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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
乔芬 祁鹏志 伏卉 张鹏 吴珊 姜玲
以带毒柑橘品种为试材,采用植物中药制剂处理与热处理结合、茎尖微芽嫁接与植物中药制剂处理结合,用RT-PCR法检测病原带毒情况,并在药剂处理后1、3、5、7、9 d取样,检测抗性相关酶活性的含量变化,结果表明:采用板蓝根和黄芩混合中药制剂处理8次,结合热处理,在PC板制成的温室(白天40℃(6 h/d),晚上25℃,处理50 d)中,可有效地脱除试验苗木中柑橘衰退病和柑橘碎叶病复合感染病原;对柑橘茎尖微芽嫁接苗进行板蓝根和黄芩混合中药制剂脱毒处理后苗木经RT-PCR法检测表明:85.7%植株可以脱除柑橘衰退病和柑橘碎叶病病毒;药剂处理后PPO、POD、SOD酶活性与对照相比均有所提高。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘永清 周常勇 周彦
本文从选育和利用抗(耐)柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)的柑橘品种和砧木、弱毒株交叉保护、转基因诱导的CTV抗性等方面综述抗柑橘衰退病毒基因工程研究进展,并就人工miRNA(artificalmicroRNA,amiRNA)介导抗性加以展望,旨在为更好地控制CTV危害提供借鉴。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王彩霞
利用3种不同来源的柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)抗体(PAb-L5、PAb-I、MAbs-S4)对武汉地区发生的CTV进行检测,筛选到一个表现特异血清学性状的分离物CTV-HB1,该分离物仅同来源于中国的多克隆抗体PAb-L5发生血清学反应。为揭示该血清学差异的分子机制,对CTV-HB1和其他几个分离物CP基因序列进行了分析,结果显示:CTV-HB1CP基因与其他19个分离物的核苷酸序列相似性在90.4%~99.4%,但CTV-HB1和CTV-L5的CP基因氨基酸序列间仅存在3个位点的变异,暗示:此3个氨基酸位点可能与CTV-HB1的血清学特性有关。
关键词：
柑橘衰退病毒 CP基因 抗体 序列分析
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王永江 周彦 李中安 苏华楠 黄爱军 唐科志 周常勇
【目的】建立一种反转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermalamplification,RT-LAMP)检测柑橘衰退病毒(Ctrus tristeza virus,CTV)的一步法检测技术。【方法】根据CTV保守的p25设计2对特异性引物,对RT-LAMP体系的最佳反应条件、特异性、灵敏度等进行研究。【结果】建立了一种特异性检测CTV的RT-LAMP方法,该方法的灵敏度比RT-PCR方法高100倍,产物通过Acc I酶切得到验证,而且反应产物中加入SYBR Green I可直接观察样品是否感染CTV。【结论】RT-LAMP法...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李芳 邓子牛 赵亚 李大志 戴素明
基于转化病毒基因介导抗性,通过在植物表达载体p CAMBIA 2301上插入启动子–内含子–终止子的方式,构建一种含有发夹结构的、通用型强的RNAi载体骨架结构;以柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)的p25、p20和p23基因保守序列为模板设计正向片段和反向片段,先后与骨架载体连接,成功构建了3个RNAi载体(分别命名为ds2301–p25、ds2301–p20和ds2301–p23),并将载体ds2301–p23注射入墨西哥莱蒙叶片。制作p23基因的地高辛标记探针,用No
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘永清 曹孟籍 王雪峰 李中安 唐科志 周常勇
【目的】探寻一种快速、简便、灵敏而可靠的检测植物组织和单头蚜虫中柑橘衰退病毒的方法。【方法】运用反转录多聚酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、反转录巢式多聚酶链式反应(reverse transcription nested polymerase chain reaction,RT-nested-PCR)、印记捕获反转录巢式多聚酶链式反应(print capture reverse transcription nested polymerase chain reaction,PC-RT-nested-PCR...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
易继平 向进 周华众
为研究柑橘潜叶蛾与柑橘溃疡病的关联性,于2017年4月-2018年10月,在湖北省秭归县郭家坝镇柑橘溃疡病发生区域进行了相关研究。通过田间和显微观察发现,柑橘潜叶蛾与柑橘溃疡病之间存在危害部位的同步性,并观察到溃疡病菌沿潜叶蛾虫道延伸传播的现象;同时发现柑橘溃疡病症状随柑橘潜叶蛾的为害而发生改变,即在病虫高发期,溃疡病病斑常以粉末状出现。通过对秭归县20 a的潜叶蛾百叶虫量、溃疡病发生面积及病情指数等数据分析发现,柑橘潜叶蛾与柑橘溃疡病在消长动态上存在年度间和年度内的同步性;对潜叶蛾虫道内的病原菌进行鉴定,证明潜叶蛾虫道内病原菌即为溃疡病病原菌。柑橘潜叶蛾与柑橘溃疡病的田间交互症状和消长动态上的同步性,揭示了柑橘潜叶蛾对柑橘溃疡病的影响途径,表明柑橘潜叶蛾是柑橘溃疡病快速扩散、加重发生的重要因子,预示了控制潜叶蛾发生对防治柑橘溃疡病的重要作用。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李芳 邓子牛 赵亚 李大志 戴素明
【目的】构建柑橘衰退病毒（Ｃｉｔｒｕｓ ｔｒｉｓｔｅｚａ ｖｉｒｕｓ，Ｃｔｖ）含ｐ２３的ｒＮａｉ载体，以获得具有抗性的柑橘转基因植株。【方法】基于转化病毒基因介导抗性，根据ＮＣＢｉ公布的Ｃｔｖ基因组序列，查找ｐ２３保守序列，设计并克隆两条不同长度的片段。对两条片段和植物表达载体ｐ Ｂｉ １２１进行双酶切和连接来构建ｒＮａｉ载体。初步预测所构建的载体发生ｒＮａｉ抗病毒的可行性。利用农杆菌介导的瞬时表达技术将含ｒＮａｉ载体的农杆菌注射入Ｃｔｖ指示植物墨西哥莱蒙的叶片，利用Ｇｕｓ组织化学染色法观察叶片中载体发生瞬时表达的情况。发生瞬时表达的叶片接种Ｃｔｖ ｔ３６基因型，利用酶联免疫反应（ｅＬｉｓａ）．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
易龙 周常勇 周彦 王志刚 唐科志
【目的】了解中国野生柑橘上携带柑橘衰退病毒(CTV)分离株的CP/HinfⅠRFLP组群构成和分子特征。【方法】运用RT-PCR对采自中国云南、广西、四川、湖南、江西等省11个野生柑橘上CTV分离株的病毒衣壳蛋白基因(CPG)进行扩增,利用RFLP和SSCP对CPG进行分析,并将测定的CPG序列进行同源性比较和聚类分析。【结果】发现野生柑橘上11个CTV分离株以单一组群感染为主;这些CTV分离株CPG的核苷酸序列和相应的氨基酸序列同源性分别为92.5%～99.5%和95.0%～100%;与GenBank收录的9个全基因组CTV分离株的相应基因序列进行聚类分析,其核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王春梅 张秋明 罗齐克 王红
柑橘植物组织中富含多糖、酚类、单宁、色素等物质,它们的存在严重干扰了柑橘黄龙病PCR检测的准确性。因此有必要筛选出一种能得到纯度高、结构完整的柑橘总DNA(含黄龙病病原DNA),且操作简便的提取方法。本研究对比试验了3种柑橘总DNA提取方法,方法1采用Sandrine等人的提取法;方法2采用CTAB法;方法3采用试剂盒法。实验研究表明,方法2提取柑橘黄龙病病原DNA的PCR检测准确率最高。
关键词：
柑橘黄龙病 柑橘总DNA PCR
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李玲娣 周常勇 李中安 田晓 王永江 唐科志 周彦 刘金香
【目的】建立SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法,测定褐色橘蚜(Toxoptera citricida)中柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)含量。【方法】根据CTV CP25保守序列,设计特异性引物HD-F/R,通过优化得到最佳反应条件建立橘蚜中CTV实时荧光定量RT-PCR,并进行灵敏性、重复性检验,评价该方法的可行性。应用该方法测定单头橘蚜中CTV含量。【结果】该实时荧光定量RT-PCR方法最低检测限为9.0拷贝/μL,其灵敏度是常规RT-PCR的100倍。标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关性系数为0.998,扩增效率达104....
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
潘显婷 陆训 庞茜丹 高必达 周倩
利用组织分离法，从感染叶斑病的莴苣叶片上分离得到４株真菌，ＩＴＳ序列分析鉴定为匍柄霉（ＳＴｅｍｐｈｙｌＩｕｍ Ｓｐｐ．）。科赫氏法则验证其致病性时发现，菌株ＷＳ–０１较其他菌株致病力减弱，且生长缓慢。用纤维素吸附法提取菌株ＷＳ–０１的ｄＳＲＮＡ，发现ＷＳ–０１含有３条１～５ ｋｂ的ｄＳＲＮＡ条带，提示ＷＳ–０１菌株内含有ｄＳＲＮＡ病毒。利用高温–利巴韦林–尖端脱毒结合的方法消除ＷＳ–０１内的病毒，所得菌株ＷＳ–０１–ｄ与菌株ＷＳ–０１相比，致病性增强且表型恢复正常，提示弱毒菌株ＷＳ–０１的致病力减弱与其所含ｄＳＲＮＡ有关。
[期刊] 水产学报
[作者]
吴淑勤 李新辉 潘厚军 黄志斌
经分级离心提取，电泳分析，发现患暴发性传染病的鳜内脏组织内存在一种分子量约为1．45×107道尔顿的外源性核酸。病原类型及其相关的病症分析和人工感染试验结果显示，外源核酸与鱼发病密切相关。电镜观察到病鳜脾脏细胞内有大量截面呈六角形，直径约150nm的球状病毒颗粒，认为这种外源核酸源自病毒，由此确认病毒是鳜暴发性传染病的主要致病原。
关键词：
鳜 暴发性传染病 病原体
[期刊] 淡水渔业
[作者]
贺路 左文功 蔡传奇 艾晓辉 何介华
1991年6—9月,从湖北省沙市市及江陵县患暴发性传染病的鲢鱼、鳙鱼、团头鲂、白鲫和鲤鱼体内分离到10多株病原菌;这类细菌能够使多种淡水鱼致病,20℃—28℃时,LD_(50)为10~(4.2)—10~(5.0),能够产生溶血毒素和细胞毒素。经鉴定嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)亦是沙市地区暴发性传染病病原之一。
关键词：
暴发性传染病 嗜水气单胞菌
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘林丽 颜霞 赵亚兰
用肿囊腐霉的孢子悬液分别对脱毒马铃薯抗病自交系 F1 和感病自交系 F的扦插苗进行接种 ,并测定了接种后根中苯丙氨酸解氨酶 (PAL)、过氧化物酶 (POD)、超氧化物歧化酶 (SOD)的活性和可溶性蛋白的含量。结果表明 ,接种后 ,脱毒马铃薯抗病自交系 F1 的 PAL 活性曲线呈现 2个峰 ,而感病自交系 F的 PAL 活性曲线呈现 1个峰 ;病原菌感染早期 ,F1 ,F的 POD和 SOD活性都有不同程度的下降 ,但到后期 ,F1 的 POD和 SOD活性均迅速回升 ,而 F的则继续维持低水平 ;F1 的可溶性蛋白含量在接种后呈现 1个峰 ,到后期维持较高含量 ,而 F的可溶性蛋白含量持...
关键词：
马铃薯脱毒苗 青枯病 根部生理变化
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