【目的】通过测定松材线虫连续交配能力，分析虫龄和交配经验对松材线虫繁殖能力的影响，并研究松材线虫寿命对交配行为的响应，比较松材线虫雌雄虫生殖策略的差异性，明确松材线虫的交配特性，为从交配干扰角度找到控制松材线虫种群增长的切入点提供新的思路。【方法】获得同步发育的松材线虫处女雌虫和处子雄虫，通过连续跟踪观察，结合显微录像视频回放，分析松材线虫的连续交配能力。分别收集性成熟后第3天、第5天和第7天的松材线虫，以及不同交配经验的松材线虫，统计其交配成功率和产卵量，分析虫龄和交配经验对松材线虫繁殖能力的影响。同时，定量分析未交配和已交配松材线虫雌雄虫的寿命。【结果】处子雄虫在不取食的情况下，可以连续与3条处女雌虫成功交配并使其受孕产卵；而处女雌虫成功交配后先进行产卵，不会连续交配。对于未交配雌雄虫而言，交配成功率和平均产卵量均随着虫龄的增加而降低，交配成功率于性成熟后第7天达到差异显著水平，而平均产卵量于性成熟后第5天达到差异显著水平，且雌虫受虫龄的影响较雄虫更为显著。不同交配经验的松材线虫雌雄虫交配成功率存在显著差异，性成熟后第3天未交配雌雄虫的交配成功率分别为（60.00±9.43）%和100%，而相同虫龄已交配雌雄虫的交配成功率分别降至（17.50±4.68）%和（25.00±2.34）%，但其平均产卵量无显著差异。交配行为对松材线虫的寿命没有显著影响，未交配和已交配雌虫的平均寿命分别为（24.47±0.22） d和（24.93±0.70） d，未交配和已交配雄虫的平均寿命分别为（21.80±0.54） d和（23.43±0.78） d。【结论】松材线虫处子雄虫可以连续进行多次交配，而处女雌虫交配后会优先产卵。虫龄和交配经验均会显著影响松材线虫的交配成功率，但产卵量仅受虫龄影响。此外，交配行为不会加速松材线虫衰老。本研究明确了松材线虫的交配特性，为进一步探究其分子调控机制提供了理论基础。

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对来自国内及日本、加拿大、法国、挪威的松材线虫及拟松材线虫株系作酶电泳的初步分析。结果表明，不同株系的苹果酸脱氢酶及纤维素酶酶谱各不相同。超氧化物歧化酶有１条在不同株系中迁移率相同的酶带。松材线虫与拟松材线虫在酯酶谱上差异明显，但培养于裂褶菌、多毛孢和葡萄孢上的来自南京黑松上的同一株系线虫的酯酶谱也显示了明显差异，表明了该酶的不稳定性。谷氨酸草酰乙酸转氨酶是唯一可区分两种线虫的酶，松材线虫只有１条迁移率０．３９的带，拟松材线虫只有１条迁移率０．５１的带，可用于两种线虫的生化鉴定。对可溶性蛋白质及过氧化物酶的分析，未检测到清晰可辨的酶带。

对目前松材线虫基因水平的研究进行了概述.目前已研究过的松材线虫基因主要分为三个方面:一是应用于检疫检验的研究,主要研究的基因有rRNA基因,利用rRNA的ITS区核苷酸序列进化速度较快的特点,能准确区分松材线虫与其近缘种;二是探讨致病机理的研究,主要研究了纤维素酶和果胶酸裂解酶等在食道腺细胞中表达的酶基因,发现纤维素酶基因可能是由于基因横跨作用从细菌迁移到松材线虫基因组内,有助于研究松材线虫致病性的起源;三是对松材线虫生长发育相关基因的研究,为控制松材线虫的生长发育提供了依据.

[目的]明确松材线虫入侵对马尾松树针叶光合特性、光合响应曲线、主要光合响应指标及碳氮元素含量的影响,以期在光合生理水平上提供松材线虫病的早期快速诊断技术,为林业管理者采取快速防治措施提供科学的理论依据。[方法]本研究选取健康期、感病中期和感病末期马尾松树为研究对象,利用Li-6400XT便携式光合测定仪和稳定同位素质谱仪,分别测定不同感病阶段马尾松树针叶光合特性及所测针叶样品的C%、N%和δ~(13)C含量。[结果]健康马尾松树在松材线虫胁迫条件下,可显著降低其针叶的净光合速率、蒸腾速率及气孔导度,其数值大小均表现为:健康期>感病中期>感病末期;不同感病阶段马尾松的暗呼吸速率数值之间的差异也达到极显著水平,其数值的大小表现为:感病中期>健康期>感病末期;健康期马尾松的光补偿点显著低于感病中期的光补偿点,但是其光饱和点显著高于感病中期的光饱和点。此外,不同感病阶段马尾松树针叶的平均C素含量变化不大,但平均N素和平均δ~(13)C含量则会显著下降。[结论]松材线虫侵染健康马尾松树后,可降低其对外界光照条件的适应能力,致使其光合特性显著下降;感病马尾松树针叶N素损失是导致马尾松光合能力显著下降的一个主要原因;感病马尾松树针叶气孔导度下降是导致其针叶δ~(13)C含量下降的主要原因,同时亦说明松材线虫的入侵会显著降低马尾松树针叶的水分利用效率。

松材线虫病对森林生态健康有显著影响,可以导致松林大面积死亡,有效预防松材线虫病是维护森林生态系统的重要措施。伊氏线虫菌是一种松材线虫的内寄生真菌,具有作为松材线虫病生物防治的天敌的潜力。近几年,对于这种鲜为人知的真菌的研究增多。本文从该菌的发现、形态学、培养、侵染机制、分子层面研究和生物防治应用等方面较系统全面地介绍该菌。伊氏线虫菌共有6个菌株,能产生月形孢子和杆状孢子2种类型的孢子,月形孢子能黏附到松材线虫体表并寄生于体内将其杀死。伊氏线虫菌能在松树和松树分泌的树脂中存活,通过产生宿主松树的香味而引诱松材线虫。培养条件对伊氏线虫菌生长、产孢、孢子侵染活力的影响较大,可以在培养基中添加甘氨酸等增强其对环境的抗性。伊氏线虫菌基因组已被完整测序,还克隆出1个对松材线虫具有强毒力的丝氨酸蛋白酶基因,同时在菌株细胞内发现内生细菌的存在,可以通过分子方法检测该菌。在温室和野外采用树干注射、树冠喷洒和伤口接种等不同方法施用含有该真菌的生防菌,均显示其能降低松材线虫对松树的侵染。目前对于该菌的研究主要集中在实验室,对于林间防治应用也有研究,但还是较少。关于该菌未来的研究可以从几方面开展:1)分子层面弄清其侵染机制;2)商品化生物制剂; 3)野外防治方案; 4)松褐天牛与伊氏线虫菌之间的关系。

运用杂交方法对来自南京、四川、日本、法国和加拿大等地的松材线虫和拟松材线虫共１０个株系作遗传分析，结果表明中国的松材线虫和拟松材线虫能杂交成功，但后代数量少且大多不孕，两者间遗传差异较大，这两种线虫各株系间无明显差异。当中国线虫分别与日本、法国、加拿大株系杂交时，无论种间或种内均有差异，前者差异更显著。种间杂交中多数后代雌虫较难与父本回交产生子代幼虫。种间杂交在产生正常后代的同时也产生１０％～６０％的畸形后代。雄虫畸形主要表现在无交合刺或交合刺不发育，雌虫和幼虫的畸形则是身体的缢缩、弯折等。

采用羧甲基纤维素钠(CMC)、微晶纤维素(MC)和水杨素(SC)三种底物,用刚果红染色法和DNS法分别定性和定量分析了松材线虫和拟松材线虫分泌物中纤维素酶系组分和酶活力。结果表明,松材线虫和拟松材线虫分泌物中存在完全降解纤维素所需的3种酶系组分:内切-β-1,4-葡聚糖酶、外切-β-1,4-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶,松材线虫分泌物中三种酶活力明显高于拟松材线虫酶活力。研究结果为更好的解释松材线虫致病机理提供了科学数据。

１９９０～１９９３年，从国内外收集的松材线虫９个株系和拟松材线虫５个株系，用皮接法接种３～６年生的松苗，测定线虫的致病性。结果表明，松材线虫的致病力明显高于拟松材线虫，其中国内的５个株系致病力最高。拟松材线虫通常不致病或致病力极低。在同一线虫种内，株系间致病力随寄主不同而不同。在寄主死亡速度上，寄主相同并死亡率相同或相近时，采自南京、广东马尾松病树上的线虫株系接种后，寄主平均死亡时间略短于其它株系。供试的８种松树，依死亡率及感病率，马尾松最为抗病，黑松、华山松最为感病。

【目的】研究松材线虫Bxy-cul-1基因的表达特性和生物学功能，明确该基因在松材线虫生长发育中的作用，为从生长发育角度探索特异性的线虫种群增长控制措施提供理论基础。【方法】根据松材线虫基因组数据设计引物、克隆Bxy-cul-1基因，对Bxy-cul-1进行序列、系统发育和蛋白结构预测等生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR技术和原位杂交技术探究Bxy-cul-1基因在松材线虫各龄期的表达水平和表达部位，明确其时空动态表达特性，采用RNA干扰技术探究该基因在松材线虫生长发育中的作用。【结果】生物信息学分析结果显示，Bxy-cul-1基因CDS全长2 292 bp，编码763个氨基酸，属于Cullin蛋白家族。原位杂交结果表明，Bxy-cul-1基因在松材线虫各发育阶段均有表达，胚胎期全胚胎表达，2龄期广泛表达，3龄期和4龄期主要在肠道、体壁肌肉和尾部表达；成虫期，Bxy-cul-1基因在雌虫的卵母细胞和阴户、雄虫的腹部、交合刺和尾部表达。实时荧光定量PCR结果显示，Bxy-cul-1基因在松材线虫2龄期表达量最高，胚胎期次之，3龄期、4龄期、成虫期表达量依次递减。对松材线虫胚胎干扰后发现，松材线虫胚胎孵化率下降10.44%，未孵化出的胚胎大多停留在1龄末期，虫体腹部形成畸形肿大，不能突破卵壳；孵化出的部分2龄期幼虫也出现畸形性状，畸形虫无法正常伸展，中部食道腺异常膨大，尾部蜷缩。干扰2龄期幼虫，虫体活力下降明显，每30 s头摆频率约下降5次，部分2龄期幼虫也出现畸形性状，畸形虫体形短小，头部、食道腺异常膨大，尾部和腹部扭转在一起，虫体无法正常运动。发育进度试验结果表明，沉默Bxy-cul-1基因后，松材线虫发育进度减慢，干扰组2龄虫发育至成虫比对照组晚4天。【结论】松材线虫Bxy-cul-1基因是Cullin蛋白家族中的一员，基因表达水平及表达部位在不同发育阶段具有特异性。沉默该基因可使松材线虫胚胎的孵化率下降，且出现畸形性状，还会使松材线虫活力下降及发育进度减缓，表明Bxy-cul-1基因对松材线虫生长发育有着重要作用。

通过对南京地区黑松、马尾松松材线虫病材的化学成分的研究，发展病材的主要化学成分与健康材相比无明显差异，但苯醇抽出物和乙醚抽出物含量却显著减少。病材乙醚抽出物含量的明显减少是松材遭受松材线虫侵袭的特征之一。在乙醚抽出物的组成上病材和健康材也存在差别，此外两者的ｐＨ值也不相同，因而可选用适当的指示剂通过显色反应加以区分。

松材线虫病,又称松树萎蔫病、松树枯萎病,是由松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)引起的一种毁灭性森林病害。松材线虫原来广泛分布于北美地区,但在原产地并未造成严重危害。1905

对我国目前实施的松材线虫病防治指导思想（战略思想）进行探讨，认为“控制、压缩、扑灭”的指导思想要求开隔离带和皆伐松林，会激发松墨天牛飞行潜力，导致松材线虫病进一步扩散；“留住、压缩、无害”新的指导思想要求用健康松树留住松墨天牛，同时清理死松树压缩松墨天牛种群基数的方法，使松材线虫病防治走上了一条新道路，在宁波市东部松材线虫病防治实践中收到了良好效果

通过23种松树、5种松树的105个种源及13种非松属树木对松材线虫Bursaphelenchusxylophilus的抗性研究,结果表明:供试松树的抗性差异很大,火炬松、班克松、刚松均未感病。马尾松1年生幼苗感病,2、4年生幼苗及10年生幼树抗病。湿地松3年生幼苗感病,10年生幼树未感病。美国五针松在不同地方的抗病性差异很大。其它17种均不同程度地感病。华山松21个种源均严重感病,油松21个种源均感病。马尾松、火炬松及湿地松的供试种源均未感病。除雪松外,其它12种非松属树木均感病。环境条件影响松树的抗性。低温不利病害发展。不同来源的松材线虫对同种松树的致病力不同,地理位置不同的线虫致病性差异要...

研究松树体内松材线虫的分布情况有助于松材线虫病的林间调查、监测和除治。对马尾松萎蔫病枯立木中的松材线虫研究表明:不同时间疫区枯立木中松材线虫检出率为16%~91.67%,平均为58.92%,即仅有一半枯立木中有松材线虫,取样不准确时,可能存在漏检现象;秋、冬季松材线虫检出率高于春、夏季,秋冬季为松萎蔫病发病的高峰期。5月前后,感病树中的纯松材线虫检出率较高,为50%~100%;秋冬季,树体中只有幼虫、无松材线虫成虫形式存在的检出率较高,为18.18%~26.87%。松材线虫在树体内不同部位(上、中、下)的分布和数量存在差异,但没有明显的规律性,与感病程度有关,应在树体的不同部位同时取样检测。

松林火灾与松材线虫病的发生和传播有着密切的关系。从火烧松林内羽化的松墨天牛 ,平均每头可携带 736 4条松材线虫 ,侵入松林后就会导致松材线虫病的发生和蔓延。火烧松林诱发松材线虫病可分为当年发病型、次年发病型和隐匿发病型。治理火烧松林能有效地控制松材线虫病的发生与传播。根据研究结果 ,提出了 4条新的防治措施和建议