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[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
高梦娇 王林霞 罗智 赵若雨 刘志国 刘平 刘孟军 王立新
【目的】探究枣类钙调蛋白（ZjCML）在抗寒性中的重要作用，旨在挖掘关键抗寒ZjCML基因，为进一步利用其进行枣抗寒育种提供理论参考。【方法】本研究利用生物信息学技术，全面分析了枣CML基因家族成员的数目及相关结构特征，并利用RNA-seq和实时荧光定量PCR技术分析其响应低温胁迫时的表达模式，为筛选关键抗寒基因奠定基础。【结果】在枣基因组数据中共鉴定到23个ZjCML基因，不均匀地分布在12条染色体上。与拟南芥CMLs蛋白构建进化树分析发现ZjCMLs可被分为12个类群。蛋白网络互作预测发现16个ZjCMLs存在于该网络中，且具有一定的互作关系。RNA-seq结果表明ZjCML13和ZjCML6基因表达模式在‘冬枣’及其同源四倍体响应低温胁迫中具有显著差异，其中ZjCML13在‘冬枣’响应低温胁迫6和24 h时极显著上调表达，而在‘冬枣’同源四倍体中表达差异不显著。外源Ca Cl2和褪黑素处理后，ZjCML13在‘冬枣’同源四倍体响应低温胁迫6和24 h时极显著上调表达，说明其可能通过诱导ZjCML13表达调控‘冬枣’同源四倍体抗寒性。【结论】枣CML基因家族具有特定的结构特征及响应低温胁迫，ZjCML13可能在调控‘冬枣’及其同源四倍体抗寒性差异中发挥重要作用。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
常欣 庞磊 李叶云 魏艳丽 江昌俊
【目的】通过转基因烟草验证茶树CsCBF1基因抗寒性功能,为发掘、筛选茶树重要功能基因提供理论依据。【方法】利用根癌农杆菌介导法将构建的表达载体pBI121-CsCBF1导入烟草,通过PCR、RT-PCR和GUS活性染色鉴定外源CsCBF1基因是否导入并整合到烟草基因组上转录表达。然后将转pBI121-CsCBF1型、转pBI121型和野生型烟草分别置于25,4和0℃下处理48h后,检测其膜质通透性、丙二醛(MDA)含量和叶绿素荧光参数Fv/Fm,并将0℃处理3d的转pBI121-CsCBF1型和野生型烟草置于25℃下培养1周后观测恢复表型和统计死亡率。【结果】成功构建表达载体pBI121-C...
关键词：
茶树 烟草 CsCBF1基因 抗寒性
[期刊] 华北农学报
[作者]
蔡曼 李卫华 柳延涛 余渝 孔宪辉 王娟 王旭文 刘丽
为研究Δ9-硬脂酰-ACP脱氢酶基因的功能及其与植物抗寒性的相关性,以陆地棉GhSAD2基因(KX197920)为目的基因,构建植物表达载体pBI121-GhSAD2,将该表达载体通过电击法导入根癌农杆菌GV3101中,采用根癌农杆菌介导的叶盘法转化烟草。通过PCR和GUS活性染色鉴定外源GhSAD2基因是否导入并整合到烟草基因组上转录表达。将转pBI121-GhSAD2型和野生型烟草置于4℃下处理48 h后,检测其电解质渗漏率并观察其表型。研究结果证明目的基因GhSAD2已整合到烟草及棉花的基因组中,共
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘凯 胡春华 杜发秀 张玉娥 魏岳荣 易干军
【目的】研究超表达拟南芥CBF1基因(AtCBF1)对大蕉抗寒性的影响,为从大蕉克隆抗寒相关基因奠定基础。【方法】采用农杆菌介导法转化东莞大蕉的胚性细胞悬浮系,获得转AtCBF1基因的大蕉植株;利用GUS组织染色、PCR、RT-PCR以及RT-qPCR对转基因植株进行鉴定;比较低温处理后的转基因株系和对照的冷害特征以及超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量等生理生化指标,鉴定转基因大蕉植株的抗寒能力。【结果】试验共获得6个抗性再生转化系。GUS组织染色结果表明,除T1外,其余均为阳性;PCR鉴定结果表明,AtCBF1在6个抗性再生转化系均为阳性,而GUS基因在T1转化系中没有检测出...
[期刊] 林业科学
[作者]
孙海伟 刘静 宋健 翁曼丽 罗磊 黄艳艳 张虹 牛庆霖 王斌 冯殿齐
对转AmGS基因(从沙冬青中克隆的肌醇半乳糖苷合成酶基因)的红叶石楠植株进行多项分子检测(PCR,Southern,RT-PCR),结果表明AmGS基因已经整合到转基因株系R6和R7的基因组DNA中,并检测到转录水平上的表达。随后,经对R6和R7两个转基因株系进行连续6代芽切扩繁继代株系的PCR检测,发现导入的AmGS基因传递到所有芽切扩繁后代植株中。植株抗寒能力试验结果表明,在相同低温处理条件下,转基因株系均比未转基因植株的存活率要高。相对电导率测定结果表明,随着处理温度的降低,2个转基因株系相对电导率升高的程度明显低于未转基因的对照植株。低温半致死温度(LT50)测定结果表明,2个转基因株...
[期刊] 林业科学
[作者]
韩善华 李劲松
沙冬青叶片上的表皮毛密集,角质层很厚,表皮细胞连接紧密,栅栏组织特别发达,海绵组织很少。在栅栏组织细胞中,液泡膜大量内陷,在液泡中形成各种膜状结构,有的还与附近的细胞质,乃至小泡和内质网一起内陷,形成细胞质突起,进而形成细胞质带,不断分割液泡,使液泡体积越来越小,数量越来越多,分数度大大提高。在这些小液泡中,颗粒状和纤维状物质十分丰富,但一般很少有大量的膜状结构。
关键词：
沙冬青 叶 结构特征 抗寒性
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
陈罡 白丽萍 魏忠平 叶景丰 刘红民 吴月亮 范俊岗
为获得美国白蜡CBF基因的全长序列,根据不同物种CBF基因保守区域设计简并引物,利用RT-PCR和RACE技术进行试验。结果表明:其编码区为675bp,编码224个氨基酸。通过氨基酸序列同源比发现,美国白蜡CBF基因编码的氨基酸序列包含一个完整CBF蛋白的特征序列—AP2保守结构域,同时又存在单个氨基酸残基或基序的替换、插入和缺失;进化树分析表明:FaCBF与木本植物同处一个进化树分枝,其中,FaCBF基因与大叶钻天杨的CBF基因相似性最高;低温胁迫试验表明:FaCBF相对表达量随时间的延长而逐渐升高,在12h时,相对表达量达到最高,随后随时间的延长而逐渐降低。结果显示低温可以诱导FaCBF基...
关键词：
美国白蜡 低温胁迫 CBF基因 基因克隆
[期刊] 林业科学
[作者]
李真 袁婷婷 朱成磊 杨克彬 宋新章 高志民
【目的】氮素是植物生长发育必需的大量元素,铵态氮是根系可利用的主要氮源形式之一,铵态氮转运蛋白(AMT)在铵态氮的获取和运输中发挥着重要作用。速生是毛竹最主要的特点,鉴定其中的AMT基因,并对其结构和表达模式进行系统分析,为深入研究毛竹AMT家族基因在快速生长和环境适应性中的功能奠定基础。【方法】采用生物信息学方法鉴定毛竹AMT家族基因成员,对其系统发育、结构特征、组织表达特异性以及对激素和非生物胁迫应答进行分析,通过q PCR方法验证关键基因在干旱处理下的表达模式。【结果】在毛竹基因组中共鉴定出13个AMT家族基因,命名为PeAMT1-PeAMT13,其编码蛋白长度为408～497个氨基酸,亚细胞定位预测显示所有PeAMTs均定位于质膜上。系统发育分析表明,PeAMTs分为2个亚家族,不同亚家族之间具有各自的特异基序,但全部PeAMTs的Motif 2都包含了铵转运蛋白的典型保守序列。共线性分析结果表明,有8对PeAMTs存在共线性,而且11个PeAMTs与8个Os AMTs存在共线性,在进化过程中PeAMTs经历了纯化选择。PeAMTs具有组织表达特异性,多数在毛竹根部和叶片的表达水平最高,其次是发育初期的笋,在发育后期木质化程度较高的笋中表达水平较低。PeAMTs启动子中包含多种激素和非生物胁迫应答元件,GA3、油菜素内酯(BL)和干旱处理能引起多数PeAMTs表达量的显著变化,NAA和低温处理也能引起6个PeAMTs表达量的显著变化。筛选关键基因PeAMT1、PeAMT2和PeAMT3进行干旱处理下的q PCR验证,结果表明三者的表达变化均达到显著水平。【结论】毛竹中具有13个编码完整AMT的基因(PeAMTs),它们在结构特点和组织表达特异性方面均存在一定的差异,其表达受到激素和非生物胁迫的影响。PeAMTs可能通过在根部高表达协助毛竹从土壤中获取铵盐,在叶片中高表达对铵盐进行转移和回收,保证毛竹快速生长过程中充足的氮供应;同时可能在提高毛竹抗逆性中发挥铵解毒的功能。
关键词：
毛竹 铵态氮转运蛋白 分子特征 基因表达
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
马应 张天闻 梅山 周小南 赵志艳 冯登侦 康晓龙
克隆滩羊脂肪肥胖相关基因(FTO)的编码区序列(CDS),采用生物学软件和在线预测工具对FTO基因进行分子特征分析，通过实时荧光定量PCR检测FTO基因mRNA在滩羊各组织以及不同绵羊群体背最长肌中的表达水平，为研究FTO基因在滩羊及其杂交后代的生产性能以及新品种选育提供参考数据。结果表明：滩羊FTO基因CDS全长1 560 bp,编码519个氨基酸，存在1个错义突变，导致缬氨酸突变为蛋氨酸；滩羊FTO蛋白为亲水性蛋白，不存在跨膜结构，在第33～34氨基酸残基处具有信号肽；构建的系统发育进化树显示，滩羊与山羊的亲缘关系最为接近。FTO基因mRNA在滩羊背最长肌中的表达水平最低，在不同绵羊群体背最长肌中的表达水平存在显著差异，表达水平表现为：杜泊羊>杜滩寒杂交一代>滩羊>小尾寒羊；肉用绵羊(杜泊羊)FTO基因mRNA的表达水平相对高于其他非肉用品种。
关键词：
FTO基因 滩羊 脂肪沉积 组织表达
[期刊] 西南农业学报
[作者]
郭佳欢 冯会丽 史彦江 俞元春
【目的】以灰枣和新疆林业科学院新选育的3个灰枣优系(灰实2、灰实7和灰实8)为试验材料,对其枝条组织在低温胁迫下的相对电导率、可溶性糖、可溶性蛋白、丙二醛含量及游离脯氨酸等5个抗寒性生理指标展开研究,以期为灰枣耐寒品种的选育推广提供参考。【方法】于2017年1月下旬,选取长势一致的1年生休眠二次枝进行低温胁迫试验,胁迫程度分为-15、-20、-25、-30、-35、-40℃共6个梯度,持续胁迫时间为12 h,胁迫后以5℃/h上升至0℃后恒温静置12 h测定各项指标。【结果】结合Logistic方程计算得出,灰实2、灰实7、灰实8和灰枣低温半致死温度分别为-11.48、-8.82、-9.30和-10.80℃。同时,低温胁迫过程中,可溶性糖含量均呈现出先升后降的趋势,且均在-30℃时达到最大值。可溶性蛋白含量呈现"S"型的变化趋势。丙二醛含量呈现"低-高-低-高"波浪型变化趋势,灰实2和灰枣在-35℃时含量最高,达到11μmol/g以上,灰实7和灰实8在-40℃时含量最高,为10.42～10.71μmol/g。灰实7和灰实8的游离脯氨酸含量变化幅度较大,达到3.89～3.93 mg/g;灰实2和灰枣的变化幅度较小,为3.22～3.31 mg/g。整体上看,低温处理下灰枣及其3个优系的游离脯氨酸含量变化表现为先上升后下降的变化趋势。【结论】通过抗寒因子的综合隶属度计算显示,灰实2的平均隶属度最高,为0.482;灰枣次之,为0.478;灰实8为0.476;灰实7最低,为0.456。按照平均隶属度抗寒性分级法分级,灰实2、灰实7、灰实8和灰枣的综合隶属度在0.40～0.59之间,抗寒性均为Ⅲ级,中抗,其抗寒性能力大小综合排序为:灰实2>灰枣>灰实8>灰实7。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
邬梦静 徐青叶 刘雅 施兴荣 沈祺达 杨萌萌 王世贵 唐斌
【目的】异色瓢虫（Ｈａｒｍｏｎｉａ ａｘｙｒｉｄｉｓ）是一种重要的捕食性天敌昆虫资源，在东北地区以成虫越冬，具有非常强的抗寒能力。以过冷却点和抗寒基因的ｍ ｒｎａ水平变化作为瓢虫抗寒性能指标，探索低温胁迫提高瓢虫抗寒的作用。【方法】将野外采集到的异色瓢虫通过０、５和１０℃３种不同温度，进行２、１２和２４ Ｈ ３种时间的低温胁迫处理，测定过冷却点的变化，得到最佳低温胁迫条件。以室内饲养的异色瓢虫作为对照组，分别在５℃低温条件下储存１０、２０和３０ ｄ，测定过冷却点变化和存活情况。根据转录组和数字表达谱（ｄｉｇｉｔａｌ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｄｇｅ）数据分析确定６个重要抗寒基因，选择１８．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
徐倩 王宁宁 白莉 史鲲鹏 沙珍霞
肝脏表达抗菌肽2 (liver-expressed antimicrobial peptide 2， LEAP-2)在鱼类先天免疫系统中发挥重要作用。本研究通过RACE技术获得了俄罗斯鲟LEAP-2 (Acipenser gueldenstaedti LEAP-2， AgLEAP-2)的全长cDNA序列，对其序列特征和表达水平进行了分析；构建AgLEAP-2原核表达载体并对重组蛋白进行纯化；进一步采用琼脂稀释法初步检测AgLEAP-2蛋白的抑菌活性。结果显示，AgLEAP-2基因cDNA全长为622 bp，开放阅读框(open reading frame， ORF)为246 bp，预测编码81个氨基酸，分子量约为11.2 kDa，5′端非编码区为184 bp，3′端非编码区为192 bp。AgLEAP-2包含一个信号肽(1～25 aa)和一个成熟肽(26～81 aa)，成熟肽含有4个保守的半胱氨酸残基，在Cys58-Cys69和Cys64-Cys74的相对位置之间各形成一个二硫键的核心结构。实时荧光定量PCR (qRT-PCR)结果显示，AgLEAP-2在所有健康组织中广泛表达，在肝脏中表达水平最高，在肠道和肌肉中表达水平次之，在鳃中表达量最低。与0 h相比，AgLEAP-2在感染嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)后的不同时间点的肝脏、脾脏、肠道、头肾、鳃和血液组织中均显著上调。此外，重组AgLEAP-2 (rAgLEAP-2)蛋白在体外对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有抗菌活性并存在剂量效应。本研究表明，AgLEAP-2可能在俄罗斯鲟的先天免疫系统中发挥重要作用且对多种病原菌有一定的抗菌效果，本研究为开发新的抗菌制剂提供了依据。
[期刊] 华北农学报
[作者]
宋振君 李志勇 王永芳 刘磊 白辉 董志平
WRKY是参与植物生长发育与抗逆反应的一类转录因子。为了解谷子中SiWRKY03基因的功能,利用生物信息学软件分析了其生物学特征,采用Real-time PCR技术检测了SiWRKY03转录因子在谷子不同组织部位和抗谷锈病过程中的表达丰度变化。结果表明,SiWRKY03基因的开放阅读框全长为1 137 bp,编码378个氨基酸,预测分子质量为39.73 ku,理论等电点(pI)为5.91,含有1个WRKY保守结构域。该蛋白质二级结构的最大元件是无规则卷曲,最小元件为β-转角。进化分析表明,SiWRKY03与糜子(RLM93064.1)和哈氏黍(PAN29607.1)的氨基酸序列同源性最高,为99%。组织表达分析表明,该基因在谷子根、茎、叶和穗中均有表达,其中根中表达量最高,穗中表达量最低,与转录组数据一致。在谷子响应锈菌胁迫反应的120 h内,SiWRKY03基因在抗病反应的12,36 h上调表达,而感病反应过程中无显著性变化,推测SiWRKY03在谷子抗锈病反应中起正调控作用。上述试验结果为进一步研究SiWRKY03基因功能与抗病机制奠定理论基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
郭燕 李颖 张树航 张馨方 王广鹏
为验证低温放热(LTE)法鉴定板栗枝条抗寒性的应用效果,以16个板栗品种(系)休眠期枝条为材料,采用LTE法分析各品种放热特征和LTE相关指标,三点法建立各品种枝条木质部和韧皮部的温度-伤害度回归方程(LT-I),利用LTE相关指标(木质部和韧皮部LT-I斜率、木质部和韧皮部的开始结冰和终止结冰点温度)结合隶属函数法分析了16个品种的抗寒性,并用传统组织褐变法和电导法对LTE分析法效果进行验证。结果表明:16个板栗品种(系)枝条木质部和韧皮部的LT-I斜率在品种间和品种内均不同,并且各品种LTE相关指标均
关键词：
板栗 枝条 抗寒性 低温放热分析法
[期刊] 中国水产科学
[作者]
梁利群 高俊生 李绍戊 孙效文 雷清泉
以黑龙江鲤(Cyprinus carpio haematopterusTemminck et Schlegel)、荷包红鲤抗寒品系(Cyprinus carpiovar.wana-nensis)、荷包红鲤(Cyprinus carpiovar.wananensis)、柏氏鲤(Cyprinus pellegniniTchang)以及荷包红鲤抗寒品系和柏氏鲤的杂交F2的DNA样品为材料,用200个随机引物对其进行PCR扩增,获得了1个与鲤鱼抗寒性状相关的分子标记RAG20,并在F2代分离个体中得到验证。至此,本实验室共获得10个与鲤鱼抗寒性状相关的分子标记,更加证明抗寒性状是数量性状(QTL)受微...
关键词：
鲤鱼 抗寒 SCAR RAPD 分子标记
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