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[期刊] 华北农学报
[作者]
杨佳 怡荣 张立全 牛一丁 王秀珍 哈斯阿古拉
以油菜子叶节为外植体优化了农杆菌介导的甘蓝型油菜的遗传转化体系,为在油料作物中用基因工程手段生产γ-亚麻酸打下基础。采用CaCl2法制备农杆菌AGL1感受态细胞,将已经构建好的植物表达载体pPZP221(35S-D6D-NOS)通过液氮冻融法转化农杆菌,PCR筛选阳性转化子。结果表明:优化的甘蓝型油菜子叶节外植体预培养条件是:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基预培养2 d;用于侵染的农杆菌菌液的最适浓度为OD600=0.4,时间为5 min,并得到转基因植株。经侵染的外植体在含有庆大霉素的分化选择培养基上培养,抗性芽移至生根培养基,PCR检测阳性小植株移栽花盆,共...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张琦 李明春 蔡易 苗翠苹 李绍兰 陈有为 邢来君
【目的】验证少根根霉△6-脂肪酸脱氢酶基因在转基因油菜中的表达情况,为进一步基因工程化生产γ-亚麻酸打下基础。【方法】将少根根霉△6-脂肪酸脱氢酶基因和植物表达载体pCPN2301连接,构建重组表达质粒pCPNRAD6,采用农杆菌介导的油菜子叶节转化法,将该基因导入甘蓝型油菜H165,获得转基因植株,最后通过气相色谱检测基因的表达情况。【结果】PCR、GUS组织化学染色和Southern杂交分析结果表明,目的基因已经整合到油菜基因组中,Northern杂交分析进一步表明目的基因在RNA水平获得表达,气相色谱分析检测到转基因油菜叶片中γ-亚麻酸和十八碳四烯酸生成,证明目的基因获得功能表达。同样,...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
黄兴琳 陆俊杏 廖冰楠 白辉扬 管丽 张涛
【目的】ω-3脂肪酸脱氢酶(ω-3 FAD)为植物脂肪酸生物合成途径中的关键酶,通过对油用牡丹‘凤丹’ω-3 FAD基因结构特征及其在不同组织中的表达模式进行分析,为研究FAD3在油用牡丹‘凤丹’脂肪酸形成过程中的调控提供理论基础。【方法】采用RACE和RT-PCR的方法克隆油用牡丹‘凤丹’ω-3 FAD基因,用Vector NTI Advance 11软件进行序列分析,BLAST进行同源性比较,并用MEGA7.0的邻接法(neighbor-joining,NJ)构建系统进化树,利用在线蛋白质分析工具Ex
[期刊] 林业科学研究
[作者]
林萍 周长富 姚小华 曹永庆
［目地］研究普通油茶油脂成分形成的调控机制。［方法］通过转录组测序获得２条普通油茶Δ－１２脂肪酸脱氢酶基因序列，分别命名为Ｃｏｆａｄ６和Ｃｏｆａｄ２－２，并对这两个基因及其编码蛋白的序列特征进行比较，对其基因表达量与脂肪酸成分含量的相关性进行分析。［结果］Ｃｏｆａｄ６基因Ｃ ｄＮａ编码区全长１ ３４７ ｂｐ，编码４４８个氨基酸；Ｃｏｆａｄ２－２基因Ｃ ｄＮａ编码区全长１ １５２ ｂｐ，编码３８３个氨基酸。经比对，Ｃｏ ｆａｄ６蛋白与其余物种ｆａｄ６蛋白有６５．７％８３．６８％的氨基酸同源，Ｃｏ ｆａｄ２－２与浙江红花油茶ｆａｄ２－２蛋白有９９．２２％的氨基酸同源，与其余物种的蛋白质７８．５９％．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨国婵 谢银鹏 马锋旺 梁东 邹养军
【目的】研究６－磷酸山梨醇脱氢酶基因启动子（Ｓ６ＰＤＨＰ）的组织表达特点。【方法】利用Ｇａｔｅｗａｙ技术构建了Ｓ６ＰＤＨＰ与ＧＵＳ基因的融合表达载体，然后通过农杆菌介导法转化番茄＂中蔬５号＂，对转基因植株进行ＰＣＲ检测，对鉴定为阳性的植株进行ＧＵＳ组织化学染色，验证Ｓ６ＰＤＨＰ的组织表达特性。【结果】将Ｓ６ＰＤＨＰ－ＧＵＳ融合表达载体转化番茄，经ＰＣＲ检测显示，成功获得了转Ｓ６ＰＤＨＰ基因的阳性番茄植株。对阳性植株各组织器官的ＧＵＳ化学染色和活性检测结果显示，除叶片外许多器官都有很强的ＧＵＳ活性，且在转基因番茄成熟期植株的茎部活性最高，根部活性最低；叶片从新叶到老叶的各个时期，ＧＵＳ活性持续降．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
周延清 田苗苗 王芳 陈艳梅 张永华 苑保军
根据NCBI中大豆fad2-1序列设计引物,用PCR方法从大豆的基因组DNA中扩增大豆脂肪酸脱饱和酶基因,克隆到pMD18-Tvector中,转化大肠杆菌JM109菌株,进行测序与比对。然后,将其反向克隆到表达载体pBt,转化农杆菌菌株LBA4404,经双酶切鉴定和PCR扩增检测,获得具有该基因的农杆菌工程菌。结果表明,克隆的fad2-1基因为1 196 bp,基因序列与NCBI中已发表的fad2-1序列只有4%的差异,相似性大于95%,说明克隆的基因是大豆fad2-1基因;构建了该基因的反向表达载体,转入农杆菌内。这为利用农杆菌介导法把该反义基因转入大豆,改良脂肪酸成分奠定了基础。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
魏跃 陈啸寅 李振陆 王永平 史建磊 吴志明 张蜀宁 陈劲枫
以黄瓜品种露丰为材料,根据已报道的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因(6PGDH)的保守氨基酸序列设计简并引物,利用RT-PCR技术获得黄瓜6PGDH的cDNA同源片段,命名为CSPG(登录号为EU815934)。该片段长度为1 207 bp,包含一个936 bp的开放阅读框(编码311个氨基酸)和271 bp的Poly A 3′非翻译区末端,无内含子;该基因编码的氨基酸序列与拟南芥、大豆、水稻、玉米、菠菜的6PGDH基因有75%以上的同源性。运用半定量RT-PCR技术对6PGDH基因的转录水平进行分析,结果表明:该基因在叶、根、茎中均有表达,高温胁迫下的表达量高于常温对照,说明6PGDH基因与热胁迫...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
杨玉婷 李国印 苏亚春 郭晋隆 许莉萍
从甘蔗中克隆获得1个6PGDH基因的cDNA序列,记为Sc6PGDH(登录号:KF921299).该基因序列含有1个1467 bp的完整开放阅读框,推导编码488个氨基酸残基.生物信息学分析可知,Sc6PGDH基因编码的蛋白分子质量为53.6561 ku,为酸性稳定的亲水蛋白,含有信号肽,可能定位于内质网膜上,具有该类蛋白典型的保守结构域6PGD,且与分离自谷子、玉米和水稻的6-磷酸葡萄糖脱氢酶的氨基酸序列同源性分别高达96.11%、95.70%和93.24%,表明该基因在进化过程中比较保守.原核生物生长试验结果显示,甘蔗Sc6PGDH基因的表达蛋白可以显著增强大肠杆菌Rosetta菌株的耐盐...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
肖玲 卢长明
脂肪酸延长酶基因fae1是调控油菜芥酸合成的关键基因。本研究利用GenBank中的fae1基因序列AF490462为模板设计引物,通过多聚酶链式反应(PCR)从白菜、甘蓝和甘蓝型油菜(包括2个人工合成种)的12个不同品种中扩增出长1007bp的fae1基因片段。PCR产物经与克隆载体pGEM-Tvector连接和序列测定,获得12个品种的fae1基因片段的DNA序列。对来自12个不同品种的fae1基因序列进行比较分析表明:fae1基因具有高度序列保守性,扩增长度均为1007bp,核苷酸序列相似度达98%以上,氨基酸序列的保守性更高。在1007bp的区间内共发现23个SNP(singlenucl...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张爱武 左璐雅 董斌
【目的】研究月见草籽对鹌鹑肉中脂肪酸含量的影响,以期通过调整日粮组分来改变鹌鹑肉中脂肪酸的含量。【方法】选用150只1日龄鹌鹑,随机分成5组,每组设3个重复,每重复10只。第1组饲喂基础日粮,第2~5组分别饲喂在基础日粮基础上添加8%,10%,12%和15%月见草籽的试验日粮,进行为期50 d的饲养。于35和50日龄时,每个重复随机屠宰3只鹌鹑,取肉样,测定鹌鹑肉中常规营养成分和脂肪酸的含量。【结果】随着月见草籽添加量的增加,35日龄鹌鹑肉中脂肪含量呈递增趋势,15%月见草籽添加组显著高于对照组(P0.05)。随着日粮中月见草籽添加量的增加,35日龄及5...
关键词：
月见草籽 鹌鹑 脂肪酸含量
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘振林 戴思兰
对近年来植物甜菜碱醛脱氢酶(BADH)基因的研究现状进行了系统分析。对目前已分离到的10个不同种植物BADH基因的序列分析发现:该基因编码区序列趋于保守;在不同物种间存在拷贝数不同的差异;其表达也存在转录或转录后水平的差异,具有组织特异性、组成型和诱导型的不同表达类型;氨基酸序列同源性反映的种间关系与这些种的系统分类位置一致,表明该基因的进化与植物的系统进化间具有密切关系。此外,还对信号肽区域、外显子剪切位点以及BADH定位的变化等进行了分析。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
魏玉众 张桂蓉 霍斌 谢从新 陈生熬
采用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对雅鲁藏布江中游6种裂腹鱼(尖裸鲤Oxygymnocypris stewartii、拉萨裸裂尻鱼Schizopygopsis younghusbandi、巨须裂腹鱼Schizothorax macropogon、拉萨裂腹鱼S.waltoni、双须叶须鱼Ptychobarbus dipogon和异齿裂腹鱼S.o'connori)的心肌、肌肉、肝脏、肾脏和晶状体5种组织的LDH(乳酸脱氢酶)同工酶进行比较分析。结果表明LDH同工酶的表达具有明显的组织和种间差异性。尖裸鲤、拉萨裸
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张富丽 蔡峰 吴军 陈放 王云霄 赵小光 高顺
【目的】研究麻疯树甜菜碱醛脱氢酶(JcBD1)的功能。【方法】通过RT-PCR和RACE的方法从麻疯树中克隆甜菜碱醛脱氢酶基因(JcBD1)的全长cDNA序列。将从麻疯树中克隆的JcBD1 cDNA与CaMV 35S组成型启动子融合,构建植物表达载体pBI-JB,利用根癌农杆菌介导转入烟草。对获得抗性的植株用PCR、RT-PCR及Western杂交检测分析,同时测定转基因烟草植株的电导率、JcBD1酶活性及抗盐性等特性。【结果】由JcBD1 cDNA序列推测的JcBD1氨基酸序列与已知的BADH具有很高的同源性,包括BADH家族绝对保守区域十肽"VSMELGGKSP"和半胱氨酸残基。这两部分区...
[期刊] 华北农学报
[作者]
林世锋 任学良 王轶 王东茂 张拓 王仁刚
为从烟草中克隆到与植物抗逆相关的甜菜碱醛脱氢酶(EADH)基因,以枸杞BADH基因为探针,通过电子克隆的方法从烟草栽培品种K326中克隆到3个BADH基因(NtBADH1、NtBADH2、NtBADH3),并对其进行了序列分析。结果表明:3个BADH基因的cDNA序列均包含完整的开放读码框,分别编码504个氨基酸,具有醛脱氢酶家族高度保守的十肽(VTLELGGKSP)以及与酶功能有关的半胱氨酸残基(C)。烟草3个BADH与其他物种在蛋白质水平上表现较高的相似性,NtBADH1和NtBADH2在进化上与同科的番茄BADH蛋白距离较近,NtBADH3在进化上与同科的枸杞BADH蛋白距离较近。这些结...
关键词：
烟草 甜菜碱醛脱氢酶 基因克隆 序列分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
喻文娟 俞菊华 李红霞 李建林 唐永凯 于凡 何枫 傅纯洁
为探究脂酰辅酶A脱氢酶对脂肪酸β氧化的调控机制,使用RT-PCR在鲤鱼肝脏克隆了脂酰辅酶A脱氢酶家族中的MCAD和LCAD全长c DNA序列,阅读框分别为1 275,1 326 bp,编码424,441个氨基酸,分析表明他们均具备ACADs家族的特征序列:FAD结合位点、底物结合位点、催化位点等,与斑马鱼MCAD和LCAD的一致性分别为93.16%和94.56%。实时定量RT-PCR结果表明,MCAD和LCAD主要在肝脏和心脏表达;不同脂肪源对MCAD的表达没有明显影响,但鱼油对LCAD的表达有明显的刺激
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