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[期刊] 中国农业科学
[作者]
王尉 胡玉林 莫亿伟 孙德权 谢江辉
【目的】研究防御基因表达模式,筛选抗枯萎病候选基因,进一步阐明抗病机制。【方法】以4号枯萎病生理小种诱导的‘农科1号’香蕉为试材,利用DSN(duplex-specific nuclease)均一化酶结合SMART(switching mechanism at 5′end of the RNA transcript)技术构建香蕉根的均一化全长cDNA文库;并用多重半定量RT-PCR技术研究防御基因的表达模式。【结果】经检测,文库滴度为3.1×106 cfu.mL-1,扩增后库容为2.8×108 cfu.mL-1。随机挑选580个克隆进行测序,去除低质量序列后获得421个unigenes,片段分...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
董章勇 秦世雯 王振中
【目的】构建香蕉枯萎病菌1号小种(FOC1)和4号小种(FOC4)果胶裂解酶(Pectate lyases,PL)基因的真核表达载体,并进行诱导表达,为进一步研究PL在病原菌致病过程中的作用奠定基础。【方法】将质粒pMD18-pl-foc1、pMD18-pl-foc4和真核表达穿梭载体pPICZαA进行EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切反应,回收目的片段连接,转化至DH5α进行筛选扩繁,对菌落进行PCR鉴定后抽提质粒进行PCR和EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切鉴定。将阳性载体线性化后电击转化毕赤酵母SMD1168感受态细胞,用甲醇进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析。【结果】成功构建了FOC1和...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
曾蕊 陈琦光 禄璐 唐倩菲 周而勋
为探讨香蕉被枯萎病菌4号小种(Fusarium oxysporum f.sp.cubense race 4)侵染后防御酶活性的变化规律,采用伤根浸孢子液接种法,对粉蕉(ABB)和巴西蕉(AAA)的香蕉苗进行人工接种试验,测定香蕉苗与枯萎病菌互作过程中苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)5种防御酶的活性变化。结果表明:接种的香蕉苗体内PAL、POD、PPO和SOD酶活性都高于未接种的对照香蕉苗,且各种酶活性变化也比未接种的变化复杂,表明这4种酶在枯萎病菌侵染过程中积极参与了香蕉苗体内的抗病反应;但接种与未接种的香蕉苗...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张龄尹 刘珊珊 魏文哲 徐谞 操一凡 刘红军 沈宗专 李荣 沈其荣
[目的]香蕉枯萎病是一种毁灭性土传病害，对香蕉产业的可持续发展造成重大威胁。为实现香蕉枯萎病的有效防控，本研究拟初步构建对香蕉枯萎病具有抑制作用的生物防治菌群。[方法]首先利用平板对峙法从香蕉枯萎病的抑病型土壤中分离筛选对香蕉枯萎病菌（尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种）具有抑制作用的菌株，并通过16S rRNA测序技术对菌株进行鉴定，然后通过室内培养试验测定了菌株的产生长素和生物膜形成能力，最终结合室内共培养试验和盆栽试验探究了构建的菌群对香蕉枯萎病的抑制作用。[结果]分离筛选到的4株拮抗菌均对香蕉枯萎病菌表现出较强的抑制作用，其16S rRNA序列检测结果，分别为芽胞杆菌（Bacillus sp.）、链霉菌（Streptomyces sp.）、芽胞杆菌（Bacillus sp.）、川大肠杆菌（Enterobacter sp.）；室内培养试验发现，所分离筛选到的4株拮抗菌具有较强的产生长素和生物膜形成能力；体外共培养研究结果进一步发现，由4株菌组成的合成菌群表现出最强的抑制效果，相比于对照，抑菌率增加了93.6%；最终盆栽试验证实了该合成菌群能有效在香蕉植株根际定殖，并显著降低了病原菌数量，相比于对照，其病原菌数量降低了92.13%。[结论]本研究成功分离筛选并构建了一个由4株细菌组成的抑病菌群，盆栽条件下其能明显抑制香蕉枯萎病病原菌的增殖，为利用有益微生物防控香蕉枯萎病提供了一定的技术支撑。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张龄尹 刘珊珊 魏文哲 徐谞 操一凡 刘红军 沈宗专 李荣 沈其荣
[目的]为实现香蕉枯萎病的有效防控，本研究拟构建对香蕉枯萎病具有抑制作用的生物防治菌群。[方法]利用平板对峙法从香蕉枯萎病的抑病型土壤中分离筛选对香蕉枯萎病菌(尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种)具有抑制作用的菌株，并通过16S rRNA测序技术对菌株进行鉴定，通过室内培养试验测定菌株产生长素和生物膜形成能力，结合室内共培养试验和盆栽试验探究构建的菌群对香蕉枯萎病的抑制作用。[结果]分离筛选到的4株拮抗菌均对香蕉枯萎病菌表现出较强的抑制作用，16S rRNA序列检测结果表明，其分别为芽胞杆菌(Bacillus sp.)、链霉菌(Streptomyces sp.)、芽胞杆菌(Bacillus sp.)、肠杆菌(Enterobacter sp.);室内培养试验发现，分离筛选的4株拮抗菌具有较强的产生长素和生物膜形成能力；体外共培养研究结果进一步发现，由4株菌组成的合成菌群表现出最强的抑制效果，相比于对照，抑菌率增加了93.6%;盆栽试验证实该合成菌群能有效在香蕉植株根际定殖，并显著降低病原菌数量，相比于对照，其病原菌数量降低了92.13%。[结论]成功分离筛选并构建了一个由4株细菌组成的抑病菌群，盆栽条件下其能明显抑制香蕉枯萎病病原菌的增殖，为利用有益微生物防控香蕉枯萎病提供了一定的技术支撑。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
尤海霞 郭萍婷 林亚琪 杨帅 卢松茂 云英子
尖孢镰刀菌古巴专化型(Foc)是引起香蕉枯萎病的主要病原菌.本试验利用生物学功能分析方法对Zn(Ⅱ) 2Cys6型转录调控因子Fow2(F.oxysporum wilt 2)在香蕉枯萎病菌中的致病调控功能进行了初步研究.结果表明：转录因子Fow2在FocTR4 (Foc tropical race 4)和Foc1 (Foc race 1)中均不参与调控菌丝的营养生长、分生孢子形态和孢子产量，也不参与调控病菌对盐胁迫、氧化胁迫、蛋白质胁迫以及细胞壁胁迫的响应过程；Fow2敲除突变体在香蕉植株叶片和根部的致病性明显降低，但其在根部的附着能力及早期侵染过程与野生型相比无明显差异.由此可知，Fow2是与Foc菌株致病性相关的转录因子.
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
黄永红 吕顺 李春雨 魏岳荣 易干军
为探明香蕉枯萎病的发病机理,以巴西香蕉为材料,采用盆栽试验,研究香蕉枯萎病4号生理小种(Fusarium oxysporum f.sp.cubense race 4,Foc4)对香蕉根际土壤微生物和土壤酶活性的影响。结果表明:接种Foc4对香蕉根际土壤微生物总量和细菌数量(B)影响不大,但显著提高了真菌数量(F)及其在整个微生物中的比例,显著降低了放线菌数量(A)及其在整个微生物中的比例;B/F及A/F显著降低;根际土壤中过氧化氢酶和转化酶活性显著升高;Foc4侵染改变了香蕉根际土壤中微生物的数量,导致其种群结构失衡,这可能是导致香蕉枯萎病发生的重要因素之一;Foc4侵染后香蕉根际土壤酶活性发...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
韦锡昌 林蓝慧 蒙姣荣 李界秋 王忠文
【目的】从香蕉根际土壤等材料中分离筛选获得对香蕉枯萎病菌有抑制作用的拮抗菌，为香蕉枯萎病生物防治提供理论基础及菌株资源。【方法】采用稀释平板分离法，从香蕉枯萎病罹病土壤、桑蚕和发酵藻等材料中分离得到微生物，再分别采用平板划线法和单孢分离法对细菌、真菌进行分离和纯化，以香蕉枯萎病菌亚热带4号生理小种（Foc STR4）为靶标菌，采用平板对峙法进行拮抗菌的筛选试验，对抑制效果最好的菌株进行基因测序鉴定、生理生化指标测定；以只接种Foc STR4为对照进行防治香蕉枯萎病的盆栽试验。【结果】从罹病的香蕉根际土壤中筛选得到一株对Foc STR4有明显抑制效果的拮抗细菌TU3-1，抑制率为56.18%，在实验中发现TU3-1对香蕉炭疽病菌等其他13种供试植物病原菌有抑制作用，其中对香蕉炭疽病菌的抑制效果最好，抑制率为75.99%。盆栽试验结果显示，与只接种Foc STR4处理相比，对香蕉枯萎病的防治效果为51.81%。经基因测序、序列比对和生理生化实验观测，TU3-1菌株被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌属（Bacillus velezensis），该菌株为革兰氏阳性菌，厌氧性，可水解淀粉和纤维素，产生氨气和蛋白酶，最适宜培养基为PDA培养基，最适培养温度为30 ℃，最适生长pH为7。【结论】筛选鉴定得到1株对Foc STR4抑制率为56.18%、对香蕉枯萎病防治效果为51.81%的拮抗细菌TU3-1，被鉴定为B. velezensis TU3-1对其他10种植物病原真菌及3种植物病原细菌也有抑制作用，表现出广谱抑菌活性，可进一步开发作为生防菌种质资源。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
黄艳青 庄敬华 高增贵 徐韶 陈捷
测定了木霉菌对甜瓜枯萎病的室内及田间防效。分析了应用木霉菌后,甜瓜根组织中部分防御酶系比活力的变化。结果表明:木霉菌对甜瓜枯萎病有较好的防治效果,室内防效和田间防效分别为72.73%和79.00%,接种木霉菌后-β1,3-葡聚糖酶活性升高,挑战接种尖孢镰孢菌,苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)酶活性有明显的增强,表明木霉菌能明显诱导甜瓜对枯萎病的抗性反应。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
迟吉娜 蔡肖 张建宏 甄军波 刘琳琳 田海燕 唐丽媛 刘存敬 崔瑞敏 张香云
【目的】构建优质陆地棉栽培品种冀２２８纤维均一化全长ｃＤＮＡ文库，降低纤维中存在的高峰度基因的拷贝数，提高发现纤维发育相关基因随机序列和稀有基因的效率，为公共数据库提供丰富的陆地棉ＥＳＴ资源。【方法】以优质陆地棉冀２２８开花后８—４０ Ｄ纤维为材料，将纤维全长ｃＤＮＡ与ＧＡＴＥｗＡｙ供体载体ｐ ＤＯＮＲ２２２重组，构建了棉花纤维的非剪切型全长ｃＤＮＡ原始文库。利用均一化技术获得均一化全长ｃＤＮＡ文库，进而测序获得大量的ＥＳＴ序列。采用生物信息分析手段，对所测ＥＳＴ进行拼接、比对、ｃＯＧ功能注释和ＧＯ注释。【结果】构建了优质陆地棉冀２２８纤维均一化全长ｃＤＮＡ文库，该文库初级文库库容为１．０６×．．．
关键词：
陆地棉 纤维 均一化 cDNA文库
[期刊] 西南农业学报
[作者]
番华彩 魏薇 曾莉 徐胜涛 李舒 郭志祥 郑泗军
【目的】研究云南香蕉枯萎病和健康植株根际土壤细菌群落结构组成差异,探索香蕉枯萎病发生的微生态机制,优化根际土壤微生物群落结构为其后续生态防控提供新策略。【方法】在云南香蕉枯萎病发生的蕉园,分别采集发病和健康植株的根际土壤,利用高通量测序技术研究细菌群落多样性、结构和组成的差异。【结果】香蕉植株根际土壤细菌多样性存在显著性差异,香蕉枯萎病植株的土壤细菌群落多样性高于健康植株。变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、放线菌门(Actinobacteria)和酸杆菌门(Acidobacteria)等4个菌门是香蕉植株根际土壤中的优势门菌群。2种类型香蕉植株根际土壤中有厚壁菌门(Firmicutes)、棒状杆菌门(Rokubacteria)和硝化螺旋菌门(Nitrospirae)等5个门菌群差异显著。其中,厚壁菌门(Firmicutes)丰度健康植株较发病植株高,棒状杆菌门(Rokubacteria)和硝化螺旋菌门(Nitrospirae)丰度发病植株较健康植株高。属水平上,健康植株的优势属依次为芽胞杆菌属(Bacillus)、朱氏杆菌属(Chujaibacter)、芽单胞菌属(Gemmatimonadaceae)和鞘脂单胞菌属(Sphingomonas);发病植株的优势属依次为:芽胞杆菌属(Bacillus)、芽单胞菌属(Gemmatimonadaceae)、鞘脂单胞菌属(Sphingomonas)和朱氏杆菌(Chujaibacter);芽胞杆菌属(Bacillus)、朱氏杆菌属(Chujaibacter)和土壤链霉菌属(Streptomyces)等5个菌属在2种类型香蕉植株根际土壤中差异显著,其中,芽胞杆菌属、朱氏杆菌属和土壤链霉菌属的丰度健康植株明显高于枯萎病植株。【结论】香蕉枯萎病和健康植株根际土壤细菌群落结构在一定程度上具有同源性,但部分菌群在2种类型植株根际土壤中的组成丰度有显著差异;差异菌群的功能多样性及与香蕉枯萎病病原菌的互作关系尚待明确。
关键词：
香蕉 枯萎病 土壤 细菌多样性 群落结构
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
黄永辉 杨媚 权永兵 周而勋
采用含药培养基生长速率法测定苯并噻二唑(benzothiadiazole,BTH)对香蕉枯萎病菌4号生理小种(Fusarium oxysporumf.sp.cubense race 4,Foc 4)的室内毒力,结果表明BTH对Foc 4的EC50为929.9μg/mL,与杀菌剂多菌灵相比,其作用十分微弱。然后,在温室条件下,采用盆栽试验测定BTH对香蕉枯萎病的防治效果,结果表明BTH质量浓度为50μg/mL时的诱抗效果最好,防治效果可达到66.6%,且随着浓度的升高其防治效果逐渐降低。最后,在温室条件下测定BTH处理香蕉苗后,其体内6种防御酶活性的变化,结果表明BTH可以提高香蕉苗体内多种防御...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
何欣 黄启为 杨兴明 冉炜 徐阳春 沈标 沈其荣
【目的】通过筛选和鉴定香蕉枯萎病的致病菌株,之后接种不同浓度的病原菌孢子悬液,研究香蕉植株的发病程度,以期为香蕉枯萎病的田间诊断提供科学的理论依据。【方法】采用室内筛选和盆栽试验相结合的方法。【结果】从香蕉枯萎病病株的假茎基部分离筛选纯化获得了一株致病的尖孢镰刀菌菌株。盆栽回接该菌株35d后,有90%香蕉植株发病,香蕉死亡率高达70%,经鉴定确认该菌株为香蕉枯萎病致病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,FOC);本试验条件下,致病菌株的孢子悬液浓度为103CFU/g土时是香蕉枯萎病发病的临界浓度,当致病菌株的孢子悬液浓度不超过105CFU/g土时,香蕉枯萎病的发...
关键词：
香蕉枯萎病 病原菌 孢子浓度 发病程度
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
黄永辉 陈琦光 迟远丽 杨媚 周而勋
为探明土壤理化因素对香蕉枯萎病菌的影响，在实验室条件下，以尖镰孢古巴专化型４号生理小种（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ Ｆ．ｓｐ．ｃｕｂｅｎｓｅ ｒａｃｅ ４，Ｆｏｃ ４）菌株为对象，模拟不同的土壤类型、温度、含水量和ｐＨ值等条件，观察和分析这些因子对Ｆｏｃ ４生长和侵染的影响。结果表明，Ｆｏｃ ４在土壤中生长的最适条件为：土壤温度２５℃，含水量达到３０％和偏酸性条件（ｐＨ ４～５）；在盆栽试验中，Ｆｏｃ ４的最佳侵染条件为：温度３０℃，偏酸性（ｐＨ ３～５）的土壤环境。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
吕伟成 张绍升
对采自福建省香蕉枯萎病菌(Fusarium.oxysporumf.sp.cubense)3个1号生理小种(Foc1)菌株和17个4号生理小种(Foc4)菌株的ITS区进行PCR扩增,将Foc1代表菌株FOCABB361和Foc4代表菌株FOCAAA315的rDNA-ITS序列提交GenBank,获得的GenBank登录号分别为EU395428和EU332405.序列分析结果表明:Foc4号生理小种的ITS2区长度为151 bp;Foc1号生理小种的ITS2区长度为152 bp;Foc1号和4号生理小种的ITS1区完全一致,长度都为147 bp.Foc1号生理小种与4号生理小种的ITS序列差异不...
关键词：
香蕉枯萎病菌 rDNA-ITS 序列分析
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