡切片法和荧光显微技术对不同温度条件下甜樱桃的花芽形态分化、雌雄配子发育、受精过程进行了观察。结果表明:日光温室条件下,花芽在硬核期开始形态分化,高温区花芽形态分化时间短,花序间发育较整齐,单花分化需45d左右,而低温区则相反,且单花分化需75d左右;高温区次生造胞细胞持续分裂时间缩短、小孢子母细胞的持续时间短、雄配子体的形成速度快且整齐度高,低温区相反;高温区从造胞细胞到雌配子体形成需14d左右,而低温区需20d左右;不同温区胚的发育进程相似,但高温区从授粉到受精的时间比低温区延长约36h,达1...
关键词：
甜樱桃 温室 花芽分化 受精
[期刊] 中国农业科学
[作者]
冯献君 王丽 王彤 侯雷平 李梅兰
【目的】菜心口感脆嫩，营养价值高，是华南地区人们最喜爱的蔬菜之一，其中糖的种类和含量是决定菜心甜度和风味的主要因素。分析菜心不同器官糖含量及与糖代谢和转运相关基因的表达，以探明导致菜心不同器官糖含量差异的分子机制。【方法】采用高效液相色谱法测定菜心叶片、薹茎和花蕾中可溶性糖、蔗糖、葡萄糖和果糖的含量；通过转录组测序技术对菜心叶片、薹茎和花蕾基因的表达量进行全面系统的分析，并利用DESeq2软件鉴定3个不同器官间的差异表达基因，分析糖代谢通路及转运过程涉及的酶编码基因的表达，在基迪奥生信云平台将筛选到的与糖代谢转运相关的差异表达基因和糖含量进行相关性分析，同时利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术对部分基因的表达量进行验证。【结果】糖含量测定结果表明，菜心不同器官之间糖含量差异明显。可溶性糖、蔗糖、葡萄糖和果糖含量均呈现花蕾>薹茎>叶片的趋势。花蕾中葡萄糖含量分别为薹茎和叶片的1.3倍和1.6倍，果糖含量分别为薹茎和叶片的1.42倍和1.78倍。通过分析糖代谢关键酶和转运蛋白编码基因与糖含量变化趋势的一致性，共找出18个与糖含量变化趋势一致的基因。通过分析糖代谢转运中相关差异基因的表达与糖种类及含量的相关性和一致性，鉴定了14个与糖含量变化趋势一致的DEG。合并7个共有基因（Bra020096、Bra029914、Bra033419、Bra037980、Bra027398、Bra006129和Bra006130），共计25个基因与糖含量变化趋势一致。qRT-PCR结果分析表明筛选到的8个差异基因的表达量FPKM值与相对表达水平高度一致，说明测序结果准确可靠。【结论】菜心花蕾中的糖含量高于薹茎和叶片，是由合成相关酶编码基因的表达在薹茎和花蕾中高于叶片所致，研究结果为揭示菜心不同器官中糖代谢及转运的分子机制奠定了一定基础。
关键词：
菜心 器官 糖类 转录组 基因
[期刊] 华北农学报
[作者]
姜才 伊六喜 高凤云 贾霄云 张辉 张立华 任龙梅 周宇 赵小庆 斯钦巴特尔
为进一步揭示显性核不育亚麻不育分子机理,以显性核不育亚麻不育株分离的可育花蕾和不育花蕾为研究材料,采用实时定量PCR技术和原位杂交技术,开展了G-E07-830、G-E07-330和G-E07-100这3个花蕾发育相关基因在亚麻花蕾中的时空表达模式。结果表明:原位杂交中G-E07-830、G-E07-330和G-E07-100基因在亚麻可育和不育花蕾绒毡层中表达特异性信号;实时定量PCR得出在早期不育亚麻花蕾中表达量显著大于其他发育时期的花蕾。
[期刊] 水产学报
[作者]
刘宁 关素华 王卫民 刘寒
为了研究团头鲂嗅觉器官的发育过程和嗅觉受体基因（ORs）在嗅囊发育不同时期的组织表达模式，实验基于组织学、形态学及实时荧光定量PCR技术（qRT-PCR）的方法进行了探究。组织形态学结果显示，团头鲂嗅觉器官位于后背部和两侧眼睛前方，嗅囊紧贴于嗅腔底部，形状近似椭圆形，嗅基板沿着头尾方向平行排列。嗅囊在团头鲂刚孵化时出现嗅窝外围凹进的痕迹，随后凹进处长出嗅窝，并在中央出现长条形的嗅基板。随着仔鱼的生长发育，单侧嗅囊初级嗅基板由疏松逐渐排列紧密，嗅基板隆起高度、数量及嗅囊总体表面积逐渐增加，在成鱼阶段趋于稳定。qRT-PCR结果显示，代表性ORs在团头鲂发育不同时期的组织中表达模式各异，其中Beta-2、9、10、11在胚胎发育期的囊胚期、胚孔闭合期及嗅板期高表达；Beta-2、9、10、11和Epsilon-7在仔稚鱼期的3～15 dpf中微弱表达，在30～60 dpf时期高表达；Beta-2、10、11及Epsilon-6、7、10、13在幼鱼期至成鱼期嗅囊中高表达，Beta-2、10、9、11及Epsilon-7、10、13在3月龄团头鲂嗅球中高表达；Beta-2、10在幼鱼期至成鱼期脑中低表达。研究表明，团头鲂嗅觉器官的发育进程与ORs表达相关，不同发育时期ORs主要表达部位均在嗅囊中。本研究对进一步探究ORs的功能提供理论支持，也为后续深入研究鱼类嗅觉识别机制奠定了基础。
关键词：
团头鲂 嗅觉器官 嗅觉受体基因 基因表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
朱春红 刘宏祥 陶志云 徐文娟 宋卫涛 章双杰 李慧芳
Toll样受体(TLRs)在机体天然免疫中发挥重要作用。为分析TLRs在鸭主要免疫器官中的表达情况,在测定和分析高邮鸭免疫器官发育的基础上,荧光定量PCR法检测了高邮鸭TLR1、TLR2、TLR4、TLR5(TLR1/2/4/5)4种TLR mRNA基因在免疫器官(胸腺、脾脏和法氏囊)中的相对表达情况,并进行相关性分析。结果表明,TLR1/2/4/5 mRNA在不同发育时间段都有表达,但不同TLR基因在不同免疫组织中表达模式存在差异,总体来讲,胸腺中TLR1/2/4/5 mRNA在1周龄时表达水平较高,脾
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
黄绍兴 刘俊君 阎隆飞 彭学贤
从豌豆幼苗及开花植株各器官提取总RNA，以豌豆肌动蛋白基因（PEAC1）为探针，鉴定肌动蛋白基因在不同器官的表达。Northern和Dotblot结果表明，肌动蛋白基因在豌豆中的表达具有发育阶段特异性，它倾向于在豌豆5天苗的芽和2天苗的报中特异表达。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘锴栋 黎海利 钟舒婷 袁长春 陈燕 刘金祥 钟军弟
【目的】从番荔枝中分离花器官特征决定基因ＡＧＡＭＯＵＳ，并进行亚细胞定位及基因表达分析，为进一步研究该基因参与调控花发育调控的分子机理，及解决番荔枝花发育异常问题奠定基础。【方法】以番荔枝成熟花为材料，通过试剂盒提取总ＲＮＡ，并以ＲＡＣＥ方法克隆获得基因ＡＧ的全长序列。序列拼接和氨基酸序列分析采用ＤＮＡＭＡＮ软件；相似性分析通过ＢＬＡＳＴＮ和ＢＬＡＳＴｐ程序进行；进化树构建采用ＭＥＧＡ ５．１软件；蛋白质二级结构预测与３Ｄ结构建模分别采用Ｅｘ ｐＡ Ｓｙ的ＳＯｐＭＡ和ｐｈｙＲＥ２程序进行；亚细胞定位表达采用烟草上皮细胞瞬时转染系统和基因枪轰击洋葱表皮细胞方法；ＡＧ在花发育不同时期、不同器官及不．．．
关键词：
番荔枝 AG 花发育 表达模式
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张琛 李佳丽 靳荣帅 白少成 姚凡 赵博昊 陈阳 吴信生
【目的】为了研究骨形态发生蛋白4(BMP4)对兔毛囊发育相关基因的影响。【方法】利用显微切割和二步酶消化相结合的方法分离了兔毛乳头细胞，并通过免疫荧光染色检测毛乳头细胞的特异性标记物α-SMA和VIM的表达情况。构建pcDNA3.1-BMP4过表达载体，转染至毛乳头细胞中，利用荧光定量PCR技术分析BMP4基因对毛囊发育相关基因(ID1、ID2、SAMD7、FGF1、TGF-β)mRNA表达的影响，通过CCK-8细胞增殖实验验证BMP4基因对兔毛乳头细胞生长的作用。【结果】免疫荧光结果显示，分离培养的细胞为毛囊真皮源性的毛乳头细胞。进一步成功克隆了家兔BMP4基因，发现其CDS序列全长为1230 bp，编码409个氨基酸，预测为亲水性外分泌蛋白，含有1个信号肽序列，无跨膜结构域。荧光定量PCR结果显示，过表达BMP4能显著升高ID1、ID2、SAMD7的mRNA表达水平(P<0.01)，但显著抑制FGF1的mRNA表达水平(P<0.05)。通过CCK-8细胞增殖实验发现，过表达BMP4基因极显著抑制毛乳头细胞增殖(P<0.01)。【结论】BMP4基因可能通过影响毛乳头细胞中毛囊发育相关基因的表达，抑制毛乳头细胞增殖，参与家兔毛囊发育过程。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
徐业芬 孙宏宇 索朗斯珠 牛家强 贡嘎 郭敏 王玉恒 张鹏宇 张雷 旦巴次仁 王刚 罗润波
为了解牦牛BoLA-I基因mRNA组织表达谱,并探索可能靶定BoLA-I基因的miRNAs,利用RT-PCR技术对牦牛BoLA-I基因mRNA在牦牛肝、脾、肺、肾、肌肉、卵巢、小肠、下颌淋巴结、大肠和肠系膜淋巴结等10种组织的表达谱进行分析,再通过Targetscan和miRBase软件来预测可能靶定BoLA-I基因的miRNAs,检测其在10种牦牛组织中的表达情况。结果表明:BoLA-I基因mRNA在检测的10种牦牛组织中均有表达,尤其在免疫器官组织中广泛表达,在牦牛的肠系膜淋巴结组织表达水平极显著高于小肠和大肠组织(P<0.01);预测到的可能靶定牦牛BoLA-I基因的miRNA共有28个,从中选择了6个进行组织表达谱分析,发现bta-miR-759、bta-miR-142-5p、bta-miR-665、bta-miR-2322-5p、bta-miR-199a-3p与牦牛BoLA-I基因共表达;除卵巢外,bta-miR-219-5p在其他组织中均有表达,且在肝脏组织中的表达水平极显著高于其他组织(P<0.01)。bta-miR-142-5p在肠系膜淋巴结中表达量极显著高于其他组织(P<0.01)。由此推测,牦牛BoLA-I基因及其预测的miRNA可能在牦牛组织中起重要作用。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
贺丹 张明星 何松林 曹健康 华超 张佼蕊 刘艺平
[目的]探究PsMTERF2基因在牡丹远缘杂交种子发育过程中的分子及生理机制,为克服牡丹远缘杂交种子败育的研究提供理论依据。[方法]采用RT-PCR技术克隆得到牡丹MTERF2基因,并对其进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测并比较PsMTERF2基因在牡丹种子不同发育时期(‘凤丹白’自交与‘凤丹白’ב粉玉奴’授粉后14,18和28 d的正常与败育种子)的表达与牡丹不同组织(根、茎、叶、花瓣、花药、鳞芽、柱头、种子)中的差异性表达;测定不同发育时期正常种子与败育种子中可溶性总糖、蔗糖、果糖、淀粉和可溶性蛋白的含量,并分析其与PsMTERF2基因表达量的相关性。[结果]牡丹MTERF2基因CDS全长972 bp,编码323个氨基酸,相对分子质量为3.77×10~4 D,理论等电点为8.87,具有3个跨膜螺旋区,不具有信号肽切割位点;进化树及三级结构分析显示,牡丹MTERF2基因具有7个MTERF结构域,蛋白结构较为复杂,其碱基序列与AtMTERF2同源性较高,故命名为PsMTERF2,GenBank登录号为MZ505000。PsMTERF2基因在牡丹自交种子各发育时期的表达量均高于同一发育时期的杂交种子,且在种子发育后期二者差异更显著;PsMTERF2基因在牡丹不同组织中均有表达,但在种子、柱头和花药中的表达水平相对较高。授粉后14和28 d,可溶性总糖、蔗糖、果糖、淀粉和可溶性蛋白在自交正常种子中的含量均高于杂交败育种子,其中淀粉和可溶性蛋白含量与PsMTERF2基因相对表达量显著正相关,其余指标与PsMTERF2基因相对表达量正相关但相关性不显著(P>0.05)。[结论]PsMTERF2基因可能通过影响代谢产物的合成参与调控种子发育的后期进程。
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