为探讨Caspase募集功能域(CRAD)在鲍发育和应激中的作用,实验通过比对杂色鲍转录组序列和RACE扩增的方法,获得了杂色鲍一条含CRAD的基因全长c DNA,命名为Hd CRAD;采用实时定量PCR的方法获得了该基因在发育和应激中的表达谱。结果显示,Hd CRAD的c DNA全长1 371 bp,开放阅读框735 bp,编码244个氨基酸。编码蛋白具有保守的CRAD功能域。该基因在各检测组织中均可表达,在黏液腺中表达量最高;在发育各阶段也均有表达,面盘幼虫晚期表达量最高。在细菌感染、高温或缺氧应激处理后,血细胞的Hd CRAD表达水平均有显著性变化。在担轮幼虫时期,RNA干扰该基因会显著提高幼虫畸形率;幼虫的caspase-8和DAD1的表达水平会显著上升,而caspase-3的表达水平会下降。研究表明,该基因参与了鲍幼虫发育过程;在成体免疫、耐高温和抗低氧中发挥了一定作用。

酪氨酸3-加单氧酶/色氨酸5-加单氧酶激活蛋白ζ(14-3-3ζ蛋白)是14-3-3蛋白家族的亚型之一。14-3-3蛋白是一种高度保守的酸性可溶性蛋白,它可以与激酶、磷酸酶等多种信号蛋白结合,并在信号转导和细胞凋亡等过程中发挥相应的作用。本实验通过SMART-RACE技术首次获得了杂色鲍14-3-3ζ基因的全长,并命名为Hd14-3-3ζ,其cDNA全长为3 010 bp,ORF为819 bp,共编码272个氨基酸。实时荧光定量PCR结果显示,Hd14-3-3ζ基因在杂色鲍各组织中均有表达,其中在肝胰腺和血细胞中的表达量相对较高。当处于缺氧环境下时,鳃组织中Hd14-3-3ζ的表达在4 h时存...

利用本实验室获得的杂色鲍(Haliotis diversicolor)转录组测序数据库,筛选出杂色鲍紫色酸性磷酸酯酶(Purple acid phosphatase,PAP)同源片段,进而克隆获得PAP的cDNA全序列,命名为HdPAP,并进行了HdPAP蛋白的结构分析和功能预测,同时利用实时定量PCR(qRT-PCR)技术分析HdPAP基因的组织表达谱和应激条件下的HdPAP表达变化。HdPAP基因cDNA全长1 215 bp,含有1个编码322个氨基酸的969 bp的开放阅读框。经Blast比对,与无脊椎动物半索动物门囊舌虫(Saccoglossus kowalevskii)的PAP氨基酸...

同种移植炎症因子AIF-1(allograft inflammatory factor 1,AIF-1)是一种由干扰素γ诱导的含有EF-hand结构域的钙离子结合蛋白,其功能主要是参与移植排斥、免疫炎症反应、自身炎性和非炎性的损伤等。首次克隆了杂色鲍AIF-1基因cDNA全序列,命名为HdAIF-1,其全长为942 bp,开放阅读框为456 bp,编码151个氨基酸。实时荧光定量PCR结果表明:HdAIF-1在杂色鲍各组织中均有表达,其中在血淋巴和鳃中表达量最高。高温应激下,HdAIF-1在鳃组织中各时相表达均显著上调,并在温度升至31℃时达到最高。而血淋巴和肝胰腺中HdAIF-1在高温应激前...

抗细胞凋亡因子（ＤＡＤ１）是细胞凋亡的负调控因子。在杂色鲍转录组测序的基础上，通过ＲＡＣＥ的方法，获得了杂色鲍ＤＡＤ１基因的全长Ｃ ＤＮＡ，命名为ＨＤＤＡＤ１。该序列全长５５３ ｂｐ，开放阅读框３３９ ｂｐ，编码１１２个氨基酸。编码蛋白具有保守的ＤＡＤ功能域和３段跨膜区。实时定量ｐＣＲ结果表明，ＨＤＤＡＤ１在杂色鲍所检测组织中均有表达，消化道、鳃、血细胞、粘液腺和肾脏中表达量最高。同样，ＨＤＤＡＤ１在发育各阶段均有表达，幼虫阶段表达量最高，原肠胚次之，其他胚胎发育阶段和稚鲍表达量最低。ＨＤＤＡＤ１能够响应细菌感染、高温和缺氧应激。在弧菌注射１２ Ｈ后，表达量显著上升。当水温由最适的２５°Ｃ上升．．．

本研究应用RACE技术克隆了青虾(Macrobrachium nipponensis)Ran(Ras related nuclear protein,Ras相关核蛋白)基因全长cDNA序列,该基因cDNA全长1191 bp,包括218 bp的5'UTR,648 bp的开放阅读框(ORF),405 bp的3'UTR,编码215个氨基酸。青虾Ran基因属于P-loop-NTPase超级家族,拥有PTZ00132跨结构域,多肽分子量约为24.57 kDa,理论等电点7.13。系统进化树分析表明,在动物界进化中非

为了解蜕皮激素受体(EcR)在脊尾白虾卵巢和胚胎发育中的作用,采用同源克隆和RACE技术,克隆了脊尾白虾EcR基因全长c DNA序列(Gen Bank登录号:KC506600),用实时荧光定量PCR方法分析了EcR基因在雌虾不同组织、卵巢以及胚胎发育不同时期的表达特征。结果显示,脊尾白虾EcR基因全长2 638 bp,开放阅读框1 713 bp,编码570个氨基酸,脊尾白虾EcR在系统进化上与行抱卵繁殖的真虾类和蟹类亲缘关系较近,而与对虾类较远。脊尾白虾EcR基因在各组织中均有表达,但主要在肝胰腺内表达。在脊尾白虾繁殖期内,肝胰腺内EcR的表达量始终高于卵巢,表达量峰值出现在卵巢成熟时期,而卵...

前黑素小体蛋白a (premelanosome protein， pmela)基因是黑色素合成通路中的关键基因之一，对动物的体色有着重要影响。为探讨pmela基因在虹鳟(Oncorhynchus mykiss)体色变异中的作用，本研究利用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends， RACE)技术对pmela基因cDNA全长进行克隆并运用生物信息学方法分析该基因的序列特征，同时采用qRT-PCR比较pmela在野生型虹鳟(虹鳟)、黄色突变型虹鳟(金鳟)和杂交F_(1)代受精期至孵化后3个月不同发育时期及成鱼不同组织中的相对表达量。研究获得pmela基因cDNA全长序列3476 bp，包含2532 bp开放阅读框，编码843个氨基酸。序列分析发现，Pmela为疏水性蛋白且存在PKD功能结构域。同源性比对发现，虹鳟Pemla氨基酸序列与红鲑(Oncorhynchus nerka)的同源性高达97.75%；进化分析结果显示，虹鳟与红鲑的亲缘关系最近，与人类(Homo sapiens)和小鼠(Mus musculus)的亲缘关系最远。qRT-PCR结果显示，pmela基因在虹鳟与金鳟胚胎及出膜后各时期均有表达，在受精期至16细胞期中的表达为虹鳟高于金鳟，出膜后该基因在金鳟背部皮肤中的表达均高于虹鳟，且在4细胞期、16细胞期、原肠期、神经期、体节期、心跳期、1 day post-hatching (1 dph)、3 dph、5 dph、7 dph、10 dph、1 month post-hatching (1 M)和2 M时期中，虹鳟与金鳟的表达存在显著差异。在各组织中，pmela基因在虹鳟与金鳟背部皮肤和眼睛中的表达显著高于其他组织。在杂交F_(1)代中，pmela基因在不同发育时期和组织中的表达模式与双亲类似，且在大部分相同时期和组织中的表达与双亲存在显著差异。上述结果表明，pmela基因的表达量高低与虹鳟体色具有一定的相关性，且可能参与其体色的形成过程。本研究结果为进一步研究pmela基因在虹鳟体色变异中的作用提供基础资料。

在实验室所构建的拟穴青蟹(Scylla paramamosain)EST文库基础上筛选出泛素基因(Ubquitin,Sp-Ub)片段,利用RACE技术克隆其全长cDNA序列,并对其结构进行分析;利用实时定量PCR技术检测该基因在雌蟹各组织及性腺不同发育阶段中的表达情况。结果显示,Sp-Ub基因全长555 bp,编码154个氨基酸,其第1~76个氨基酸为高度保守的泛素结构域,第101~147的氨基酸残基为典型的核糖体蛋白S27a的保守区域;预测的泛素结构域二级结构由5个延伸链,1个α-螺旋及其连接的无规卷曲构成,Sp Ub三维结构由1个α-螺旋以及5个β片层。多重比对表明不同物种的泛素结构域和核...

为了解卵黄蛋白原受体（ｖｉｔｅｌｌｏｇｅｎｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｖｇ ｒ）在脊尾白虾卵巢发育中的作用，采用同源克隆和ｒＡｃｅ技术，克隆了脊尾白虾ｖｇ ｒ基因全长ｃ ＤｎＡ序列，用实时荧光定量ｐｃｒ方法分析了ｖｇ ｒ基因在雌虾不同组织、卵巢发育不同时期的表达特征。结果显示，脊尾白虾ｖｇ ｒ基因全长５８９２ ｂｐ，开放阅读框５６６１ ｂｐ，编码１８８６个氨基酸。脊尾白虾ｖｇ ｒ具有低密度脂蛋白受体（ｌＤｌｒ）家族典型结构特征，属于ｌＤｌｒ家族，进化上与日本沼虾等甲壳动物ｖｇ ｒ亲缘关系最近，然后与昆虫ｖｇ ｒ分支聚为一支，而与ｌＤｌｒ家族中其他成员亲缘关系较远。脊尾白虾ｖｇ ｒ在各组织中均有表达．．．

SOX9是SOX家族的SOXE亚族成员,在脊椎动物骨骼发育、胰腺发育、性别决定与分化以及肿瘤形成中发挥重要的作用。sox9在不同种类脊椎动物性腺中的表达存在差异,在无脊椎动物性腺中的表达特征尚不清楚。本研究利用RACE技术克隆了栉孔扇贝(Chlamys farreri)sox9(Cf-sox9)全长的c DNA序列,其长度为2835 bp,开放阅读框为1413 bp,编码470个氨基酸。预测的氨基酸序列具有SOX家族的HMG-box和SOXE亚族的高保守区域,但没有脊椎动物羧基端的Pro-Gln-Ser

通过ＰＣＲ技术，从牙鲆（ＰａＲａｌｉＣｈｔｙｓ ｏｌｖａＣｅｕｓ）总ＲＮａ中获得牙鲆ｌｉＮ－２９基因Ｃ ＤＮａ序列，该序列全长１ ７６９ ｂＰ，包括１ ３２９ ｂＰ开放阅读框，编码４４２个氨基酸，预测其是一种多锌指结构蛋白；氨基酸序列对比分析显示，牙鲆ｌｉＮ－２９与大黄鱼（ｌａＲｉｍｉＣｈｔｈｙｓ ＣＲｏＣｅａ）的同源性最高，达９５．２５％；系统进化树分析表明，牙鲆与其他鱼类聚集一支，并且与罗非鱼的进化关系最近。荧光定量ＰＣＲ显示，在牙鲆胚胎和仔鱼发育阶段，以原肠胚期ｌｉＮ－２９表达量最高；组织表达分析表明，脑中表达最高，肌肉中最低。外源甲状腺激素（ｔｈ）在牙鲆仔鱼发育初期（ｔｈ处理后２ Ｄ、．．．

本实验应用ＲＡＣＥ技术克隆获得了三疣梭子蟹（ＰｏＲｔｕｎｕｓ ｔＲｉｔｕｂＥＲＣｕｌＡｔｕｓ）周期蛋白依赖性激酶７（Ｃｄｋ７）基因Ｃ ｄｎＡ序列全长。基因５′和３′非编码区域（ｕｔＲ）以及开放阅读框的长度分别是２３ ｂＰ、１７８ ｂＰ和１０５６ ｂＰ，预测编码一个含有３５１个氨基酸，分子量为３９．９１ ｋ ｄ的蛋白质，包含一个丝氨酸／苏氨酸催化保守结构域和ｔ－ｌｏｏＰ结构。同源性分析表明，三疣梭子蟹Ｃｄｋ７氨基酸序列与其他物种Ｃｄｋ７相似度较高，说明Ｃｄｋ７基因具有很好的保守性。实时荧光定量ＰＣＲ结果显示，三疣梭子蟹Ｃｄｋ７基因在卵巢组织中的表达量显著高于其他组织（Ｐ＜０．０５）。Ｃｄｋ７基因．．．

乙酰Co A酰基转移酶(acetyl-Co A C-acetyltransferase,AACT)是甲羟戊酸途径的初始酶,为了研究该酶在甲壳动物卵巢发育调控中的作用,用RT-PCR和c DNA末端快速扩增(RACE)技术,克隆得到三疣梭子蟹AACT(Pt-AACT)的c DNA全长(Gen Bank登录号:KM033231)。这段序列全长1 630 bp,包括1个101 bp的5'端非编码区,1个395 bp的3'端非编码区和1个1 134 bp的开放阅读框,编码377个氨基酸。对其氨基酸序列进行生物信息学预测,发现Pt-AACT属于疏水性蛋白,无跨膜结构域,存在2个硫解酶特异性保守区。与其他...

热休克蛋白(heat shock proteins， HSPs)在鱼类的应激与免疫反应中发挥重要的生理调控作用，HSP70是该家族的重要成员。为探讨热休克蛋白在大洋性经济鱼类黄条（鱼师） (Seriola lalandi)生长发育中的生理作用，本研究克隆获得了黄条（鱼师） hsp70基因的全长cDNA序列，并采用定量PCR技术测定了其组织分布及在早期生长发育过程中的表达特征。结果显示，黄条（鱼师） hsp70基因的cDNA序列全长为2332 bp，其中，5′-UTR长度为187 bp，ORF长度为1920 bp，3′-UTR长度为225 bp，编码639个氨基酸，蛋白质分子量为70.1 kDa，等电点为5.16。黄条（鱼师） hsp70 mRNA的组织表达具有性别二态性差异，其中，在雌性鳃、心、脾脏和卵巢组织中显著高表达(P<0.05)，且以卵巢中表达量最高；雄性垂体、鳃、头肾和精巢组织显著高表达(P