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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
伊华林 霍岩
以柑橘胚性愈伤组织为试材,采用差速离心结合蔗糖衬垫法建立了柑橘线粒体快速、高效分离纯化技术体系,得到的线粒体完整,具有很强的荧光活性。利用SDS法提取、纯化的线粒体DNA(mtDNA)经紫外分光光度计分析,A260 nm/A280 nm值为1.80、A260 nm/A230 nm值为1.95;0.7%琼脂糖电泳检测获得的谱带清晰,长度在20 kb左右,无降解。本研究建立的方法与通常采用的密度梯度离心法相比,具有耗时短、对离心机的要求不高,且所提取的mtDNA产率高、结构完整等特点。以建立的技术体系提取7个柑橘品种的mtDNA进行RAPD分析,均扩增出清晰、多态性好的谱带,大小分布在250~2 ...
关键词：
柑橘 mtDNA RAPD 差速离心
[期刊] 华北农学报
[作者]
张德双 王国臣 张凤兰 王永健 方智远 余阳俊 赵岫云 徐家炳
提取高质量线粒体DNA(mtDNA)是研究大白菜细胞质雄性不育系不育分子特性的前提。以大白菜绿色叶片为试验材料,应用一种省时、简便、操作步骤少的方法,快速获得3组11份大白菜的mtDNA(包括保持系、Ogu CMS、Pol CMS和CMS96细胞质雄性不育系)。试验中不需要加入DNase I酶消化核DNA,提取的mtDNA质量较好;同时,采用RAPD技术,对11份大白菜mtDNA进行多态性分析,获得了与大白菜Ogu CMS和CMS96不育系相关的差异片段10条,与大白菜Ogu CMS不育系相关的差异片段3条。初步证实:大白菜CMS96和大白菜Ogu CMS不育系既有相似性又存在差异性。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王宏英 黄占景 仇艳光 沈银柱
利用RAPD技术分析了小麦耐盐突变体RH8706 49、其母本濮农3665以及与49同为"一粒传"后代的敏盐材料H8706 34的线粒体DNA,发现三个材料的线粒体DNA存在有明显的差异,初步认为这些差异可能与突变体49耐盐性的增强相关,回收克隆了突变体49线粒体DNA的特异扩增产物,为进一步的研究打下了基础。
关键词：
小麦 耐盐突变体 线粒体DNA RAPD
[期刊] 林业科学研究
[作者]
张路平 孔繁瑶 杨宝君
对松材线虫 7个株系和拟松材线虫 2个株系的线粒体DNA随机扩增多态性分析结果显示 ,松材线虫和拟松材线虫种间和种内都表现出很大的变异性 ,但种间变异明显大于种内变异 ,因而支持将松材线虫和拟松材线虫划分为两个不同的种。两个拟松材线虫株系 (法国株系和日本株系 )之间的相似值和松材线虫各株系间的相似值极为接近 ,由此看来 ,这两个株系的变异为种内变异 ,应同属于一个种。聚类分析的结果表明 ,松材线虫和拟松材线虫系两个明显不同的类群 ,即松材线虫类群和拟松材线虫类群。松材线虫类群又分为两个亚组 ,一个是以日本株系为代表 ,另一个是以北美洲 (美国和加拿大 )株系为代表
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘殿林 杨瑞环 哈玉洁
采用SDS法、尿素法、改良SDS法、氯化苄法和CTAB法对黄瓜的基因组DNA进行提取。结果表明,改良SDS法提取的黄瓜叶片DNA具有典型的天然DNA分子的标准紫外吸收光谱特点,其A260/A280在1 7～1 9之间,DNA的产量为450μg/g。用该法提取的黄瓜DNA适合进行RAPD分析。
关键词：
黄瓜 DNA提取方法 RAPD分析
[期刊] 中国水产科学
[作者]
唐首杰 李思发 蔡完其
测定了来自5个不同倍性团头鲂(Megalobrama amblycephala)群体(4n-F1、正交3n、反交3n、异源3n、二倍体2n)57个个体的线粒体DNA控制区、细胞色素b基因、16S rRNA基因和COⅡ基因序列,通过对这4段基因序列的联合分析,研究了5个不同倍性团头鲂群体的遗传变异。这4个基因片段的长度分别为:控制区937bp,细胞色素b基因1140bp,16S rRNA基因片段564bp,COⅡ基因片段642bp。将4个基因片段合并为1条总长度为3283bp的片段;在这条3283bp片段中,T、C、A、G4种核苷酸的平均含量分别为27.18%、25.45%、30.71%、16....
关键词：
团头鲂 倍性 线粒体DNA 遗传变异
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王春梅 张秋明 罗齐克 王红
柑橘植物组织中富含多糖、酚类、单宁、色素等物质,它们的存在严重干扰了柑橘黄龙病PCR检测的准确性。因此有必要筛选出一种能得到纯度高、结构完整的柑橘总DNA(含黄龙病病原DNA),且操作简便的提取方法。本研究对比试验了3种柑橘总DNA提取方法,方法1采用Sandrine等人的提取法;方法2采用CTAB法;方法3采用试剂盒法。实验研究表明,方法2提取柑橘黄龙病病原DNA的PCR检测准确率最高。
关键词：
柑橘黄龙病 柑橘总DNA PCR
[期刊] 华北农学报
[作者]
林宝刚 张明龙
Mx1和Mx2是通过辐射甘蓝型油菜瑞典品种得到的细胞质雄性不育系。采用RAPD技术对Mx1和Mx2及其保持系陕2B的线粒体DNA(mtDNA)进行了比较研究。共使用了210个随机引物,其中有163个引物在两系之间都得到了扩增产物,15个引物扩增结果在两系之间表现出了遗传多态性。Mx1和Mx2间也存在着明显的差异。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
汪登强 危起伟 王朝明 罗晓松
以白鲟科和鲟科的13种鲟鱼为研究对象,设计7对特异引物,利用PCR技术扩增鲟形目(Acipenseriformes)鱼类线粒体DNA(mtDNA),扩增片段大小在2～3kb,总长度约为整个mtDNA的97%。同时利用3个限制性内切酶,即MboⅠ、CfoⅠ和HaeⅢ对13种鲟形目鱼类进行限制性酶切片段长度多态性(RFLP)分析。结果总共检出233条电泳带,其中209条有多态现象,表明鲟形目鱼类mtDNA存在广泛变异。但是各个扩增片段的变异程度并不相同,其中NADH脱氢酶亚基基因的RFLP多态性较丰富,其次是细胞色素c氧化酶亚基基因,而两个rRNA基因最贫乏。说明在鲟形目鱼类mtDNA的进化中NA...
关键词：
鲟形目 线粒体DNA PCR-RFLP
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
赵兴波 李宁 吴常信
对太湖猪（二花脸）、大约克猪、北京黑猪、五指山猪、香猪、长白猪、杜洛克猪以及太湖猪与7个品种猪的正反交杂交家系线粒体DNAD－loopPCR－RFLP分析，发现猪的线粒体DNAD－loop约为1500bp，长白猪及部分大约克猪与其他猪品种在AccⅠ酶切位点存在多态性；太湖猪、大约克猪的正反交后代的线粒体DNAD－loop在AccⅠ酶切位点存在多态性，其遗传方式遵循母系遗传特性。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
史宪伟 曾凡同 邱祥聘 张亚平
用１８种限制性内切酶对７只云南鹅的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）进行了限制性片段长度多态（ＲＦＬＰ）分析。１７种酶在所有受试个体表现为一致的限制性态型（ｍｏｒｐｈ），一只灰羽鹅用ＰｖｕＩ消化时出现变异。用１４种限制性内切酶构建了云南鹅ｍｔＤＮＡ的酶切图谱。
关键词：
云南鹅,线粒体DNA,酶切图谱
[期刊] 水产学报
[作者]
张岩 肖永双 高天翔 于函
比较分析了钝吻黄盖鲽和尖吻黄盖鲽线粒体基因组COI、Cytb基因以及D-loop片段总长度为1 373 bp的核苷酸序列,两种间共检测到107处核苷酸替换,蛋白质编码基因上的核苷酸替代主要是第三密码子位点上的同义替换。核苷酸组成分析结果表明:3个目的片段的鸟嘌呤(G)含量普遍较低,在两个蛋白编码基因第三密码子位点上表现得尤为明显。两种黄盖鲽在线粒体基因组不同片段上存在明显的遗传分化,核苷酸替代速率最快的是D-loop,COI和Cytb核苷酸替代速率基本一致。建议在进行黄盖鲽属鱼类分子系统发育研究时,应该针对不同研究目的选择合适的分子标记。基于Cytb基因片段序列的分析结果表明:钝吻黄盖鲽和尖吻...
[期刊] 华北农学报
[作者]
李振兴 张德双 司龙亭 于拴仓 张凤兰 余阳俊 赵岫云 汪维红
介绍了一种快速、大量提取大白菜线粒体DNA的方法。以大白菜黄化苗为试验材料,通过加入一定量的DNaseⅠ和RNase A酶,充分消除核基因组DNA和RNA的污染。通过加入蛋白酶K和SDS,并经2步变温处理,即先在50℃条件下温育1 h,接着在37℃条件下温育1 h,有效地提高了mtDNA产出率。经凝胶电泳和PCR等检测,结果表明:mtDNA电泳条带清晰,OD260与OD280比值为1.8左右,纯度较高;利用细胞核看家基因Actin设计引物,扩增mtDNA,没有获得扩增产物,表明mtDNA中没有核基因组污染;利用大白菜CMS96胞质不育系基因orf222设计引物,扩增不育系和保持系mtDNA,仅...
[期刊] 华北农学报
[作者]
黎冬华 王林海 张艳欣 吕海霞 张晓燕 刘佳 张秀荣
以2个芝麻品种黄化苗为试验材料,通过比较植物线粒体DNA(mtDNA)提取过程中的关键影响因素DNase处理时间,建立了一种经济、快速、高效的芝麻mtDNA提取方法。该方法分别通过匀浆化处理、2 400 g离心15min结合12 000 g离心12 min的差速离心方法分离获得粗制线粒体,再经过DNase酶切处理1.5 h去除基因组DNA的污染,然后经0.6 mol/L蔗糖衬垫离心获得纯的线粒体,通过SDS-蛋白酶K方法裂解线粒体获得芝麻mtDNA。经过核酸蛋白分析仪分析表明:本技术每1 g芝麻黄化苗能获得1μg以上mtDNA;通过1.0%琼脂糖凝胶电泳检测表明获得mtDNA完整,无明显降解;...
关键词：
芝麻 mtDNA 提取 DNase处理
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李娜 覃磊 严佳文 陈佩 邓子牛
利用三氯乙酸-丙酮法、Tris-HCl提取法、改良PBS法提取柑橘叶片蛋白质,对提取蛋白质进行SDS-PAGE电泳、质谱鉴定和Western blot分析,结果表明,用改良PBS法提取的蛋白质质量浓度达30μg/μL,其SDS-PAGE电泳条带清晰,无杂质干扰,能达到质谱对样品的要求.Western blot分析结果表明,与抗柑橘溃疡病相关的PthA蛋白质在转pthA-nls基因糖橙和转pthA-nls基因冰糖橙中成功表达,pthA-nls基因已整合进甜橙基因组,表达蛋白质具有免疫反应活性.
关键词：
柑橘叶片 蛋白质 溃疡病 免疫印记
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