【目的】对半红树药用植物杨叶肖槿（Thespesia populnea）内生真菌的多样性及其抑菌活性进行研究，为开发生态友好型抗菌剂提供参考依据。【方法】采用形态学和分子生物学相结合的方法，对广西北部湾沿海杨叶肖槿茎、叶和树皮组织中的内生真菌进行分离鉴定。选用从柿树、核桃、荔枝中分离的炭疽菌（Colletotrichum）、香蕉枯萎病菌尖孢镰刀菌古巴专化型FOC1(Fusarium oxysporum f. sp. cubense 1）和FOC4（Fusarium oxysporum f. sp. cubense 4)、黄瓜瓜链格孢菌（Alternaria cucumerina）6种植物病原真菌、白骨壤内生真菌链格孢菌（Alternaria alternata）和罗非鱼海豚链球菌（Streptococcus iniae）为指示菌，通过平板对峙法和滤纸片法对杨叶肖槿内生真菌提取物进行抗真菌和抗细菌活性筛选。【结果】从杨叶肖槿中共分离纯化出60株内真生菌，分属于5个属25个种。其中，炭疽菌属（Colletotrichum）和间座壳属（Diaporthe）为优势菌属，分离率为48.33%和26.67%；其余菌属分别是葡萄座腔霉属(Botryosphaeria)、亚隔孢壳属(Didymella)和小隐孢壳属(Cryptosporella)，对应的分离率为15.00%、6.70%和3.33%。从杨叶肖槿树皮组织分离到的菌株最多，共分离到4个属23株菌，占总分离量的38.33%；其次为叶片组织（31.67%）和茎组织（30.00%）。发现12株内生真菌与NCBI数据库已公布ITS rDNA序列相似性低于95.00%，为潜在新种。抑菌结果表明，炭疽菌J1-20对8种指示菌均有较强的抑菌活性，对柿树炭疽菌、核桃炭疽菌、荔枝炭疽菌、香蕉枯萎病菌FOC1和FOC4、黄瓜瓜链格孢菌、白骨壤链格孢菌的抑菌率分别为39.39%、25.00%、19.10%、32.43%、28.20%、89.00%和74.19%，对罗非鱼海豚链球菌的抑菌圈为21.00 mm。【结论】杨叶肖槿内生真菌多样性丰富，分布较均匀。其中J1-20菌株对8种指示菌具有广谱抑菌性，有较好的开发潜力。

【目的】陕西小叶杨主要分布在生态环境差异显著的陕北和秦岭北麓地区。研究小叶杨叶内生真菌群体特征，明确影响小叶杨生态分布的生态因素。【方法】通过对２种生境下小叶杨林分代表植株叶片定点、定时采集，在严格的表面消毒下，进行ＰＤＡ和纸培养，结合形态学和分子系统学技术对分离真菌进行鉴别，并用ＳＡＳＳ软件对内生真菌群体进行统计分析。【结果】宝鸡和榆林的小叶杨内生真菌相似系数较高（０．４４４ ５），优势种群相似。交链孢属、单隔孢属、茎点霉属真菌相对分离率分别为２３．１％，２２．５％，２８．４４％，皆为优势菌群，呈现明显的暗色有隔菌群特点，这可能与小叶杨树种旱生发育型相关。地区内的内生真菌群体相似系数大于地区．．．

以前期筛选的植物内生真菌SDYS180（聚多曲霉菌Aspergillus sydowii）为试验材料，通过体外试验测定其对13株常见林木病原真菌的抑菌活性，并建立SDYS180粗提物对各病原真菌的毒力回归方程，同时测定了SDYS180粗提物对杨树叶斑病菌生理指标[电导率、可溶性蛋白（SP）质量分数、丙二醛（MDA）浓度、超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化物酶（POD）活性、过氧化氢酶（CAT）活性]的影响。结果表明，SDYS180菌体、发酵液和挥发性代谢产物对13株林木病原真菌的抑菌效果表现为菌体＞发酵液＞挥发性代谢产物，其中对杨树叶斑病菌的抑制活性最佳，粗提物对该菌的毒力回归方程为y=0.3010x+0.1437，R~(2)=0.986 4，EC_(50)=1.183 7 mg·mL~(-1)。SDYS180粗提物对杨树叶斑病菌的生理指标存在明显影响，主要表现为：试验期间处理组的电导率和MDA浓度大于对照组，8 h时电导率最大，达到27.73 ms·cm~(-1)，4 h时MDA浓度最大，达到0.183 μmol·g~(-1)；8 h后处理组的SP质量分数小于对照组；处理组的POD、SOD、CAT活性与对照组相比都呈现先增强后减弱的趋势，且均在4 h时达到最大值，分别为1 200 U·g~(-1)·min~(-1)、33 U·g~(-1)、5.46 U·g~(-1)·min~(-1)。可见，SDYS180是一株具有开发潜力的生防菌。

在前期研究发现,韭菜处理可以减轻香蕉枯萎病和根结线虫病害的发生,推测韭菜中含有能抑制病原菌及致死根结线虫的生防菌。对韭菜根际真菌和内生(叶片和根系)真菌的种群结构及多样性进行比较分析,以期为分离鉴定韭菜中抑菌和杀根结线虫的生防真菌提供理论依据。通过Illumina平台对韭菜根际真菌和内生(叶片和根系)真菌样品中的18S rRNA序列进行测序,并进行生物信息学分析。结果表明:从韭菜根际土壤、根系、叶片中获得348 484高质量序列和123个操作分类单元(OTU)。根际真菌的Chao、ACE、Shannon指数显著高于内生真菌(叶片和根系),而Simpson指数则显著小于内生真菌。根际真菌群落主要由子囊菌门(Ascomycota)(67. 20%)和担子菌门(Basidiomycota)(24.44%) 2个菌门组成;而内生真菌主要由子囊菌门组成,在叶片和根系中含量分别为91. 39%和96. 60%。在检测到的5个菌门中,内生真菌中子囊菌门显著高于根际土壤,其他菌门则显著低于根际土壤。叶片和根系中内生真菌稍有不同,但是差异并不显著。该研究表明,韭菜根际真菌和内生真菌的种群结构存在显著差异,根际真菌的多样性及丰富性显著高于内生真菌。该研究为分离鉴定韭菜中抑制植物病原菌及致死根结线虫的生防真菌提供参考。

兰科植物的生长发育离不开其根部内生真菌的共生。为探明羊耳蒜（Ｌｉｐａｒｉｓ ｊａｐｏｎｉｃａ）根部内生真菌种类和多样性规律，选取东北地区７个不同地理种群的羊耳蒜植株进行根部内生真菌的分离、培养，根据形态特征和ｉＴｓ序列进行种类鉴定及其多样性与环境因子的相关性分析。共分离到内生真菌９个类群２０１个菌株，其中大部分菌株属于ＴｕＬａｓｎｅＬＬａ和ｓｏｒｄａｒｉｏｍｙｃｅＴｅｓ真菌，在所调查的地理种群中均有分布，而其余７类真菌为稀有属。不同地理种群羊耳蒜根部内生真菌的多样性无显著差异，但ｃＢｓ种群分离得到的真菌类群较少。各地理种群根部内生真菌的类群数量和多样性均与羊耳蒜株高呈显著正相关，推测内生真菌种．．．

以湖南省壶瓶山国家级自然保护区生长的9株(3组)不同树龄银杏为研究对象,应用IlluminaHiSeq高通量测序技术,分析银杏叶片组织内生真菌的多样性及群落结构。结果表明:银杏叶片内生真菌群落的多样性、群落结构与组成均存在显著性差异,且随着树龄的增加,叶片内生真菌群落结构差异增大;子囊菌门(Ascomycota)为绝对优势菌门;曲霉属(Aspergillus)、假丝酵母属(Candida)、球腔菌属(Mycosphaerella)等真菌为银杏叶内生真菌群落优势菌属;通过对银杏叶黄酮含量进行检测,发现不同树龄银杏叶的黄酮含量存在显著差异,且随着树龄的增加,3种黄酮醇苷(槲皮素、山奈酚和异鼠李素)含量均呈递减趋势;进一步分析表明,黄酮类化合物作为重要环境因子,可能通过影响优势菌门子囊菌中优势菌属的定殖与生长对内生真菌群落的形成与变化产生显著影响。

为了研究杜仲内生真菌对植物病原真菌的抑制作用,以苹果腐烂病菌(Cytospora sp.)、番茄灰霉病菌(Botrytis cintrea)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium f.sp.cucumerinum)、玉米大斑病菌(Helminthos porium turcicum)和白菜黑斑病菌(Alternaria brassicae)为供试菌种,对49株杜仲(Eucommia ulmoides Oliv)内生真菌及其次生代谢物进行了抑菌活性试验。结果表明,有22株内生菌至少对3种测试菌有抑制作用...

为探明贵州小白及内生真菌多样性规律,挖掘农业病原菌微生物防治新资源,采用组织块分离法结合形态学和ITS r DNA分子系统发育分析法,对从贵州小白及(Bletilla formosana)叶、根和茎中分离的内生真菌进行鉴定;并以烟草黑胫、水稻纹枯和小麦赤霉3种常见农业病原菌作为靶标菌,通过平板对峙法筛选抗病活性菌株。结果表明:1共分离获得内生真菌137株,归为12目18科22属。其中,优势菌群为链格孢属(Alternaria)、刺盘孢属(Colletotrichum)和镰刀菌属(Fusarium),三者分

【目的】研究野生无距虾脊兰Calanthe tsoongiana在萌芽期、花期、果期、衰亡期根际土壤真菌和根系内生真菌多样性差异，旨在明确不同生长发育时期真菌多样性特征，为无距虾脊兰种群扩繁提供理论依据。【方法】采用内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)测序技术，分析野生无距虾脊兰4个时期根际土壤真菌与根系内生真菌群落的物种组成及相对丰度变化，找出各时期优势真菌。【结果】4个时期共获得307 288条优化序列，平均序列长度为643 bp，隶属16门68纲176目413属。萌芽期根际土壤真菌和根系内生优势真菌为分别被孢霉属Mortierella和红菇属Russula，花期优势真菌分别为青霉属Penicillium和粗糙孔菌属Trechispora，果期分别为Paraboeremia和蜡壳耳属Sebacina，衰亡期分别为Paraboeremia和镰孢属Fusarium。Alpha多样性指数显示：根系内生真菌多样性和相对丰度从萌芽期到果期依次递增，在果期达到顶峰，衰亡期又急剧下降。根际土壤真菌中花期多样性最高，其余3个时期变化相对平稳。【结论】无距虾脊兰根际土壤真菌和根系内生真菌多样性和丰富度在整个生长发育时期存在较大差异，花期和果期真菌多样性高于衰亡期和萌芽期。图5表2参34

【目的】研究降香黄檀心材和边材中真菌群落结构和多样性及其与木材内环境因子的关系,为降香黄檀内生真菌价值评价和资源利用提供依据,为指导降香黄檀人工促进心材形成提供参考。【方法】采用高通量测序技术,结合木材理化性质,研究降香黄檀心材和边材内生真菌的群落结构和多样性,并采用方差分析、冗余分析等手段分析其与降香黄檀内环境因子的关系。【结果】经过高通量测序,共获得2 193 336条序列,碱基总数为761 438 850 bp,有效序列平均长度为385 bp。得到3 621个OTUs,分属26纲67目116科167属186种。纲水平上,心材内生真菌优势菌群为伞菌纲、粪壳菌纲和散囊菌纲,边材内生真菌优势菌群为粪壳菌纲、座囊菌纲、伞菌纲、地舌菌纲和银耳纲;属水平上,心材内生真菌优势菌群为暗枝顶孢壳属、镰刀菌属、孢子丝菌属、黑酵母样真菌属和球托霉属,边材内生真菌优势菌群为镰刀菌属、毛色二孢属、枝孢属、念珠菌属、德巴利酵母属和木霉属;种水平上,心材内生真菌优势菌群为孢子丝菌环境种、卵形孢球托霉菌和尖孢镰刀菌,边材内生真菌优势菌群为可可毛色二孢菌、酵母菌和镰刀菌。方差分析、冗余分析等结果表明,p H、灰分和钾元素与降香黄檀内生真菌属水平的群落结构呈负相关,热水抽提物、镁和钙元素与大部分属真菌群落呈正相关,与少量属真菌群落呈负相关。含水量、热水抽提物、矿质元素钙和镁与多样性指数Chaol、Shannon和Simpson指数呈正相关,p H、灰分和钾元素与其呈负相关。【结论】降香黄檀心材和边材含有丰富的内生真菌群落,群落结构丰度和多样性均为心材大于边材。引起心材和边材内生真菌群落结构性差异的主要木材内环境因子为p H、灰分和矿质元素钾,引起多样性差异的主要木材内环境因子为p H、含水率、矿质元素钙和钾,且含水平影响最大。

以红树林植物红海榄Rhizophora stylosa和秋茄Kandelia candel为对象,研究了2种植物的内生真菌的多样性。结果表明:红海榄和秋茄的枝、叶中分别分离到内生真菌30株和27株,内生真菌的优势属分别是茎点霉属Phoma和拟盘多毛孢属Pestalotiopsis;同种植物的枝和叶中内生真菌的定殖率差异显著;红海榄和秋茄内生真菌的Shannon-Wiener多样性指数分别为1.7890和1.7473,Pielou均匀度指数分别为0.5260和0.5302。2种红树林植物的内生真菌显示出丰富的多样性。

利用组织分离法从欧美杨2品种欧美杨107杨、中林46杨中(996块组织)分离内生真菌1252株,107杨和中林46杨分别分离出645株和607株。利用形态特征和分子生物学方法鉴定为17个属、32个分类单元,包括担子菌2个分类单元,子囊菌30个分类单元均为子囊菌。在基于ITS构建的系统进代树上、2杨树品种内生菌均形成5个稳定的分支,包括在囊菌纲2个分支,包括散囊菌纲、类壳菌纲等。2个杨树品种内生真菌优势种群包括链格孢、葡萄座腔菌、镰孢菌、间座壳菌等,其中链格孢、葡萄座腔菌是最为常见的优势种群,2品种内生菌的优势种群会随季节变化而发生变化。

红树林是生长在热带和亚热带潮间带河口地带的耐盐植物群落,分布在南纬30°与北纬30°之间,具有盐胁迫、高矿物组成、强还原性、频繁的潮汐等特征,也使植物对营养、空间的竞争异常激烈,特殊生境使红树林植物内生真菌多样性丰富,必然会造成不同于其他生态系统的良好生物活性、独特化学结构的活性功能分子。红树属是红树林植物中分布较广泛的一个属,包括8个种,分别是红海榄、红树、红茄苳、美洲红树、Rhizophora harrisonii、R.racemosa、树冬红树和萨摩红树。迄今为止,从红树属分离出内生真菌类群已达23目41科64属,其中对拟盘多毛孢属、青霉属和毛霉属的内生真菌代谢产物研究的最为广泛;从红树属内生真菌中分离鉴定出195种天然产物,包括生物碱类、萜类化合物、香豆素类、色酮类化合物、醌类化合物、杂氧蒽醌类化合物、肽类、酚酸类化合物、内酯类等化合物,从红树属植物中发现许多结构新颖的次生代谢产物,从中国南海红树林红茄苳内生拟盘多毛孢真菌中发现一系列罕见的具有亲脂性取代基的新色酮类化合物pestalotiopsones A-F (107—112),从拟盘多毛孢属JCM2A4中发现2个具有柔性结构的补身烷型倍半萜-环青霉醛酸的新骨架化合物pestalotiopens A和B (83, 84)。此外,许多化合物显示出良好的抗肿瘤、抗菌和抗氧化等生物活性,如化合物pestalpolyol 1(119)具有很强的抑制作用,对小鼠淋巴瘤L5178Y细胞的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))值为4.10μmol·L~(-1)。从内生真菌毛霉QEN-189中分离到的吲哚生物碱rhizovarins A,B和F(46, 47, 50)对肺癌细胞A549抑制作用强,IC_(50)值分别为11.5、6.3和9.2μmol·L~(-1),对白血病细胞HL-60有强抑制作用,IC_(50)值为9.6、5和7μmol·L~(-1)。

黄绿卷毛菇（Floccularia luteovirens）是青藏高原特有真菌资源，对高寒草甸植物群落结构和稳定性有重要影响，可形成典型的蘑菇圈。以往研究大多集中在土壤微生物和植物群落上，然而，目前黄绿卷毛菇蘑菇圈上不同植物内生真菌的多样性尚不清楚。因此，本研究采用传统组织分离法结合ITS序列鉴定方法，分析采自祁连高寒草甸黄绿卷毛菇蘑菇圈上不同植物可培养内生真菌的多样性。结果表明：从6类植物108块组织中分离得到70株内生真菌，总分离率为64.81%，总定殖率为33.33%。多样性与相似性分析表明，矮嵩草内生真菌丰富度（R = 1.73）和多样性（H’ = 1.86，D = 0.83）最高，米尔克棘豆内生真菌均匀度指数(J_(u )= 1)最高；鹅绒委陵菜与麻花艽（C_(s鹅-麻 )= 0.5， C_(j鹅-麻 )= 0.33），火绒草和米尔克棘豆（C_(s火-米 )= 0.40，C_(j火-米 )= 0.25）的内生真菌具有一定相似性；不同组织间内生真菌相似性排序为：根-茎>叶-茎>根-叶。内生真菌结构分析表明，不同植物中优势菌分别为Peziza ostracoderma和Stagonospora sp.；不同组织中相对丰度最高均为Peziza ostracoderma。共现网络分析结果表明矮嵩草是黄绿卷毛菇蘑菇圈上的核心植物（EIC_(矮嵩草 )= 1）；Peziza ostracoderma是核心内生真菌（EIC_(P.o )= 0.75）。本研究结果有助于从植物内生真菌的角度为进一步探究青藏高原特有真菌黄绿卷毛菇蘑菇圈上植物-微生物的互作关系提供新思路。