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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李献梅 王小芬 崔宗均
末端限制性片段长度多态性技术(T-RFLP)是以荧光标记引物PCR为基础,根据末端限制性片段长度区分出微生物群体组成的一种微生物群体图谱法。本文综述了该方法在群体微生物分析上的应用及DNA提取、PCR扩增、酶切和数据分析等步骤的技巧与优化,总结了科学应用该技术的要求以及和多重PCR、gyrB基因等相结合的观点。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
单淇 董仕 吴海防 谷口顺彦
鳙鱼(Aristichthys nobilis)采自江西瑞昌、湖南长沙的天然群体以及天津宁河的人工繁殖群体共127尾,对其线粒体DNA的D-loop区段进行PCR扩增,使用12种核酸内切限制酶酶切。酶切结果显示,在12种内切酶中,8种有酶切位点,2种个体间有变异,为AfaⅠ和HinfⅠ,共得到7种单倍型。依据单倍型频率的组成情况,计算出瑞昌与长沙、宁河群体间的Rogers遗传距离分别为0.728 3和0.500 7,长沙和宁河群体间的Rogers遗传距离为0.813 5。AfaⅠ的酶切类型C和HinfⅠ的酶切类型B组成的单倍型,在长沙群体中占87.5%,而在瑞昌和宁河群体中均为零。由此可以认为...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
郭晓令 姜志华 刘红林 黄月英
采用纯种大约克和纯种二花脸猪血样提取基因组ＤＮＡ，分别用１１种限制性内切酶消化，以非放射性狄高辛试剂盒标记４．８ｋｂ２１－羟化酶（ＣＹＰ２１）基因为探针，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交对猪的ＣＹＰ２１基因位点的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰｓ）进行了研究。结果在ＢａｎⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＫｐｎⅠ、ＰｓｔⅠ和ＴａｑⅠ５种限制性内切酶位点检测出了ＲＦＬＰｓ，且ＢａｎⅠ和ＫｐｎⅠ酶切位点的多态性为首次发现；而在其他６种酶切位点（ＡｐａⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＤｒａⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＳｃａⅠ、ＸｂａⅠ）没有发现ＲＦＬＰｓ。用上述５种发现ＲＦＬＰｓ的限制酶对无亲缘关系的１２头大约克和１２头二花脸猪进行ＲＦＬＰｓ分析，各限制酶...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
苟本富
采用单酶切和双酶切AFLP技术分别对5种不同蔷薇品种基因组DNA的遗传多态性进行了检测,比较了2种方法的多态性比率。单酶切采用10条人工设计的与接头序列相识别的AFLP选择性引物,用PstⅠ酶切,共获得108个AFLP标记,片段大小在100~2000 bp,得到33个多态位点,多态性位点百分率为30.56%;双酶切采用25对双酶切AFLP引物,在50~600 bp扩增出清晰条带658条,得到182个多态位点,占总扩增带的27.6%。对多态性片段进行统计,计算出不同品种间的相似系数和遗传距离。结果表明:硕苞蔷薇同其它4种蔷薇的遗传距离偏远,且其它四种蔷薇的遗传距离均较近,这与蔷薇品种来源和培育史...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
于晓英 张秋明 易干军 霍合强 谭卫萍 李典范
为了建立一个准确、完善、统一的香蕉鉴别分类标准 ,促进香蕉种质资源的合理利用及新品种的选育与推广 ,于 2 0 0 0年 2至 12月在广东省农科院果树研究所对广州国家种质香蕉圃的 35份香蕉种质材料进行了AFLP分子标记 .结果表明 :1)引物EcoRⅠACC +MseⅠCAT和EcoRⅠACC +MseⅠCAG对 35个香蕉材料进行选择性扩增后 ,共得到扩增位点 10 7个 ,其中多态性位点 84个 ,多态性位点比例达到 78.5 % ,对 35个材料的区分率达到10 0 % .2 )在引物对EcoRⅠACC +MseⅠCAT和EcoRⅠACC +MseⅠCAG构建的香蕉AFLP指纹图谱中...
关键词：
香蕉 种质资源 鉴别 扩增片段长度多态性
[期刊] 西南农业学报
[作者]
吴华莉 涂尾龙 曹建国 都启晶 常华 羊兆洪 谈永松
【目的】肉质是猪肉的重要经济指标,肌内脂肪(IMF)含量是影响肉质的重要因素。H-FABP基因是调控猪肉IMF含量的候选基因。【方法】本实验采用PCR-RFLP技术分析H-FABP基因多态性,并检测该基因在5个猪群体:杜洛克(100头)、长白(80头)、大白(150头)、申农(80头)、梅山(140头)的基因型和基因频率。【结果】H-FABP基因在杜洛克、大白、申农猪群体中检测出DD、Dd和dd 3种基因型。在杜洛克群体中的基因型频率:DD(0.02)、Dd(0.23)和dd(0.75);在大白猪群体中基
关键词：
猪 心脏型脂肪酸结合蛋白基因 多态性
[期刊] 水产学报
[作者]
李静 陈松林 邓思平 田永胜 沙珍霞 王清印 庄志猛 徐建勇 温海深
半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevisGünther)为东北亚特有的名贵冷温性比目鱼类,为我国养殖业的新宠。半滑舌鳎雌鱼生长速度是雄性的2~3倍,若能实现单雌化养殖将大大提高养殖业的经济效益。本研究利用扩增片段长度多态性(AFLP)技术,应用64个引物组合,检测了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevisGünther)雌雄基因组DNA的多态性,筛选与半滑舌鳎性别相关的AFLP分子标记。实验经过3轮筛选和验证,4个引物组合扩增出7个雌性个体出现频率为100%的DNA片段,我们认为这7个标记是半滑舌鳎雌性特异的AFLP标记,分别命名为CseF382、CseF575、C...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杜晓华 王得元 巩振辉
为了避开基于限制性酶切位点分子标记技术的DNA酶切环节,简化其复杂的程序,试验以辣椒为材料,建立了一种新型DNA标记技术——限制性位点扩增多态性(RSAP),并对其反应体系进行了优化,对RSAP适用性、重复性进行了检验。结果显示,RSAP技术的引物为2条长度均为18 bp的引物,引物的3′端为4~6个碱基的限制性酶切位点序列,接着是12~14个碱基的随机序列,2条引物的限制性位点和随机序列不同;PCR扩增的前5个循环采用35℃的退火温度,随后的35个循环采用48℃的退火温度;在25μL反应体系中,模板DNA用量为20 ng,M g2+浓度为2.5 mm o l/L,dNTP s浓度为0.2 m...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李玉宏 柴鹏程 胡修贵 孙艳 黄倢 宋晓玲
本研究应用PCR-RFLP(Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism)和PCR-DGGE(Polymerase Chain Reaction-Denaturing Gradient Gel Electrophoresis)技术,对工厂化养殖的凡纳滨对虾肠道菌群进行多样性分析。RFLP结果显示,8月样品中不同的克隆子为5个,其中以不可培养细菌(Unculturable bacteria)为主要优势菌,其次为鲁杰氏菌属菌种Ruegeria spp.和Rhodobacterales spp.。依据微生物多样性...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
于晓英 吴铁明 彭尽晖 吕长平 张宏志 丁江南
为了获得萱草清晰的 AFL P指纹图谱并进一步进行萱草种质资源的鉴别与分类研究 ,以大花萱草为试材 ,用改进后的 SDS法和 CTAB法 ,从萱草的幼叶、成熟叶、新根等部位提取 DNA.结果表明 ,用这两种方法均可从萱草的幼叶、成熟叶、新根中获得高分子量基因组 DNA和 AFL P指纹图谱 ,其中以幼叶的 DNA产量和品质最好 ,CTAB法提取的 DNA纯度较高且程序简单
关键词：
萱草 扩增片段长度多态性 脱氧核糖核酸
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
于晓英 吴铁明 彭尽晖 吕长平 张宏志 丁江南
为了快速准确地进行萱草种质鉴定 ,从 6 4对AFLP引物中随机选出了 3对引物组合 (即EcoRⅠAAC MseⅠCAT ,EcoRⅠACC MseⅠCAT ,EcoRⅠACC MseⅠCAG) ,构建了 5个萱草种质的指纹图谱 .3对引物在 5个萱草材料中 2 0 5个位点上扩增出了条带 ,其中多态性条带 12 8个 ,占扩增条带总数的 6 2 .9% ,5个萱草材料具有较高的遗传多样性 ,并初步认为其中野生重瓣萱草可能来自于萱草H .fulva的自然突变
关键词：
萱草 扩增片段长度多态性 DNA指纹
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
吴欢欢 王伟继 吕丁 胡玉龙 孔杰
采用基于Illumina测序平台的高通量测序技术,对大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼鱼肠道及其养殖水体、生物饵料中细菌种类及丰度进行研究。测序结果显示,养殖水体、生物饵料和大菱鲆幼鱼肠道等19个样品共获得有效序列547621条,可聚类于3771个可分类操作单元(OTUs),归属于养殖水体、生物饵料、健康幼鱼和发病幼鱼的操作分类单元(OTU)个数分别为3038、1090、87和777,其中,健康幼鱼与生物饵料、健康幼鱼与养殖水体特有的OTU个数分别为57和0,发病幼鱼与生物饵料、发病幼鱼与养殖水体特有的OTU个数分别为481和31。表明幼鱼肠道微生物多样性与生物饵料密切相关。根据细菌注释结果,拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)和变形菌门(Proteobacteria)在大菱鲆幼鱼肠道中占优势地位,其中,健康幼鱼肠道微生物共聚类为8个门,发病幼鱼的肠道微生物可聚类为19个门。与健康幼鱼相比,发病幼鱼肠道门水平上的3种主要优势菌群落结构出现失衡。此外,对各样品中丰度最高的100位OTU分析显示,幼鱼肠道优势菌种类与生物饵料中的优势菌种类密切相关,而每个发病幼鱼肠道优势菌种类具有一定的独立性。本研究旨在为大菱鲆健康养殖和微生态调控提供实验依据。
关键词：
生物多样性 高通量测序 大菱鲆
[期刊] 华北农学报
[作者]
张烈 王鹏文 戴俊英 顾宜晴
对EM有机肥的增产机理研究结果表明 :施用EM有机肥提高了玉米子粒的产量 ,两年试验平均比对照高 9 2 0 % ;EM有机肥与普通有机肥相比 ,玉米植株叶片光合作用速率提高 ,叶绿素含量增加 ,氮代谢能力增强 ,硝酸还原酶活性和可溶性蛋白含量提高 ;EM有机肥处理明显提高了孕穗期玉米植株的耐旱耐涝能力。收获期的田间调查结果表明 :EM有机肥处理可明显减少田间植株的倒伏率 ,降低植株茎腐病和丝黑穗病的发病率
关键词：
有效微生物群 玉米 产量 秸秆有机肥
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
孙玲 王凤成 王秋实 刘彦群 仝振祥 冀万杰 张博 王学英
以22个柞蚕品种(品系)为材料,采用PCR技术分别扩增其线粒体DNA(mtDNA)的细胞色素b基因(Cytb),测定5’端485bp的核苷酸序列,并采用Dnaman软件进行分析,结果表明:供试22个柞蚕品种可分成2组,2组之间只在294bp处有一个差异位点。从GenBank中调取柞蚕豫早1号品种Cytb基因的5’端相应序列(AY242996),与本试验测得的柞蚕青黄1号和青6号对应的核苷酸序列进行了同源性比较,结果表明:青黄1号和青6号的同源性达99.8%,青黄1号和豫早1号的同源性达98.6%,青6号和柞早1号的同源性达98.8%。可见,不同柞蚕品种的表型虽然不同,但在Cytb基因水平上其核...
关键词：
柞蚕 线粒体 细胞色素b基因 序列分析
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