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[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘鹿忆 何弯弯 朱泽亮 邓平 艾桃山 谢海侠 朱文欢 张立强
为研究杀鱼爱德华氏菌（Edwardsiella piscicida）ETAE＿1309蛋白的表达调控机制，本实验利用序列截短方式和定点突变技术鉴定了ETAE＿1309基因的启动子，并检测了不同培养条件下启动子的活性。结果显示：ETAE＿1309上游-139～-1 bp具有启动子活性，ETAE＿1309的核心启动子为-10元件TATACT和-35元件CTGGCG,该启动子属于σ38依赖型启动子。ETAE＿1309转录水平受到RpoSEp(σ38)强烈的正调控，与毒力相关的调控蛋白EsrB、EsrC和与生理过程相关的Fur、CpxR、ETAE＿2077对ETAE＿1309转录水平影响不大。当杀鱼爱德华氏菌在DMEM培养基中生长时，随着培养时间延长ETAE＿1309启动子活性逐渐增加，24 h（稳定期）和36 h（衰亡期）启动子活性分别为12 h（对数期）的2.4倍和2.9倍。当培养温度升高至35℃时ETAE＿1309启动子活性显著下降，约为25℃时启动子活性的44.0%。本研究确证了杀鱼爱德华氏菌ETAE＿1309的启动子序列及调控蛋白，随着培养时间延长该启动子活性逐渐增加，随着培养温度升高该启动子活性显著降低，研究结果为精准控制ETAE＿1309蛋白表达及其介导的细菌毒力奠定了基础。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
徐进 罗晓松 曾令兵
从患头顶溃疡症的黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)内脏组织中分离出致病力强的菌株JZ086,对该菌进行了形态学、生理生化特性的测定,并进行了Biolog全自动微生物分析系统及16S rDNA序列鉴定。结果显示:人工感染实验证实该菌为黄颡鱼的病原菌,其半数致死量(LD50)为1.7×105CFU。Biolog全自动微生物分析系统鉴定结果显示该菌为鲇爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)。16S rDNA序列分析显示该菌与鲇爱德华氏菌的亲缘关系最近,同源性高达99%;系统进化树中与鲇爱德华氏菌(AB050826)自然聚为一支,二者遗传距离约为0.002。鉴定...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周荣艳 魏彦辉 锡建中 李兰会 陈辉 高立杰 张振红
【目的】分析山羊ＰＲＮＰ基因启动子活性区域，旨在筛选调节朊蛋白表达水平的关键区域或转录因子，为阐明山羊ＰＲＮＰ基因的表达调控提供理论依据，并为从遗传学角度降低朊蛋白病的发生提供思路；【方法】以山羊ＰＲＮＰ基因序列（ＧｅＮ ＢａＮｋ登录号：ｅＵ８７０８９０）为模板，设计特异性引物，扩增山羊ＰＲＮＰ基因５′侧翼区片段，并将扩增片段克隆至Ｐ ｅａＳＹ－Ｔ３载体，鉴定为阳性的克隆进行测序；利用生物信息学方法和在线工具进行启动子区域和转录因子结合位点的预测；利用缺失突变技术扩增启动子区不同长度的片段１１个，并克隆至Ｐ ｅａＳＹ－Ｔ３载体后，鉴定为阳性的质粒和ＰＧＬ３－ＢａＳｉｃ载体分别用限制性内切酶ＭＬ．．．
关键词：
山羊 PRNP基因 启动子 转录活性
[期刊] 淡水渔业
[作者]
叶旭红 林先贵 王一明
从患病澳洲宝石鱼体内分离到一株致病菌(编号Et4),对该菌的生化特性及致病基因进行检测,并进行了药敏和人工感染实验。结果显示:菌株Et4的生化鉴定结果与迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)标准菌株(AY77513)一致;其16S rRNA序列,经同源性比对与迟缓爱德华氏菌核苷酸相似度最高,达99%;根据迟缓爱德华氏菌的致病基因Ⅲ型分泌系统装置蛋白esaV基因序列设计引物,进行PCR扩增,得到708 bp序列,该序列与迟缓爱德华氏菌的esaV基因序列相似性达99.3%,说明菌株Et4具有esaV基因。菌株Et4对环丙沙星等较敏感,对其它药物中度或不敏感,具有较强的致病力(LD5...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
简清 白俊杰 叶星 夏仕玲 梁旭方 罗建仁
为获得能在肌肉表达绿色荧光蛋白的转基因斑马鱼(Brachydaniorerio),采用PCR方法,从斑马鱼基因组DNA中分离了肌球蛋白轻链2启动子,序列分析表明,该启动子与国外文献报道的斑马鱼肌球蛋白轻链2启动子序列的相似性为98.6%。将改造后的启动子插入绿色荧光蛋白基因载体,构建成肌肉特异性表达载体。通过显微注射,将线性化的表达载体注入斑马鱼的受精卵,获得了转绿色荧光蛋白基因的斑马鱼。绿色荧光蛋白在胚胎期开始表达,随着鱼体的生长表达量有增加的趋势,成鱼在紫外灯下用肉眼即可观察到绿色荧光。转基因鱼绿色荧光蛋白的表达具有明显的肌肉特异性。本研究为下一步特定基因的表达研究和获得有特色的转基因观赏...
[期刊] 水产学报
[作者]
周泽斌 丁少青 程沛茹 任建峰 李伟明 张庆华
核转录因子NF-κB (nuclear factor kappa B)对机体的免疫反应、炎症反应等起重要的调控作用。为了获得NF-κB基因启动子的活性报告基因，进一步研究原始脊椎动物免疫应答的机制，我们根据此前克隆得到的东北七鳃鳗NF-κB基因的编码序列 (coding sequence，CDS），以与东北七鳃鳗高度同源的日本七鳃鳗同源基因 5’上游启动子特征序列为模板设计引物，克隆获得了东北七鳃鳗NF-κB启动子序列，该序列全长3 169 bp，提交至NCBI 数据库Genbank获得登录号MN368861。经AliBaba2.1软件预测该序列包含CREB (cgtgacttca)、Oct-1 (aatatgaatt)、GATA-1 (gaacctatct)、AP-1 (ggttgagtca)、NF-kappa B (ctttcctgtt)、IRF-1 (tttcctgttc)、Sp-1 (tgtgaggggt)、c-Jun (acgtgacttc)和c-Fos (ggttgagtca) 等多个转录因子结合位点，并包含TATA box转录核心元件。通过MethPrimer软件预测在序列1 207-1 402 bp处存在CG含量大于50%，长196 bp的CpG岛。利用双酶切技术构建了pGL3-NF-κB-pro重组质粒，并将其转染至人胚肾细胞（human embryonal kidney, HEK293T）和鲤上皮瘤细胞（Epithelioma papulosum cyprinid, EPC）中。双荧光素酶报告基因系统检测结果显示该片段序列在哺乳动物细胞系和鱼类细胞系中均具有启动子活性，同时在HEK293T中经过Toll样受体（Toll-like receptors，TLR）的配体LPS刺激后启动子活性显著上升。本研究成功构建了东北七鳃鳗NF-κB启动子报告基因，并在不同细胞系中证实了其活性。LPS刺激后的检测结果揭示东北七鳃鳗NF-κB参与了TLR信号通路的免疫应答。东北七鳃鳗NF-κB报告基因的构建为探究原始脊椎动物免疫系统信号传导机制奠定了基础。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈立勇 陈丽华 柴丽娟 陈尚武 马会勤
以欧亚种无核葡萄品种‘无核白鸡心’(Vitisvinifera L.cv.Centennial Seedless)为材料,通过半定量RTPCR比较了VvSCL9基因在葡萄不同组织器官中的表达,利用转录组分析探索了葡萄果实中VvSCL9对外源赤霉素(GA3)处理的响应。通过全基因序列和启动子克隆、启动子生物信息学分析及转基因验证进一步研究了VvSCL9的表达特征及对不同胁迫的响应。结果表明,VvSCL9在葡萄梢尖、幼叶、成叶、老叶和花序等组织器官中均有表达,参与葡萄果实第一快速生长期的发育,但对外源GA3处理无显著响应。对克隆得到的VvSCL9启动子进行生物信息学分析,发现多个激素和逆境胁迫响应...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈立勇 陈丽华 柴丽娟 陈尚武 马会勤
以欧亚种无核葡萄品种‘无核白鸡心’（ＶｉｔｉｓＶｉｎｉｆｅｒａ Ｌ．ｃＶ．ｃｅｎｔｅｎｎｉａＬ ｓｅｅｄＬｅｓｓ）为材料，通过半定量ｒｔＰｃｒ比较了ＶＶｓｃＬ９基因在葡萄不同组织器官中的表达，利用转录组分析探索了葡萄果实中ＶＶｓｃＬ９对外源赤霉素（Ｇａ３）处理的响应。通过全基因序列和启动子克隆、启动子生物信息学分析及转基因验证进一步研究了ＶＶｓｃＬ９的表达特征及对不同胁迫的响应。结果表明，ＶＶｓｃＬ９在葡萄梢尖、幼叶、成叶、老叶和花序等组织器官中均有表达，参与葡萄果实第一快速生长期的发育，但对外源Ｇａ３处理无显著响应。对克隆得到的ＶＶｓｃＬ９启动子进行生物信息学分析，发现多个激素和逆境胁迫响应．．．
[期刊] 农业现代化研究
[作者]
赵洋 杨细平 王曼玲 李落叶 夏新界
在水稻基因组芯片分析的基础上,克隆到一个在水稻中高水平表达基因OsSG1 5’末端启动子区域1.6-kb的DNA片断,即Ospz1启动子,构建了由Ospz1启动子引导的GUS重组基因,并经农杆菌介导将重组基因导入到水稻中。对转基因水稻植株中GUS活性的定性测定结果表明,Ospz1启动子可驱动GUS报告基因在转基因水稻植株叶片、芽和根中高效表达,而在其它器官中不表达或表达活性极弱,表现出组织特异性。Ospz1启动子可用于农作物生物技术的遗传改良。
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
贾小明 张焕玲
为了研究CaMV35S启动子驱动的FT基因对转基因杨树Populus早期开花的影响,利用Gateway技术构建了35S::FT基因表达载体,并对杨树进行了遗传转化,从转基因杨树花的发育、花器官变异等方面初步探讨了35S::FT促进杨树早期开花性能。结果表明:35S::FT转基因杨树分生组织属性的改变及初始花结构的形成发生于试管培养阶段;花开始发育后如不及时把开花植株继代培养或转至土壤温室培养,初始花结构会凋谢枯萎,不能继续发育。转基因植株花器官的分化与发育发生于温室培养阶段的3~5周内,能够分化出典型的花器官,但发育不完全,具雌雄蕊、花盘结构,无成熟苞片结构,雄蕊不能成熟发育。35S::FT诱...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王海英 叶星 白俊杰 夏仕玲 劳海华 简清 王琳
利用PCR技术克隆唐鱼(Tanichthy salbonubes)β-actin基因。所克隆的β-actin基因片段为1464bp,包含长为1374bp的启动调控区和90bp的部分开放阅读框。启动调控区包括105bp的β-actin基因上游调控序列、第一个外显子和第一个内含子。上游调控序列中含有对转录起重要作用的CAATBox、TATABox、CArGBox等元件。将唐鱼β-actin启动调控区克隆到红色荧光表达载体pDsRed2-1上,并显微注射到唐鱼受精卵中,荧光显微镜观察红色荧光蛋白(RFP)的表达。结果表明,RFP在转基因唐鱼中的表达阳性率较高,最高可达51.8%,且RFP的表达水平较...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
邰志鹏 徐异桓 张电光 谭肖英
为研究黄颡鱼bmp2a与bmp4基因的功能及其相关转录因子的调控网络,采用RLM-5′RACE方法确定bmp2a与bmp4基因的转录起始位点,通过hiTAIL-PCR方法克隆bmp2a与bmp4基因启动子序列并运用生物信息学方法预测启动子序列上的关键转录因子结合位点。结果显示,bmp2a与bmp4基因的转录起始位点分别位于bmp2a与bmp4基因编码区上游的391bp与351bp处。克隆bmp2a与bmp4的1 830bp、1 962bp启动子序列,在启动子序列的基础上预测出AP1、SP1、E-box、GATA1、CREB、PPARγ、SOX5、SOX6和SOX9等转录因子的结合位点,提示这些转录因子对bmp2a与bmp4基因的转录调控发挥潜在的重要作用。
关键词：
黄颡鱼 骨形态形成蛋白 启动子 转录因子
[期刊] 水产学报
[作者]
蔡完其 孙佩芳 刘至治
从中华鳖（Trionyxsinesis）病鳖的肝脏分离得到菌株s－1。用菌株s-1进行人工感染，100％的鳖患病。从感染的病鳖的肝脏分离到菌株s’－1，经生理生化反应测定，它与菌株s－1特性一致。经鉴定，菌株s－1是迟钝爱德华氏菌（Edwardsiellatarda），野生型。爱德华氏菌感染会引起鳖的脏器发生变质性病变。主要症状呈肝脏型，肝局部坏死，有结节状肉芽肿。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
秦蕾 王印庚 张晓君
采用光学显微镜和电子显微镜技术分别对患迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)病的大菱鲆(Scophthalmus maximus)的病理学变化进行了研究。结果发现,迟钝爱德华氏菌可引起大菱鲆肾脏、脾脏、肝脏、心脏、肠和鳃等多个器官组织发生不同程度的病变,其中以肾脏病理变化最为显著,主要表现为造血组织局部坏死、单核巨噬细胞显著增生和肉芽肿形成。肝脏发生脂肪变性,血窦扩张充满单核巨噬细胞,严重者发生局部坏死;脾脏单核巨噬细胞增生显著,脾实质出现多处局部坏死;心肌纤维变性,肌纤维间有单核巨噬细胞浸润,病变严重者形成局部坏死灶。此外,在病鱼的肠和鳃内也发现大量单核巨噬细胞浸润的现象。研...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
欧阳志明 陈怀青 陆承平
用绵羊红细胞对不同来源的１５株迟缓爱德华氏菌（ＥＴ）作血凝试验。结果表明，１５株ＥＴ均具有血凝性，且不能为甘露糖、蔗糖、葡萄糖所抑制。分别用甲醛、戊二醛、胰蛋白酶处理ＥＴ的模式菌株ＥＴ９９菌体，能抑制细菌血凝。提纯的ＥＴ９９菌株的鞭毛蛋白、外膜蛋白均无血凝性。同时用ＨＥｐ２细胞分析了１５株ＥＴ的细胞粘附特性。结果表明，有１０株ＥＴ能粘附ＨＥｐ２细胞，粘附菌数大于１０ＣＦＵ／细胞。分别用甲醛、戊二醛、胰蛋白酶、盐酸处理ＥＴ９９菌体，细菌粘附力有所下降；用甘露糖、蔗糖、葡萄糖处理ＥＴ９９菌体，细菌粘附力变化不大；用甲醛、戊二醛、胰蛋白酶处理ＨＥｐ２细胞，ＥＴ９９的粘附菌数有不同程度的下降。提...
关键词：
迟缓爱德华氏菌 血凝性 细胞粘附
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