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[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
邵毅 罗云波 张京声 陈安均 朱本忠
李果实富含酚类和多糖,成熟李果实的总酚和总糖含量分别可达140.28μg/g和80.75mg/g,因此常规方法不能有效提取其RNA以进行分子生物学研究。比较了改良的异硫氰酸胍法、改良的Trizol法、改良的CTAB法和高氯酸盐法提取李果实RNA的效果,结果表明高氯酸盐法效果较好。根据李果实材料的特点,进一步优化了高氯酸盐法,包括用0.1mol/LTris-硼酸缓冲液(pH7.4)取代0.3mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.3);提取缓冲液中β-巯基乙醇的浓度由1%提高到2%,可溶性PVP的浓度由8.5%降低至1%;联合使用10%乙醇和醋酸钾以除去多糖;用12000×g离心替代使用填充有...
关键词：
RNA提取 高氯酸盐 李果实 多酚 多糖
[期刊] 华北农学报
[作者]
孙雯 石海燕 张玉星
高质量的RNA是进行基因克隆、Northern杂交分析等研究的必要前提。针对黄金梨果实中多酚、多糖等次生代谢产物含量较高的特点,综合前人的多种方法,选取其中3种方法进行比较,结果表明:改良3%CTAB法和TIANGEN RNAplant plus Reagent法均能提取出黄金梨果实中的总RNA,但后者更适于黄金梨果实总RNA的提取,得到的RNA经电泳检测后,条带无降解且亮度较好,能基本满足后续试验的要求。
关键词：
黄金梨 果肉 RNA提取方法
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈美霞 陈富成 颜克伟 刘晓倩 徐建堂 陶爱芬 祁建民
红麻叶片中富含多糖、多酚和其他次生代谢物质,影响其RNA的产量和质量.本研究应用CTAB法、热硼酸法、SDS法、Trizol法和商品化试剂盒5种方法提取福红992幼嫩叶片总RNA,并对各方法提取效果进行比较.结果表明,热硼酸法效果最佳,其次是CTAB法和SDS法,而Trizol法、试剂盒提取效果不理想.采用热硼酸法提取的红麻叶片总RNA能够成功进行反转录和制备cDNA.
关键词：
红麻 叶片 总RNA提取
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
丁勇 刘英 杨鸯鸯 甘莉
设计了1种从油菜种子中分离高质量总RNA的方法,有效的排除了种子中富含的多酚、多糖和蛋白质等杂质的污染。分离的总RNA经甲醛变性凝胶电泳和紫外光检测,可见28S和18S rRNA的2条清晰的带型,完整无降解,其A260/A280在1.8~2.0之间。研究结果证明,利用本方法提取的油菜种子总RNA具有很高的质量和纯度,且得率高,完全能满足后续的RT-PCR、全长基因的克隆和Northern blotting分析等分子生物学研究。
关键词：
油菜种子 RNA提取 多酚 多糖 方法
[期刊] 华北农学报
[作者]
郭陈刚 李顺国 魏志敏 夏雪岩
为了从转录组水平研究黄伞菌的抗肿瘤等药用价值，需要提取分离得到高纯度、高质量的黄伞菌ＲＮＡ样品。利用液氮研磨ＴＲＩｚｏｌ一步法提取黄伞菌总ＲＮＡ，并且对经过和未经液氮研磨的黄伞菌ＲＮＡ提取产物进行了质量检测和统计对比分析。检测结果显示，经液氮研磨样品ＲＮＡ浓度远远高于未经研磨样品，ｏＤ２６０／２８０都约等于２，说明其纯度很高。同时，３个重复样品２５Ｓ和１８Ｓ亚基条带荧光强度比值分别为１．８，１．９，１．９，接近于２，证明ＲＮＡ完整性较好，ＡｇＩｌｅＮＴ ２１００的ＲＩＮ值检测结果分别为９．１，８．７，９．３，均远大于６．８标准，进一步佐证了其完整性。所以，液氮研磨ＴＲＩｚｏｌ一步法是非常适用于．．．
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
荣健 周韬 王平 孙吉康 彭昕
蚬壳花椒种子中富含油脂、多糖和多酚类等成分复杂的次生代谢物质,影响其总RNA的提取,一般的提取方法无法获得总RNA或者总RNA降解严重。本实验采用改良CTAB法、TRNzol法、试剂盒法、传统CTAB法提取总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳,核酸蛋白检测仪检测以及RT-PCR验证等对提取结果进行比较与分析。结果表明:TRNzol法、试剂盒法、传统CTAB法未能从蚬壳花椒种子中提取到总RNA,改良CTAB法能提取完整性较好、纯度较高的RNA,28S及18S条带清晰整齐,D260/D280值为2.07,提取的总RN
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孟晓庆 侯智霞 张兰 朴蕾
【目的】探讨榛子总RNA提取的有效方法,为今后开展榛子的分子生物学等研究奠定基础。【方法】以榛子的成龄叶片、幼嫩叶片和雄花芽为试材,采用植物RNA提取试剂盒、Trizol法、改良的CTAB法Ⅰ、改良的CTAB法Ⅱ、CTAB法和改良的SDS法提取其总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和PCR检测所提取总RNA样品的品质。【结果】除了Trizol法,其他5种方法都能提取到总RNA,但是改良的CTAB法Ⅰ更适合榛子幼嫩叶片、成龄叶片和雄花芽总RNA的提取,此方法提得的总RNA较完整,条带清晰,品质较优,28SrRNA亮度约是18SrRNA的2倍,且无降解现象。经RT-PCR验证,以改良的CT...
关键词：
榛子 总RNA CTAB SDS
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
尹慧 陈莉 李晓艳 陈秋明 义鸣放
为筛选出适合百合叶片RNA提取方法,以铁炮百合‘白天堂’组培苗叶片为材料,比较了改进的CTAB、SDS及传统的Trizol、CTAB、SDS方法提取RNA的效果。结果表明:不论传统及改进的SDS法和Trizol法均不能有效去除百合叶片组织中的多糖、蛋白等杂质,传统CTAB法提取RNA存在DNA污染。针对百合叶片组织富含多糖多酚的特点,改进了CTAB法,采用醋酸钠及无水乙醇去除多糖,酚/氯仿反复抽提去除蛋白,DNaseⅠ去除DNA,LiCl有效沉淀RNA。采用此方法提取的RNA条带清晰,经紫外光谱分析D260/D280比值为2.0,D260/D230为2.1,电泳28S、18S条带清晰,比值约为...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
孙思 陈洁玲 舒灿伟 王军 王新荣 周而勋
分别采用Trizol法、CTAB法、异硫氰酸胍法、SDS法和Omega试剂盒法从短枝木麻黄小枝中提取总RNA。结果表明:用Trizol法和异硫氰酸胍法没有提取到木麻黄总RNA;用CTAB法提取的RNA发生了降解;只有SDS法和Omega试剂盒法成功提取到木麻黄小枝RNA,但质量均没有达到试验要求。对提取效果相对较好的SDS法进行改进,主要是加入去除次生代谢物质的步骤。经检测,改进后的SDS法提取的木麻黄小枝总RNA纯度高、完整性好,能够满足RT-PCR分析等分子生物学研究的要求。
关键词：
木麻黄 小枝 总RNA 提取方法
[期刊] 西南农业学报
[作者]
赵洋 段承俐
从三七种子中提取高质量的RNA。采用CTAB法、天根试剂盒法、普通Trizol法、改良Trizol法对三七种子总RNA进行提取比较。结果表明,改良Trizol法提取的三七种子RNA纯度好、浓度高、无DNA污染,且成本低廉、操作简单,质量符合后续的基因克隆、cDNA文库构建、基因表达等分子生物学研究的要求。
关键词：
三七种子 总RNA 提取方法
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
曲梦 江艳华 李风铃 姚琳 逄凤娇 王联珠 翟毓秀
RNA提取是诺如病毒检测的关键步骤,而目前贝类中诺如病毒RNA提取、检测方法的比较与评价常囿于缺乏量值明确、无生物安全隐患的标准样品作为参考依据。本研究将前期制备的GⅡ型诺如病毒装甲RNA (3.0×10~(10)拷贝)作为标准样品,人工污染牡蛎(Ostrea gigas tnunb)消化腺匀浆物,用4种常见RNA提取方法:TRIzol试剂、Viral RNA Kit、High Pure Viral Nucleic Acid Kit、柱式病毒RNAOUT试剂盒,分别提取RNA,经实时荧光RT-PCR检测后,利用标准曲线进行定量分析,分别计算4种方法对装甲RNA的回收率。结果显示,对于匀浆样本,TRIzol法对装甲RNA的回收率最高(6.80±0.89)%,显著高于Viral RNA Kit (4.51±2.28)%,二者的回收率又显著高于High Pure Viral Nucleic Acid Kit (0.24±0.05)%与柱式病毒RNA_(OUT)试剂盒(0.11±0.02)%(P
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
侯哲 陆秀君 张晓林 梅梅 魏俊 李昂
试验以天女木兰叶芽、幼叶、成熟叶、花芽、花瓣、种子为材料，分别采用Ｔｒｉｚｏｌ法、改良Ｔｒｉｚｏｌ法、ＣＴＡＢ－异丙醇法、ＣＴＡＢ－ＮＡ ＡＣ和无水乙醇法、ＣＴＡＢ－ｌｉ Ｃｌ法、天根试剂盒法对其各器官进行总ｒＮＡ的提取。总ｒＮＡ的完整性、纯度和浓度等提取效果分别通过琼脂糖凝胶电泳和酶标仪进行检测。结果表明：叶芽的总ｒＮＡ最适合用改良Ｔｒｉｚｏｌ法进行提取，花瓣和花芽的总ｒＮＡ最适合用改良的ＣＴＡＢ法提取，幼叶的总ｒＮＡ可选择试剂盒法，Ｔｒｉｚｏｌ可用于成龄叶片的提取，而天根试剂盒最适合天女木兰种子总ｒＮＡ的提取。通过不同提取方法获得的高质量总ｒＮＡ经ｒＴ－ＰＣｒ检测表明：可以直接用于后续分子．．．
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
方婷 徐倩 金爱武 邓莹 骆争荣 朱强根
【目的】探讨适合于毛竹不同组织尤其是毛竹根系以及种子等总RNA提取的最优方法,获得高质量RNA样品,为今后开展毛竹的分子生物学研究奠定理论基础。【方法】分别采用柱式Trizol法、Trizol法、SDS法、改良CTAB法提取毛竹的细根、气雾根、成熟叶、幼叶、枝、种子、笋等不同组织的RNA,通过NanoDrop2000微量分光光度计检测浓度、1.5%琼脂糖凝胶电泳检测样品完整度以及RT-PCR检测是否存在目标条带,采用Excel和SPSS软件对提取结果进行统计学分析。【结果】4种方法均能从毛竹不同组织中提取到总RNA,其中SDS法提取的RNA浓度较高,但提取时间过长且步骤繁琐,RNA容易发生降解,其质量不适合用于后续的分子生物学试验;柱式Trizol法和Trizol法用时短且提取方法简单便捷,除了对毛竹细根和种子的提取效果不佳外,其余组织的RNA纯度和质量都可以满足后续的试验开展;改良CTAB法适用于各组织,包括木质化程度较高的毛竹细根以及富含淀粉的毛竹种子,缺点是DNA残留明显。除SDS法所获得的浓度较高并与其他3种方法有显著性差异外,其余3种RNA抽提方法对样品总RNA浓度无统计学差异,且各组织RNA反转录为cDNA,以内参基因PhPP2A为目的基因进行RT-PCR扩增,均可在目标位置获得明亮单一条带,约为150 bp。【结论】改良CTAB法最适合毛竹细根以及种子的RNA提取,柱式Trizol法和Trizol法适合毛竹气雾根、叶、枝和笋总RNA的提取。
关键词：
毛竹 组织 RNA提取 RT-PCR
[期刊] 水产学报
[作者]
谢潮添 梅高尚 陈昌生 纪德华
为提取高质量的坛紫菜叶状体总RNA,对常用的几种植物RNA提取方法(CTAB法、SDS法、异硫氰酸胍法)按照去除多糖、多酚的方法进行了改良,并对分离的总RNA根据吸光值、电泳图谱及RT-PCR检测等结果与两种试剂盒(离心柱试剂盒法,RNAiso法)的提取结果进行了比较。结果表明,SDS法、异硫氰酸胍法和RNAiso法3种方法提取的RNA纯度低,质量差,部分RNA已经发生了降解。而改良CTAB法和离心柱试剂盒法提取的总RNA质量可靠,完整性好,纯度高,并且成功去除了可能影响逆转录酶活性的物质,可以进一步应用于cDNA文库构建,基因表达分析等后续实验,但这两种方法各有优缺点,应根据实际情况选用合适...
关键词：
坛紫菜 叶状体 RNA提取 RT-PCR
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
于秀梅 康振生 崔素萍 赵杰
采用4种方法分别对小麦幼叶、幼茎、幼根及乳熟期籽粒的总RNA进行了提取和分析。结果表明,4种方法所提取的总RNA均能满足一般的下游操作,其中TR Izo l法提取的总RNA产量最高,用该法提取的小麦叶片总RNA产量为其他方法的2~4倍;天为时代试剂盒提取时间短,可在常温下操作;而醋酸钠/乙醇沉淀法具有提取步骤少、操作时间短、可用于大量样品提取且价格便宜等优点,适于小麦不同器官的总RNA提取;经紫外分光光度计检测,各样品总RNA的A260/A280均在1.88~2.09,表明所提取的总RNA中没有蛋白质及其他有机溶剂的污染,且A260/A230在1.89~2.41,表明盐类小分子的污染也较少,所...
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小麦 总RNA含量 提取方法
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