- 年份
- 2024(3071)
- 2023(4334)
- 2022(3501)
- 2021(3220)
- 2020(2653)
- 2019(6032)
- 2018(6069)
- 2017(11471)
- 2016(6450)
- 2015(7174)
- 2014(7550)
- 2013(7096)
- 2012(6551)
- 2011(5801)
- 2010(5906)
- 2009(5513)
- 2008(5100)
- 2007(4739)
- 2006(4148)
- 2005(3721)
- 学科
- 济(25653)
- 经济(25624)
- 管理(15695)
- 业(13164)
- 方法(10024)
- 企(9255)
- 企业(9255)
- 数学(9118)
- 数学方法(8956)
- 中国(7809)
- 农(7549)
- 地方(7319)
- 学(6791)
- 财(6697)
- 制(6303)
- 体(5766)
- 农业(5047)
- 融(4753)
- 银(4747)
- 金融(4746)
- 银行(4718)
- 地方经济(4634)
- 税(4634)
- 行(4548)
- 理论(4533)
- 税收(4501)
- 收(4482)
- 业经(4481)
- 贸(4108)
- 贸易(4104)
- 机构
- 学院(88011)
- 大学(86529)
- 济(34897)
- 经济(34071)
- 研究(33589)
- 管理(29151)
- 中国(24760)
- 理学(24461)
- 理学院(24175)
- 管理学(23589)
- 管理学院(23444)
- 科学(21436)
- 农(19081)
- 京(18908)
- 所(17899)
- 财(17352)
- 研究所(16271)
- 农业(15109)
- 业大(14961)
- 中心(14820)
- 江(14533)
- 财经(13048)
- 院(12694)
- 省(12026)
- 技术(11849)
- 经(11815)
- 北京(11739)
- 州(11348)
- 范(11315)
- 师范(11115)
- 基金
- 项目(59080)
- 科学(44839)
- 研究(41948)
- 基金(40900)
- 家(37191)
- 国家(36897)
- 科学基金(30009)
- 社会(25535)
- 省(24233)
- 社会科(24131)
- 社会科学(24125)
- 基金项目(20742)
- 划(20143)
- 教育(19526)
- 自然(19168)
- 自然科(18732)
- 自然科学(18722)
- 自然科学基金(18363)
- 资助(17382)
- 编号(17110)
- 成果(14622)
- 重点(13649)
- 发(13267)
- 课题(13042)
- 部(12386)
- 创(11745)
- 计划(11634)
- 体(11186)
- 科研(11139)
- 创新(11081)
共检索到139063条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张永德 范光丽 雷初朝 常秀云 张军凤 陈宏
采用正交试验设计,从Mg2+、TaqDNA聚合酶、dNTP、微卫星引物和随机引物浓度等方面对朱鹮RMAPD扩增体系进行了优化。结果表明,朱鹮RMAPD扩增的最佳体系为:10×Buffer 2.0μL,MgCl23.13 mmol/L,TaqDNA聚合酶1 U,dNTP 0.10 mmol/L,微卫星引物0.20μmol/L,随机引物0.50μmol/L,模板DNA 3.75 mg/L,最后补ddH2O至20μL。将该体系用于朱鹮RMAPD分析,得到了重复性和稳定性良好的朱鹮RMAPD试验结果。
关键词：
朱鹮 RMAPD 扩增体系 正交试验设计
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
陈思 曹远银 李天亚 陈靓
针对RAPD扩增技术在小麦秆锈菌遗传多样性的分析研究中重复性较低的不足,对小麦秆锈菌RAPD扩增体系进行优化。以小麦秆锈菌不同的生理小种为材料,采用L16(45)正交试验设计,考察模板DNA、Mg2+、TaqDNA聚合酶、dNTPs和随机引物浓度5个因素的影响,并对退火温度和循环次数进行优化。结果表明:小麦秆锈菌RAPD扩增的较优体系为25μL体系中含1×Buffer,40ng·μL-1模板DNA,1.5mmol·L-1Mg2+,2.0U TaqDNA聚合酶,0.25mmol·L-1dNTPs,0.40μmol·L-1随机引物;适宜的退火温度为36℃,适宜的循环次数为43次。该反应体系检测多态...
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
曹福亮 王国霞 李广平 花喆斌
为了对影响银杏Gingko biloba简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应(ISSR-PCR)扩增反应体系的因素进行优化,采用ISSR-PCR扩增技术和UVP凝胶电泳成像技术对模板DNA浓度、Taq酶用量、引物用量、dNTP的用量以及退火温度等因素进行筛选和优化。筛选优化后的反应条件:Taq酶0.3μg,2μL 10×Buffer(含15 mmol.L-1MgCl2),模板DNA40 ng,dNTP 0.2 mmol.L-1,引物0.5μmol.L-1,Mg2+1.5 mmol.L-1。PCR扩增程序:94℃变性5 min,然后进行38个循环:94℃变性30 s,48~53℃(根据引物而定)...
[期刊] 华北农学报
[作者]
齐靖 董祯 申连英 毛永民 陈亮
以冬枣DNA为研究对象,利用单因素试验,分析了Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶含量、引物浓度、模板DNA含量以及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响,经优化建立了枣属植物最适ISSR-PCR反应体系,25μL反应液中包含1×PCR Buffer、2.0 mmol/L Mg2+、0.25 mmol/L dNTP、1.5 UTaq酶、1.25μmol/L引物和50 ng模板,最适退火温度为58℃。PCR反应体系的建立为应用ISSR标记技术开展枣种群遗传变异分析和构建遗传图谱奠定基础。
关键词：
枣 ISSR 体系优化
[期刊] 华北农学报
[作者]
谢欢 杨文香 彭巧慧 赵丽娟 刘力伟 张娜 刘大群
以Thatcher及23个以Thatcher为遗传背景的小麦抗叶锈病近等基因系为材料,开展了MITE扩增体系的建立研究,获得了适合小麦MITE分子标记的扩增体系及不同引物的退火温度,所用56对引物有27对获得稳定扩增。
关键词：
小麦叶锈病 抗病基因 MITE 分子标记
[期刊] 中国农业科学
[作者]
马庆华 王贵禧 梁丽松
【目的】建立和优化枣的选择性扩增微卫星(SAM)技术体系,丰富枣群体遗传学研究的方法,同时为枣利用SAM法开发SSR引物提供技术参考和模板。【方法】以冬枣、大荔龙枣和金丝小枣为试材,采用CTAB法提取样品DNA,对SAM试验过程中的酶切-连接、抑制性扩增、预扩增、选择性扩增等关键因子进行研究。【结果】利用PstⅠ和MseⅠ双酶切系统,分步法进行酶切-连接是后续试验成功的关键,抑制性扩增(20.0μL体系)模板取酶切连接液2.0μL,预扩增和选择性扩增(20.0μL体系)的模板分别取上步扩增的稀释产物各2.0μL;抑制性扩增和预扩增反应中,ExTaq取0.5U,反应25个循环,产物稀释20倍进行...
[期刊] 水产学报
[作者]
罗霞 付小哲 李宁求 林强 黄志斌 张悠
为获知鳜弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus,SCRV)QY株在体外培养细胞中最适增殖条件,以鳜脑细胞系(Chinese perch brain cell line,CPB)为增殖体系,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)技术所测病毒拷贝数为判断指标,比较同步接毒和异步接毒2种接种方式以及病毒接种量、血清浓度等培养条件对病毒增殖的影响,确定SCRV-QY株在CPB细胞中的最适增殖条件。结果显示,单位体积病毒增殖量方面,异步接毒法优于同步接毒法,以感染复数(multiplicity of infection,MOI)为10将病毒接种长满单层的CPB细胞中,28°C吸附1.5 h,用含2%胎牛血清的L15培养液于28°C培养时,病毒增殖量最高,为5.59×10~(10)拷贝/mL;而从单位成本所获病毒量考虑,同步接毒法筛选出的4种增殖条件单位成本所获的病毒产量优于异步接毒法,其中当MOI=0.03、胎牛血清终浓度为6%时,同步接种对数生长中期的CPB细胞,28°C恒温培养70 h后收获病毒液,单位成本所获病毒量最高,为4.88×10~(13)个拷贝/元。综上所述,本研究以病毒增殖量和培养基成本作为考量,优化SCRV-QY株的增殖条件,可为SCRV疫苗低成本、规模化生产提供理论依据。
[期刊] 华北农学报
[作者]
常佳迎 寇宏达 乔丹娜 张艳杰 赤国彤 李亚宁 李兴红 刘大群
通过对模板DNA、Primer、dNTPs、10×Taq 10 Buffer、Taq酶的不同浓度进行单因素筛选,并对退火温度和循环次数进行摸索,建立和优化了灰葡萄孢菌Flipper转座子PCR扩增体系。采用该体系及Flipper转座子引物扩增得到了1 159 bp的片段,通过比对发现,该片段与Botryotinia fuckeliana的Flipper转座因子转座酶基因相似性达99%,表明扩增得到的是预期目的片段。Flipper转座子扩增体系的建立,为深入研究我国葡萄灰霉病菌菌株的转座子类型及其与致病力、抗药性等因素之间的关系奠定了重要的基础。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈燕萍 陈美霞 徐建堂 陈晖 陶爱芬 祁建民
采用改良的CTAB法从圆果黄麻成熟叶片中提取基因组DNA,对DNA进行电泳检测、含量测定和SRAP分析,并对黄麻SRAP-PCR反应体系中主要影响因子进行了优化,建立了最佳反应体系.结果表明,改良的CTAB法能够提取高质量的DNA,DNA纯度和完整性都较好,经紫外分光光度计测定,D260 nm/D280 nm均在1.7-1.9之间,无降解现象,蛋白质、多糖类等去除彻底.所建立的SRAP最佳反应体系(25μL)中5种成分的适宜浓度及用量分别为:Taq DNA聚合酶1.75 U,Mg2+3.0 mmol.L-1,dNTPs 0.16 mmol.L-1,引物0.51μmol.L-1,模板DNA 80...
关键词：
圆果黄麻 DNA提取 SRAP反应体系
[期刊] 华北农学报
[作者]
李勇 牛永春
以小麦基因组DNA为试验材料,探索SSR扩增反应中5种反应组分(模板DNA、dNTPs、引物、Mg2+和TaqDNA聚合酶)对SSR扩增结果的影响。研究发现,引物、Mg2+和TaqDNA聚合酶对PCR扩增结果的影响最显著,其次是模板DNA,dNTP对PCR扩增结果的影响不明显。此外,借助该优化的SSR反应体系,对小麦7B染色体上的多对SSR引物进行了多态性筛选。试验结果表明,优化的SSR扩增体系结合高浓度琼脂糖凝胶能够对显性或差异显著的共显性标记进行高效分离。
关键词：
小麦 SSR 分子标记
[期刊] 华北农学报
[作者]
王振国 张海英 于广建 张峰 王永健 许勇 郭绍贵 宫国义
采用正交试验设计方法,对影响黄瓜SRAP反应体系的5种因素(dNTP、模板DNA、引物、Taq聚合酶及变性剂)4个水平进行优化筛选,确立了适合黄瓜SRAP分析的优化反应体系,即在10μL PCR反应体系中含有1μL 10×PCR buffer,150μmol/L dNTP,30 ng模板DNA,0.3μmol/L引物、1.5 U Taq聚合酶,PCR产物变性时用10μL变性剂。
关键词：
黄瓜 正交设计 SRAP
[期刊] 水产学报
[作者]
王玉萌 刘德举 张玉敏 张敏 宫相忠
为优化萱藻丝状体扩增条件，提高萱藻丝状体的扩增速率，本研究以实验室萱藻种质库保存的丝状体为实验材料，在单因素实验的基础上，应用Box-Behnken设计对萱藻丝状体扩增条件进行了响应曲面优化探索。结果显示，以增重倍比为指标，确定了扩增萱藻丝状体的最佳条件：温度20.45 ℃， 光照强度78.13 μmol/(m~(2)·s)，外加氮磷比16.19。在该条件下扩增10 d，萱藻丝状体增重倍比为(299.21%±13.58%)，显著高于单因素实验和Box-Behnken设计实验条件下获得的萱藻丝状体增重倍比。实验结果与理论预测值的相对误差小于5%，模型可靠。为评价优化培养后萱藻丝状体的发育情况，对丝状体进行了20 d的诱导，结果显示：优化培养后的萱藻丝状体呈深褐色，细胞质充盈，孢子囊比例(26.37%±5.22%)比对照组的孢子囊比例(18.10%±3.51%)提高了45.69%(P＜0.05)；优化条件下的孢子囊直径平均为(19.75 μm±0.21 μm)，显著高于对照组的孢子囊直径(16.91 μm±0.36 μm) (P＜0.05)。研究表明，在萱藻丝状体扩增过程中，对扩增环境条件进行有目的性的调控，设置合适的营养盐浓度配比，不仅可以实现较高的扩增速率，还可以促进丝状体的孢子囊发育。
关键词：
萱藻 丝状体 响应曲面法 扩增
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张建勇 王清印 王伟继 孟宪红 孔杰 张全启
采用四引物扩增受阻突变体系PCR(Tetra-primer ARMS-PCR)技术,对中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)的80个单核苷酸多态性位点(Single Nucleotide Polymorphisms,SNPs)进行验证。结果表明,通过优化PCR反应条件、调整内外引物浓度和采取Touchdown PCR程序可优化扩增效果,80组引物中有20组引物得到良好的分型效果。群体多态性分析表明有效等位基因数(Ne)、观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)及多态性信息含量(PIC)的范围分别为1.127~1.993、0.136~0.607、0.119~0.492和0....
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
孔会利 王超 肖亮 李文成
高G+C含量模板进行PCR扩增时,往往通过添加增强剂如甘油、DMSO、甲酰胺等来提高扩增效率,但是目前研究单个增强剂对PCR影响的较多,而研究增强剂组合的不多,而且关于增强剂对聚合酶保真度的影响的研究也不够充分。本研究通过正交试验对不同增强剂组合的效应进行了探讨,建立了3个对高G+C含量模板进行PCR扩增的高效缓冲液体系,并且对其中2个进行研究发现它们可以提高Taq聚合酶扩增的保真度,因而具有较广的应用前景。
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
陈文充 贾宁 董昂 闫道良 曾燕如
山核桃Carya cathayensis为浙江省重要的经济树种。近年来细胞生物学及分子标记的研究发现,山核桃中存在无融合生殖,天然群体的多态性不佳,存在印迹数量性状位点(iQTLs)。iQTLs与DNA甲基化有关,而DNA甲基化对生物表观遗传调控起着重要的作用,是可遗传的生物现象。甲基化敏感扩增多态(MSAP)是基于PCR扩增多态性的DNA甲基化检测方法。在建立山核桃MSAP标记体系的基础上对来自3个天然居群的山核桃单株样品进行了分析。结果表明:山核桃存在甲基化,非甲基化相对水平大于总甲基化相对水平,且两者间差异极显著(Wilcoxon Rank Sum检验P
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
