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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈大勇 汪立芹 范利宏 仇春娟 李俊龙 黄俊成
为了将绵羊体外胚胎发育技术应用于生产，采用活体采卵－体外受精的方法，对准备淘汰的杜泊羊进行外源激素处理，并对可能影响体外胚胎发育及移植后受胎效率如ＦＳＨ剂量、公羊个体、获取卵母细胞方式等因素进行研究，结果发现：（１）每只供体注射ＦＳＨ ２４０ＩＵ或４２０ＩＵ剂量对获得卵母细胞数、胚胎数及体外受精卵裂率没有明显影响（Ｐ＞０．０５）；（２）不同公羊个体对卵母细胞体外受精效率有显著影响，但胚胎移植后受胎率没有明显影响（Ｐ＞０．０５）；（３）活体采卵与屠宰场采卵方式相比，对卵母细胞的回收没有影响（１２．２４ｖＳ １３．８４，Ｐ＞０．０５），但活体采集卵母细胞受精后的平均胚胎数显著低于后者（７．５０ｖＳ．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周洪彬 肖雄 包磊 李跃民
与牛羊等动物的体外胚胎生产(invitroproduction,IVP)技术相比,猪IVP技术尚不成熟。猪IVP主要存在卵母细胞的细胞质成熟差、多精子受精率高和胚胎质量差的问题,这严重制约了该繁殖生物技术在转基因猪生物反应器领域的应用。笔者在查阅近10年的国内、外相关研究后,从如何优化猪卵母细胞的体外成熟(invitromaturation,IVM)、体外受精(invitrofertilization,IVF)和胚胎的体外培养(invitroculture,IVC)3个方面进行了探讨。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈莹 鲁凤霞 田文丽 仇春娟 梅荣 范利宏 陈大勇 吴阳升 林嘉鹏 黄俊成 刘明军 汪立芹
【目的】比较绵羊卵母细胞体外受精后卵裂快慢对胚胎发育潜能及移植怀孕率的影响。【方法】使用因卵巢粘连无法作为超排供体的成年杜泊母羊，常规激素诱导卵泡超数发育，手术或屠宰回收卵丘-卵母细胞复合体（COCs），进行体外成熟（IVM），体外受精（IVF）和体外培养（IVC）。分别统计受精24，36，48 h卵裂情况及第7天的囊胚率，并按实验设计进行移植，统计怀孕率。其中，受精24 h 及之前卵裂的记为卵裂快组，受精24 h 之后卵裂的胚胎记为卵裂慢组。【结果】①卵裂快组胚胎占总胚胎数比例达77.85%，极显著高于卵裂慢组的22.15%（P < 0.01）；②卵裂快组囊胚率极显著高于卵裂慢组（68.95% vs 26.91%，P < 0.01）；③卵裂快组的早期胚胎移植单枚或双枚，怀孕率差异不显著（64.05% vs 65.62%，P > 0.05）；④卵裂慢组的早期胚胎移植两枚的怀孕率极显著高于移植单枚的结果（33.89% vs 11.67%，P< 0.01），但均极显著低于卵裂快组的胚胎（P< 0.01）；⑤囊胚单、双胚移植怀孕率无显著差异（69.33%vs 70.46%，P > 0.05）；⑥受精后24 h或48 h移植，对怀孕率没有影响；⑦从形态上无法判断早期胚胎的质量。【结论】绵羊体外早期胚胎，卵裂快组单枚移植，卵裂慢组双枚移植，囊胚单枚移植，能提高胚胎利用率。
关键词：
绵羊 体外胚胎 卵裂 囊胚率 怀孕率
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
潘晓燕 杨梅 王正朝 汪立琴 陈童 郭志勤 王锋
分别利用孤雌激活技术、体外受精技术及体细胞核移植技术生产不同类型的体外胚胎,比较不同类型胚胎的体外发育率和囊胚细胞总数间的差异,研究季节、卵巢保存条件和培养液对孤雌激活胚(PAE)和体细胞核移植胚(SCNTE)发育能力的影响。结果表明:PAE、SCNTE和体外受精胚(IVFE)的卵裂率没有显著差异;PAE的囊胚率(23.4%)显著高于SCNTE(18.2%);SCNTE的囊胚细胞数(120)显著多于PAE的囊胚细胞数(96),而与IVFE的囊胚细胞数(107)没有显著差异。繁殖季节卵巢PAE和SCNTE的发育率显著高于非繁殖季节。卵巢在14~18℃保存15~17 h,没有影响PAE的体外发育,...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
汪立芹 陈大勇 周云 陈莹 林嘉鹏 吴阳升 黄俊成
【目的】为了在不影响后代生产性能的基础上最大限度地提高体内、体外胚胎移植效率,从而为体外胚胎在生产中的应用奠定基础。【方法】从移植胚胎数量方面着手,比较其对体内、体外胚胎移植受胎率和产羔率的影响;并以常用的胚胎移植作为对照,研究体外胚胎与其生产效率存在的差距;并对不同来源的后代生产性能进行测定,对比体外胚胎在生产中的生产效率。【结果】(1)移植2枚体外早期胚胎的受胎率(60.42%)显著高于移植1枚胚胎的结果(48.54%)(P<0.01);(2)移植单枚体外胚胎的受胎率和产羔率皆显著低于体内胚胎(P0.05)。(4)体外胚胎移植后代的公羔比例与体内胚胎没有差异,但显著高于自然繁殖(P0.05),且与自然繁殖组间都没有差异(P>0.05)。【结论】相对于早期胚胎,体外胚胎移植2枚,体内胚胎移植1枚的生产效率较高。并且对后代生产性能没有影响。
关键词：
绵羊 体外胚胎 胚胎移植 受胎率 产羔率
[期刊] 中国农业科学
[作者]
丛义梅 马婧 孙瑞珍 王健宇 薛冰华 胡魁 尹智 刘忠华
【目的】探讨猪类胚胎生殖细胞向神经细胞分化的潜能。【方法】采用性腺-中肾区基质细胞与猪原始生殖细胞共培养的方法得到猪类胚胎生殖细胞,通过直接分化的方法进行神经细胞定向诱导。【结果】(1)与小鼠成纤维细胞作为饲养层相比,性腺-中肾区基质细胞作为饲养层同样能够支持猪类胚胎生殖细胞生长,二者对猪类胚胎生殖细胞的增殖能力不存在显著影响;(2)猪类胚胎生殖细胞有较强的碱性磷酸酶活性,Q-PCR结果显示多能性基因Oct4、Sox2及Nanog表达,增殖能力呈现"S"型,即生长的潜伏期、对数期及平台期,猪类胚胎生殖细胞经体外悬浮培养能够形成拟胚体;(3)经过诱导猪类胚胎生殖细胞能够分化形成表达神经干细胞、神...
关键词：
类胚胎生殖细胞 体外诱导 神经细胞 猪
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
龙翔 余荣 耿利英 周木清 熊家军 杨利国
从屠宰场收集黄牛卵巢,取皮质深层卵母细胞进行体外成熟、体外受精和早期胚胎体外培养,分析影响其效果的因素。结果表明,在成熟培养液中添加促卵泡素(FSH)(10 IU/mL)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)(20 IU/mL)和17β-雌二醇(17β-E2)(1μg/mL)对卵母细胞受精后早期胚胎发育能力有极显著的促进作用。等量牛卵泡液(BFF)与初生犊牛血清(NCS)效果差异不显著,以添加15%BFF为最宜。颗粒细胞与输卵管上皮细胞均能显著提高卵母细胞体外成熟受精后早期胚胎的发育率,颗粒细胞+输卵管上皮细胞对克服胚胎阻滞现象效果最显著。
关键词：
卵母细胞 体外受精 胚胎
[期刊] 西南农业学报
[作者]
宋雪梅 许惠艳 郝朝亮 梁世忠 卢晟盛 卢克焕
为了探讨胰岛素和胚胎培养密度对猪孤雌胚早期体外发育的影响,进一步优化猪早期胚胎培养体系,分别进行了胚胎培养液(NCSU-23)中添加不同批号和浓度的胰岛素以及不同胚胎培养密度(培养滴体积)对猪孤雌胚早期胚胎体外发育的影响试验,并于第2、7天分别统计胚胎分裂率和囊胚发育率。结果表明:①在NCSU-23中添加5.0μg/mL批号为I-1882(Sigma公司)的胰岛素,其囊胚发育率最高,为(33.48±12.79)%;②在体外培养25枚猪孤雌胚时,按胚胎数(枚)l培养液体积(μl)为1∶2.0~1∶3.0的比例进行培养,其培养效果较好。
关键词：
猪 孤雌胚 体外培养 胰岛素 培养密度
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵红卫 陈学进 李青旺 胡建宏 江中良 王立强 韩增胜
在TCM-199中添加一些确定的辅助成分,探讨在无血清培养基中添加不同浓度HA对牛卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育的影响。结果表明,在卵母细胞成熟培养液(TCM-199-m)中添加4.0mg/mL的HA时,卵母细胞的成熟率和卵裂率与对照组(BSA)无显著差异(P>0.05),分别为85.14%,83.57%和89.47%,85.24%,但显著高于其他各浓度组(P0.05),分别为27.64%和26.51%,但显著高于TCM-199-...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
卫恒习 李秋艳 高凤磊 李燕 张守全 李宁
【目的】建立高效的胚胎移植技术体系,以提高克隆猪的生产效率。【方法】比较不同移植方法和不同受体母猪状况的胚胎移植分娩率和克隆猪的出生效率,利用体外发育能力相似的不同品种和发育阶段的克隆胚胎混合移植确定最佳的受体母猪发情同期时间。【结果】克隆胚胎经由输卵管伞移植比输卵管打孔移植具有更高的移植分娩率和克隆猪效率(2.2%和0.4%,P<0.01),而胚胎移植后辅助人工授精会降低克隆效率(0.6%和2.2%,P<0.01)。利用经产母猪作为移植受体比青年猪受体具有更高的克隆效率(3.0%和0.8%,P<0.01)和平均窝产仔数((5.5±0.7)头和(2.7±0.3)头,P<0.05)。受体母猪发情...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵学明 杜卫华 王栋 郝海生 朱化彬
【目的】探讨冷冻保存对牛体外生产胚胎能量代谢、有氧代谢造成的影响。【方法】采用常规法或玻璃化法(open pulled straw,OPS法)冷冻保存牛体外受精(in vitro fertilization,IVF)囊胚和体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)囊胚,利用ATP Bioluminescence Assay Kit HS II和GENMED ROSAssay Kit检测了冷冻-解冻后囊胚ATP含量和ROS水平。【结果】(1)IVF和SCNT囊胚OPS法冷冻-解冻后存活率((93.25±5.17)%和(77.56±3.52)%)均显著高于...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王慧利 李静心 王婧 孟春花 朱前明 张俊 钱勇 曹少先
为进一步完善猪胚胎体外发育系统,以孤雌激活胚胎为研究对象,依次对胚胎培养液种类、培养期间血清添加方式、卵丘细胞共培养体系进行筛选优化。结果表明,与常规的PZM3培养液相比,CR1aa并不适合猪胚胎的体外发育;猪胚胎在PZM3中培养4d后添加10%胎牛血清培养至第6天,体外发育能力得到显著改善,卵裂率、囊胚率、囊胚孵化率、囊胚细胞数分别达到95.1%、56.5%、27.3%、79.3;在此基础上,利用山羊卵丘细胞与猪胚胎进行共培养,将囊胚孵化率进一步提高至36.6%,初步建立了一套高效稳定的猪胚胎体外发育系统。
关键词：
猪胚胎 体外发育 血清 共培养 凋亡
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张果平 王金文 王德芹 李焕玲
对53只杜泊绵羊实施超排处理,系统分析了供体羊年龄、胎次、重复超排、两次超排间隔时间、胚胎回收部位和季节对超数排卵效果的影响。结果表明,24月龄以上羊平均回收胚胎数显著高于8~12月龄羊(8.71∶7.18)(P<0.05);8~12月龄羊可用胚胎所占比例显著高于13~24月龄羊(95.29%∶75.96%)(P<0.05)。经产二胎羊平均回收胚胎数显著高于初产羊(8.71∶7.00)(P<0.05);初产羊可用胚胎所占比例显著高于经产一胎羊(96.14%∶75.88%)(P<0.05)。第三次超排处理平均回收胚胎数显著少于首次和第二次处理(8.71∶8.10∶7.00)(P<0.05);首次...
关键词：
杜泊绵羊 超数排卵 胚胎
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张志平 张君涛 安志兴 张锈 张涌
将体外受精后的牛卵母细胞随机分组进行培养,比较了胎牛血清(FBS)和发情后7 d牛血清(E 7BS)、不同培养液(CR 1+3 m g/mL BSA、SOF+3 m g/mL BSA和SOF+0.1 m g/mL PVA)、共培养体系和不同培养液体积(0.1,0.5和2.0 mL)对胚胎发育的影响,优化了牛胚胎体外培养体系,并对该体系的稳定性进行了检验。结果表明,优化后的牛胚胎培养体系为:前48 h用CR 1+3 m g/mL BSA培养液,48 h后用CR 1+体积分数10%E 7BS培养液培养120 h,培养液体积为0.5 mL,并且采用共培养,受精后颗粒细胞保留48 h。用该培养体系培养...
关键词：
牛 体外受精 胚胎培养 囊胚 血清
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
付静涛 朱士恩 余文莉 刘国世 冯建忠 张忠诚
在生产条件下,对3个优良品种的127只绵羊(道塞特47只、萨福克49只、杜泊31只)和111只波尔山羊供体使用不同国别生产的促卵泡素(FSH)实施超数排卵处理,然后对1 231只小尾寒羊和奶山羊受体实施不同方法的胚胎移植,旨在筛选出切合于生产实际成本低、效率高的超数排卵和胚胎移植方案。实验结果表明,使用新西兰产FSH对波尔山羊超数排卵后平均获得可用胚胎14枚/只,显著高于澳大利亚产FSH效果(平均7.59枚/只)(P0.05);进一步采用中国科学院产和新西兰产FSH分别对道塞特、萨福克和杜泊3个品种...
关键词：
绵羊 山羊 超数排卵 胚胎移植 妊娠率
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