利用单因素筛选和均匀设计试验对拮抗性枯草芽孢杆菌B03发酵生产活菌体的液体培养基和发酵条件进行了研究,优化出了以经济、易得的玉米粉和豆饼粉为碳、氮源的最佳摇瓶发酵培养基,其配方为:玉米粉3.0%,豆饼粉6.0%,K2HPO4.3H2O 0.3%;最佳发酵条件为:种龄21~24 h,接种量5%,500 mL三角瓶装液量50 mL,初始pH值6.0,发酵温度35℃,摇床转速180 r/min,发酵周期60~66 h。利用优化后的培养基和发酵条件进行验证试验,获得了104.24×108~105.75×108cfu/mL的活菌体产量,较原始基础发酵培养基在常规培养条件下的菌体产量提高了96%以上。

通过单因素试验和正交试验,对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Xi-55的液体发酵培养基和工艺条件进行了优化,确定了在500 mL锥形瓶中发酵培养基的最佳培养基为:蛋白胨3%,甘油1.0%,K2HPO40.05%,MgSO4.7H2O 0.15%;最适发酵条件为:时间36~48 h,温度28~30℃,初始pH为7,接种量2%,装液量100 mL/500 mL锥形瓶。20 L发酵罐扩大培养的初始pH为7.2,发酵温度28℃±0.5℃,通气量10 L/min,搅拌转速180 r/min,罐压0.05~0.06 MPa,发酵终止在44 h前,最佳放罐时间为40~44 h,此时发酵液中...

通过单因子试验筛选到了适合枯草芽孢杆菌NJ-18生防菌株生长及其拮抗物质产生的最佳碳源为玉米粉和麦芽糖,最佳氮源为豆粕,最佳金属离子是Ca2+。用正交试验法确定了该培养基各组分的最佳含量为:玉米粉10g.L-1、麦芽糖30g.L-1、豆粕30g.L-1、CaCO31.5g.L-1;在确定适合该菌株的培养基组分基础上,对其培养条件进行优化试验,结果表明:初始pH为6.8、培养温度为28℃、250mL摇瓶装液量为90mL、接种量为2%(体积分数)、培养时间为36h、转速为180r.min-1时为该菌株的最佳培养条件。

[目的] 旨在明确枯草芽孢杆菌发酵液组分对番茄幼苗生长的影响，针对有效代谢产物进行发酵条件优化，为制备高效微生物肥料提供技术支持。[方法] 以枯草芽孢杆菌枯草亚种（Bacillus subtilis subsp. subtilis）NRCB002为供试菌株，通过温室盆栽试验，明确NRCB002发酵液组分对番茄幼苗生长和根系形态的影响；以NRCB002菌株生长量及代谢产物乙偶姻产量为评价指标，通过单因素优化法确定碳源和氮源的种类、浓度、发酵温度和发酵时间，通过正交试验设计和极差分析优化无机盐成分。[结果] 与去离子水和发酵培养基对照相比，重悬菌液、发酵液上清、发酵液及含乙偶姻的重悬菌液均显著提高了株高、茎粗、叶面积、根冠比、总根长、总根表面积、总根体积、侧根数、地上部和根部的干重；其中，发酵液上清及含乙偶姻的重悬菌液处理的番茄幼苗地上部干重显著高于重悬菌液处理幼苗地上部干重；发酵液上清、发酵液及含乙偶姻的重悬菌液处理的番茄幼苗根部干重显著高于重悬菌液处理幼苗根部干重。NRCB002菌株以80g ·L~(–1)蔗糖为碳源、以25 g·L~(–1)酵母浸粉为氮源时NRCB002的生物量和乙偶姻产量均较高；最优无机盐组合为：KH_(2)PO_(4 )1.5 g·L~(–1)、MgSO_(4)·7H_(2)O 1.0 g·L~(–1)和MnSO_(4)·H_(2)O 0.2 g·L~(–1)；优选的发酵温度为37 ℃，发酵时间96 h。使用优化后的发酵条件，用1 L摇瓶进行发酵，NRCB002生物量（OD_(600)）为15.70，乙偶姻产量为29.65 g·L~(–1)，分别是初始发酵培养基的3.4倍和11.8倍。[结论] 菌株NRCB002发酵液对番茄的生长具有良好的促生作用，乙偶姻是其发酵液中关键的促生物质；优化后的发酵培养基为：蔗糖80 g·L~(–1)、酵母浸粉为25 g·L~(–1)、KH_(2)PO_(4) 1.5 g·L~(–1)、MgSO_(4) 1.0 g·L~(–1)和MnSO_(4)·H_(2)O 0.2 g·L~(–1)；发酵温度37 ℃，发酵时间96 h。可为制备功能稳定的芽孢杆菌类微生物肥料提供一定的借鉴。

[目的]优化枯草芽孢杆菌NTGB-178发酵工艺,为提高发酵液中的生物量与芽孢产量,降低该菌产品制剂生产成本提供技术支撑。[方法]采用响应面法(RSM)对NTGB-178发酵工艺进行优化。在单因素试验基础上,利用Plackett-Burman设计试验,筛选出影响NTGB-178芽孢产量的主要影响因子。利用最陡爬坡试验,确定逼近存在最大响应值的中心点。最后利用Design-Expert软件设计Box-Behnken试验,对其结果进行多元二次回归拟合,建立响应面方程,绘制响应面图,并对影响发酵产孢的主要因素及

研究黄芪多糖-枯草芽孢杆菌合生元菌液制备过程中,黄芪多糖的最适添加量以及合生元菌液的最适培养时间。将活化后的枯草芽孢杆菌ACCC11025菌液以1%的接种量分别加入含黄芪多糖浓度为0,0.5,1,1.5,2,2.5,3,6,10mg.mL-1的液体培养基中,分别置37℃、120r.min-1以及32℃、120r.min-1培养箱中培养,每隔0.5h检测菌液OD值。结果表明:添加浓度为1.5mg.mL-1黄芪多糖的培养基中,枯草芽孢杆菌ACCC11025菌液浓度达到最高,分别比对照组和10mg.L-1组提高13.8%和148.8%(p<0.05);在5.5h代时最小,为1.22h,黄芪多糖-枯草...

枯草芽孢杆菌Ｂ－９０３菌株是从郑州果园中筛选出的，它代谢产生的抗菌物质对多种植物病原菌具有强抑制作用。通过对其抗菌物质产生条件的研究认为，在ＮＹＤＡ培养液中，培养液初始ｐＨ值为７时，最有利于抗菌物质的产生；振荡培养１１２ｈ，培养滤波的抑菌活性可达最大值；不同初始接菌量对抗菌物质的产生时间影响不大；在２５０ｍｌ三角瓶中，随装液量减少，培养液抑菌活性有增大趋势；大米粉和豆饼粉是最适合产生抗菌物质的碳、氮源；调节培养滤液ｐＨ值至４为抑菌活性物质最简便的保存方法，振荡培养１１２ｈ的培养滤液的最低抑菌浓度为稀释２３１８倍。

研究了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis Cohn,1872)(菌株编号:LB-B3)的培养条件及其在净化对虾养殖池水样方面的效果。实验分别设置了9个不同的pH值梯度(pH 2～10)和6个不同接种量梯度(0.3%、0.5%、1%、3%、5%和7%),以吸光值(OD)为生长指标,进行了枯草芽孢杆菌培养条件的优化实验;同时又设置了5个不同接种浓度(0 CFU/mL、5.2×104CFU/mL、1.04×105CFU/mL、1.56×105CFU/mL和2.08×105CFU/mL)接种待处理水样,测定了96 h内化学耗氧量、亚硝酸氮、氨态氮和溶氧等4个水质指标的变化情况。结果表明:...

从枯草芽孢杆菌1A 747菌株基因组克隆Am yX基因信号肽序列,构建枯草芽孢杆菌分泌表达载体pYGAm yX,转化枯草杆菌W B 700得W B 700(pYGAm yX)。采用重叠PCR技术,将Am yX基因信号肽突变,使其N端正电荷增加,H区疏水性降低,利用突变后信号肽序列构建枯草杆菌分泌表达载体pYGMUT,转化枯草杆菌W B 700得W B 700(pYGMUT)。对W B 700(pYGAm yX)和W B 700(pYGMUT)的表达产物进行检测,研究Am yX基因信号肽突变对枯草杆菌蛋白分泌途径的影响。结果表明,W B 700(pYGAm yX)和W B 700(pYGMUT均...

为净化渔业养殖水质,研究了从水产养殖水体及底泥中分离的枯草芽孢杆菌的水质净化作用。结果表明,枯草芽孢杆菌可迅速有效的降低水体中的硝酸盐、亚硝酸盐含量,4 d去除率均达99%以上;可有效降低水体的pH值;对水体中溶氧和硫化物含量的影响较小。枯草芽孢杆菌能够在一定程度上改善养殖水体的水质状况,对模拟养殖水体的水质具有一定的净化作用。

【目的】优化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)启动子和表达宿主,构建其高效的表达系统,为重组枯草芽孢杆菌的研究和应用奠定基础。【方法】以β-半乳糖苷酶编码基因为报告基因,以诱导型的枯草芽孢杆菌麦芽糖操纵元启动子为调控元件、大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒为载体骨架,构建枯草芽孢杆菌高效表达载体pGJ222,将其电转化到B.subtilis 1A747菌株后进行诱导表达试验和葡萄糖抑制试验。利用同源重组的方法,用枯草芽孢杆菌组成型启动子P43替换了B.subtilis野生型菌株1A747麦芽糖操纵元的上游调控序列,得到优化重组表达宿主菌B.subtilis BCYL,将pGJ222...

采用基质栽培方式,研究了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)在盐胁迫下对黄瓜植株生长、生理生化代谢、产量及品质的影响。结果表明,在无盐胁迫栽培时,枯草芽孢杆菌对黄瓜植株的生长具有促进作用;在1 g.L-1NaC l胁迫下,枯草芽孢杆菌同样促进植株的生长,增加了株高与叶面积,提高了植株SOD、POD和CAT保护酶的活性,降低了MDA的含量,产量比未添加枯草芽孢杆菌处理的增产18%,且一定程度地提高了果实的品质;而在2 g.L-1NaC l胁迫下,枯草芽孢杆菌对黄瓜植株的生长和产量无促进作用。因此,在1 g.L-1NaC l胁迫下,枯草芽孢杆菌可一定程度提高黄瓜植株的耐盐性。

在养殖水体中加入特定的芽孢杆菌及酵母菌 ,能使其定殖于养殖水体 ,生长繁殖后测定各项水质指标 ,证明其能迅速而有效的降低水中亚硝酸盐的含量 ,并对水中溶氧的影响较小 ,能够有效地改善养殖水体的水质状况。

采用质粒消除与热激法构建枯草芽孢杆菌工程菌株B2-GFP,并测定其生长曲线、稳定性及对烟草疫霉的抑制率；同时，采用灌根和稀释平板法测定该菌株在烟株土壤中的活菌数.结果表明：工程菌株B2-GFP较野生型菌株B2提前1 h进入指数增长期，在培养11 h后同时进入稳定生长期；B2-GFP与烟草疫霉对峙培养后抑菌率达48.30%;在不含卡那霉素的LB固体培养基中继代培养10代后，在荧光显微镜下，菌落及菌体仍具有较强绿色荧光.烟株根际土壤活菌数大于根围土壤活菌数，且均呈现先升后降再趋于稳定的规律.在灭菌土壤中接种工程菌株B2-GFP第14天，烟株根际土壤活菌数达1.61×10~7 CFU·g~(-1);在自然土壤中接种该菌第42天，烟株根际土壤活菌数达1.46×10~7 CFU·g~(-1);接种第70天仍能保持绿色荧光表型.本研究证实工程菌株B2-GFP在烟田土壤中能够定殖并保持其特性.

【目的】为开发抗病基因和生物农药新资源,纯化鉴定枯草芽孢杆菌B111分泌的抗棉花黄萎病菌蛋白质,克隆其编码基因,并分析在毕赤酵母中的表达特性。【方法】通过超滤浓缩、90%硫酸铵沉淀、葡聚糖凝胶QAE-A50强阴离子交换柱洗脱及冻干等步骤,分离纯化抗菌蛋白。采用联机反相毛细管柱液相色谱电喷雾串联质谱,鉴定抗菌蛋白种类。克隆包含前导区序列在内的抗菌蛋白基因序列,构建表达载体pPIC9K-PT,转化毕赤酵母GS115。转化子经PCR鉴定,甲醇诱导表达产物经中性蛋白酶活性和抗菌活性检测验证功能。【结果】纯化鉴定了一个来源于枯草芽孢杆菌B111的抗菌中性蛋白酶BS2。克隆了包含前导区序列在内的抗菌蛋白基...