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[期刊] 中国农业科学
[作者]
曹少谦 潘思轶 姚晓琳 傅虹飞
【目的】研究适合分离纯化血橙花色苷的柱层析法,并对血橙中的花色苷进行初步鉴定。【方法】分别采用12种不同类型树脂对血橙花色苷静态和动态吸附解吸试验进行比较,优化了大孔树脂提取分离血橙花色苷的工艺,采用Toyopearl TSK HW-40S柱层析对血橙花色苷提取物进一步分离纯化。同时,利用高效液相色谱-电喷雾质谱联用(HPLC-ESI/MS)对血橙花色苷进行定性分析。【结果】大孔树脂NKA-9对血橙花色苷的分离效果最好,最佳工艺条件为:50%乙醇用柠檬酸调pH为2.5时洗脱效果最好;ToyopearlTSKHW-40S柱层析分离纯化条件为:35%甲醇(经2%甲酸酸化)为洗脱液,流速0.6ml·...
关键词：
血橙 色素 花色苷 纯化 鉴定
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
倪晓颖 李秉超 林荣峰 李丽梅
以黑曲霉固体发酵法产生的粗菊粉酶为试材,采用葡聚糖凝胶层析法和DEAE纤维素52柱层析法对经过硫酸铵沉淀后的粗酶进行了分离纯化,得到接近电泳纯的高纯度菊粉酶。结果表明:以菊粉为底物研究酶活时,DEAE-纤维素52离子交换层析得到较好的分离效果,主要活力峰比活力12.64U·mg-1提纯了6.37倍;以蔗糖为底物时,SephadexG100分离效果好,比活力35.57U·mg-1提纯了3.78倍。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘程程 石波 姚喜梅 梁平 李静梅
【目的】探索实验室低成本、规模化制备单一聚合度纤维寡糖的方法,并得到聚合度分别为2—5纯度较高的单一组分纤维寡糖。【方法】采用制备型常压硅胶柱层析(Ф22 mm×900 mm),选择干法填柱、干法上样对混酸降解法制备得到的纤维寡糖进行分离纯化。采用薄层色谱法(TLC)对分离过程进行监测,用荧光辅助糖电泳(FACE)对分离后的各单一组分进行定性检测,并用电喷雾-飞行时间质谱(ESI-TOF-MS)对各单一组分进行分子质量的确认。【结果】采用制备型常压硅胶柱层析法对于聚合度在2—5的纤维寡糖具有很好的分离效果。ESI-TOF-MS法检测本试验得到的4种单一聚合度纤维寡糖分子质量(钠离子峰)分别为3...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
姜宁朋 崔言顺 张秀美 黄艳艳 李建亮 王希军 胡北侠
两株针对新城疫病毒HN基因的单抗1E5和C3-B7,均具有血凝抑制性(HI),免疫球蛋白亚类分别为IgG2a和IgG1。用HiTrap protein-A层析柱对这两株单抗进行了亲和纯化。收集不同洗脱阶段的液体进行蛋白含量测定,结果表明,5mL的洗脱液洗脱后,第1~2mL洗脱液中单抗含量最高。用SDS-PAGE电泳对纯化产物进行纯度鉴定,结果表明单抗纯化后只有重链和轻链两条带。
关键词：
新城疫病毒 单克隆抗体 亲和层析 纯化
[期刊] 华北农学报
[作者]
温立斌 何孔旺 解建平 杨浩 周建新 金全胜 王玉然
通过免疫亲和层析对类猪圆环病毒因子P1纯化进行了研究。采用环氧活化及NHS活化的琼脂糖凝胶,与兔抗P1表位肽抗体偶联,对P1进行了免疫亲和吸附,通过电镜技术证实获得了纯化病毒。结果表明,免疫亲和层析是有效的P1病毒纯化方法。
关键词：
类猪圆环病毒因子P1 纯化 免疫亲和层析
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
冯颖 张彬
为建立无梗五加果花色苷的研究工艺,比较7种大孔树脂对无梗五加果花色苷的吸附与解吸效果,在此基础上研究X-5型大孔树脂对无梗五加果花色苷的吸附与解吸条件。结果表明:X-5型大孔树脂是纯化无梗五加果花色苷的理想树脂;动态吸附最适浓度为2.0mg·mL-1,上样液pH值3.0,最大上样量42BV,上样流速1.0mL·min-1;动态解吸最适洗脱剂为pH值3.0的70%乙醇,洗脱体积5BV,解吸流速为1.0mL·min-1。该工艺生产的花色苷产品为紫红色粉末,色价为35.2,是未纯化的17倍。说明此方法适合于无梗五加果花色苷的纯化,且纯化效果理想。
关键词：
无梗五加果 花色苷 纯化 大孔树脂
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
郑悦 王萍
以黑果花楸花色苷得率为考察指标，分别用水，５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％的乙醇和５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％的甲醇作为溶剂提取黑果花楸花色苷，得出８０％乙醇为较好的提取溶剂。以８０％乙醇为提取溶剂，进行提取时间、料液比、ｐ Ｈ值、提取温度４个单因素试验。在单因素试验基础上，运用Ｂｏｘ－ＢｅＨｎｋｅｎ响应面设计建立数学模型。结果表明最佳提取条件为：提取时间１１０ ｍｉｎ、ｐ Ｈ值２、提取温度３４℃、料液比１∶１６．５，黑果花楸花色苷得率为６．６４８ ｍｇ／ｇ。通过静态吸附和解吸筛选出黑果花楸花色苷的最佳纯化树脂为ＡＢ－８，最佳纯化条件为上样质量浓度２ ｍｇ／．．．
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
胡晓丹 张德权 孙爱东
通过比较8种大孔吸附树脂对紫苏叶花色素苷粗提物的静态吸附和解吸性能,筛选出大孔吸附树脂XAD-7,并对其动态吸附和解吸条件(如上样液浓度、酸度、盐度、洗脱溶剂及流速等)进行研究。结果表明:将紫苏叶花色素苷上柱液用稀盐酸调节pH值至3.0,调整溶液花色素苷的浓度大于6.5 mg/mL,添加不超过10%的食盐,以10 BV/h的流速上柱5 h,至XAD-7树脂吸附饱和,然后用大量的0.1%HCl洗脱至洗脱液不含糖类等杂质,将30%的乙腈溶液用稀盐酸调节pH值至3.0,以2 BV/h的流速洗脱4 h,得到的精制品中花色素苷的含量为78.18%,树脂富集倍数为2.66。
关键词：
大孔吸附树脂 紫苏 花色素苷 纯化
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张高峰 郭彤 魏华 马珂
以Ⅳ型胶原酶消化法分离鲫(Carassius auratus)肝细胞,然后将其分成2组,一组不再经过进一步处理(即对照组);另一组再用Percoll液密度梯度离心纯化肝细胞(即实验组),然后将2组细胞接种于DMEM/F12培养基中培养10 d。在倒置显微镜下观察2组肝细胞的形态并绘制细胞生长曲线;采用台盼蓝染色法比较2组肝细胞的存活率;通过HE染色法在光镜下检测肝细胞的纯度;采用MTT比色法测定2组肝细胞的增殖率;收集肝细胞培养上清液检测白蛋白、尿素以及乳酸脱氢酶的水平以检测2组肝细胞功能。结果表明,对照组鲫肝细胞存活率为80.6%,纯度为83.2%;实验组肝细胞存活率和纯度明显高于对照组(P...
关键词：
鲫 肝细胞 分离 纯化 Percoll法
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
张珊珊 杨文忠
【目的】为分离纯化菌根食用菌橙黄硬皮马勃的菌种，促进云南松无菌苗菌根的人工合成，实现云南松菌根化苗木的定向培育和菌根食用菌的人工驯化栽培。【方法】采用子实体组织分离法和综合PDA培养基对橙黄硬皮马勃子实体进行菌种分离，对其子实体、组织分离菌株和菌根菌的核糖体转录间隔区片段（ITS）进行分子鉴定，研究不同栽培基质条件下的接种处理对云南松菌根合成及其幼苗生长的影响。【结果】1）从邻接法构建的系统发育树上可以看出，采集的子实体、组织分离菌株和菌根菌确认为橙黄硬皮马勃。2）接种处理后的云南松幼苗生长指标显著高于未接种处理，而且在不同基质处理间差异显著，其中在蛭石和珍珠岩和泥炭土（质量比10:1:5）的混合基质中均表现最优。3）橙黄硬皮马勃在此混合基质中的菌根侵染率、菌根依赖性和菌根贡献率均最高，分别为92.66%、292.86%和65.85%，显著高于其他两种基质处理，可能是橙黄硬皮马勃菌丝更适宜生长在该混合基质，进而利于云南松无菌苗的菌根合成，也间接促进了云南松幼苗的生长。【结论】橙黄硬皮马勃菌种的分离纯化和菌根合成基质的筛选是云南松无菌苗菌根合成的关键。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
彭文 王江勇 丁雪娟
利用超速离心和CsCl梯度离心的方法,从杂色鲍(Haliotis diversicolor Reeve)血淋巴中分离纯化血蓝蛋白(Hcs),SDS-PAGE检测提取的血蓝蛋白由1种亚基构成,分子量为400kD;Native-PAGE电泳检测2个亚基(Isoform)分别为HdH1、HdH2;透射电镜下其四级结构为圆柱体,以多十聚体、二十聚体和少量的十聚体形式存在于血淋巴中。杂色鲍血蓝蛋白在以邻苯二酚为底物的条件下表现出微弱的酚氧化酶活性(Km=25.66mmol/L),胰蛋白酶和SDS能使其酚氧化酶活性增强;以左旋多巴(L-DOPA)为底物则不表现出酚氧化酶活性。
关键词：
杂色鲍 血蓝蛋白 分离纯化 酚氧化酶活性
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王伟民 曲东 徐佳
【目的】对水稻土中铁还原菌进行分离纯化,比较不同培养基的分离效果,研究不同菌株的铁还原特征。【方法】以四川和江西水稻土为材料,采用PTYG固体平板培养基及柠檬酸铁固体培养基(斜面)分离出兼性厌氧和严格厌氧的菌株,并通过柠檬酸铁液体培养基及Fe(OH)3培养基进行铁还原能力测定,比较不同菌株的Fe(Ⅲ)还原率大小、铁还原特征曲线,以及分别在LB液体培养基和柠檬酸铁液体培养基中的生长曲线。【结果】在以葡萄糖为碳源时,来源于江西水稻土的8个菌株对柠檬酸铁的利用率较高,铁还原率为84.34%~93.81%,而对Fe(OH)3的还原率为71.07%~90.90%;来源于四川水稻土的8个菌株对柠檬酸铁的还...
关键词：
水稻土 铁还原菌 分离纯化 铁还原率
[期刊] 水产学报
[作者]
邱宏端 徐姗楠 林娟 陈朝洋
耐盐红螺菌的无菌代谢产物经CM-SephadexC-50弱阳离子交换色谱柱分离,获得3个蛋白吸收峰:PSB2-1’峰,PSB2-2’峰,PSB2-3’峰。其中PSB2-1’峰对病原菌具有拮抗作用。PSB2-1’峰组分样品经透析脱盐,后进行SDS-PAGE电泳检测,其冷冻干燥样品进行毛细管电泳与MALDI-TOF质谱鉴定,结果表明PSB2-1’峰的抑菌蛋白物质已达到较高纯度,其准确分子量为9290Da。耐盐红螺菌拮抗物质具有较好的热稳定性,对紫外线不敏感,但对酸碱性较敏感;用蛋白酶处理,其抑菌活性受枯草杆菌蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶的影响。耐盐红螺菌产生的拮抗物质可初步归属于小分子热稳定肽(SH...
关键词：
耐盐红螺菌 拮抗物质 分离纯化 特性
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马雪云 韩建秋 高淑霞 牛钟相
利用抗鸡C3 21肽抗体制备免疫亲和层析柱,对鸡补体C3d进行了分离,并采用间接酶联免疫吸附实验(间接ELISA),对洗脱液中的C3d组分进行了检测,以SDS-PAGE电泳方法对分离到的C3d进行了检测。结果表明,利用亲和柱层析能够分离得到纯度较高的C3d蛋白,为鸡血清中C3d的提取纯化提供了较为简便的方法。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李立恒 王征 谢达平
为探明蜜环菌深层发酵液中多糖的成分,从多糖的提取、SephadexG-200凝胶柱层析等方面进行了多糖的纯化,从多糖水解液的纸层析、多糖的质谱、多糖的红外光谱等方面研究了多糖的结构.结果表明蜜环菌深层发酵液中多糖是由-D-吡喃葡萄糖和β-D-吡喃葡萄糖通过糖苷键连接而成,由于其中具有与天麻相似的β-D-吡喃葡萄糖苷,因而具有与天麻相类似的药理作用和临床疗效.
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