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[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王秋竹 林丽华 董文轩
研究月季茎尖玻璃化法超低温保存技术,以期为月季茎尖超低温保存提供理论和实践依据。试验选用金奖章、粉玛雅、韩红、博共4个月季品种进行简单玻璃化法和玻璃化超低温保存试验。结果表明:简单玻璃化法保存时,不同品种的茎尖存活率差异显著,金奖章的茎尖存活率最高(55.3%);通过研究预培养、装载处理和植物玻璃化溶液PVS2脱水时间对粉玛雅茎尖存活率的影响,初步构建了月季茎尖玻璃化法超低温保存体系,即将长1.0cm的茎尖在含0.3mol·L-1蔗糖的培养基上预培养5~6d后,取1.5mm茎尖,室温下A液(MS+2mol·L-1甘油+0.4mol·L-1蔗糖)装载40min或B液[60%PVS2+40%(MS...
关键词：
月季 茎尖 超低温保存 玻璃化法 存活率
[期刊] 林业科学
[作者]
王越 刘燕
A procedure was studied on cryopreservation of Photinia serrulata shoot-tips in vitro by vitrification. The excised shoot-tips which were cultured for 30 d, 1.5～2.0 mm long, were loaded with 60% PVS_2 for 40 min at room temperature in effendoff tube, then were exposed to PVS_2 at 0 ℃ for 50 min. Fol...
关键词：
石楠 茎尖 玻璃化 超低温
[期刊] 西南农业学报
[作者]
傅翠娜 肖远辉 曾继吾 彭抒昂 易干军
以菠萝为试材,建立试管无性系,进行玻璃化法超低温保存及植株再生研究,结果表明,约2.0～3.0 cm的菠萝茎尖于含有0.5 mol/L蔗糖的培养基上预培养1～2 d,剥取含1～2片叶原基(1.0～2.5 mm长)的茎尖,室温(25℃)下用LS装载液预处理50min,再用PVS2溶液于0℃下处理40 min,换入新鲜的PVS2溶液后迅速投入液氮,保存24 h后在40℃水浴中迅速化冻90 s,用1.2 mol/L的蔗糖培养液洗涤2次,每次10 min,然后转入含0.3 mol/L蔗糖的MS培养基上,暗培养48 h后转入含BA 0.5 mg/L的MS培养基上,暗培养1周后转移到正常光下,4个菠萝品种...
关键词：
菠萝 茎尖 超低温保存 玻璃化法
[期刊] 西南农业学报
[作者]
周旭红 何艳 欧阳德爱 桂敏 李绅崇 曹桦 杨春梅 卢珍红 莫锡君
以香石竹"云恋蝶"离体茎尖为试材,研究玻璃化法对香石竹茎尖的离体超低温保存。通过正交设计试验对影响存活率的主要因素(预培养培养基中蔗糖浓度、预培养时间、装载时间和PVS2处理时间)进行分析,结果表明,预培养1 d,预培养基中蔗糖浓度为0.5 mol/L,装载40 min,PVS2液处理40 min,液氮处理1 d,在40℃水浴化冻后的香石竹茎尖,成活率达44.13%,且超低温再生苗与其常温苗的生理生化指标无显著差异。本试验成功地建立了香石竹种质资源玻璃化法超低温保存的技术,为香石竹种质资源的长期保存提供了一条有效途径。
关键词：
香石竹 茎尖 玻璃化法 超低温保存
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
张玲玲 任瑞芬 姜雪茹 周好 刘燕
【目的】为探究乙烯对PLBs超低温保存存活率的影响,以期为提高其存活率开拓思路。【方法】以春石斛‘红梦幻’类原球茎(PLBs)为材料,分别在其玻璃化超低温保存的预培养和装载阶段添加外源乙烯供体乙烯利和乙烯合成抑制剂硝酸钴,测定PLBs超低温保存过程中内源乙烯前体1-氨基环丙烷羧酸(ACC)含量、ACC氧化酶(ACO)活性及PLBs液氮保存后细胞存活率。【结果】结果显示:无论在预培养还是装载阶段,外源乙烯供体乙烯利处理后,超低温保存过程中PLBs内源ACC含量和ACO活性均显著提高,同时液氮保存后存活率也显著提高;在这两个阶段添加外源乙烯合成抑制剂硝酸钴后,超低温保存过程中PLBs内源ACC含量、ACO活性显著降低,液氮保存后存活率也显著降低。相关分析显示,PLBs液氮冻后存活率与其内源ACC含量和ACO活性呈极显著正相关。【结论】本研究表明,外源乙烯调节剂乙烯利和硝酸钴通过调节内源乙烯含量而对玻璃化超低温保存的春石斛类原球茎存活率产生显著影响。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
郭玉琼 赖钟雄 吕柳新
采用玻璃化法对荔枝胚性愈伤组织超低温保存及植株再生进行了初步探讨.将继代保存15 d的荔枝胚性愈伤组织转接到预培养基[MS+50 mL.L-1二甲基亚砜(DMSO)+1 mg.L-12,4-D+20 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂糖]中,在5℃低温下预培养.将预培养后的愈伤组织于常温下用体积分数为60%玻璃化溶液(2PVS2)装载20 min,再于0℃下用PVS2溶液平衡40 min;换新鲜的PVS2溶液,迅速投入液氮中保存.1周后取出,于40℃温水浴中化冻,弃PVS2,用1.2 mol.L-1蔗糖液+MS基本培养基的洗涤液洗涤3次,再接种到新鲜的培养基中恢复培养,恢复培养后的胚性愈伤组织...
[期刊] 水产学报
[作者]
章龙珍 鲁大椿 柳凌 郭峰 张洁明
泥鳅胚胎 (胚孔封闭期 )用 10 #玻璃化液作为低温保护剂 ,经低温 (- 196℃ )冷冻保存 17h后 ,38℃水浴解冻 ,解冻后的胚胎获得了成活。在稀释液B1、B2、B3中分别有 2 6 .7% ,15 .0 % ,3.0 %成活的胚胎。解冻后的胚孔封闭期胚胎经过 5 0h的培养 ,胚胎从胚孔封闭期发育至尾鳍出现期。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
刘燕 高荣孚 周晓阳
运用氯化铈 (CeCl3)沉淀的电镜细胞化学方法 ,研究了玻璃化超低温保存中拟南芥 (Arabidopsisthaliana)不同苗龄幼苗细胞ATPase活性变化及玻璃化保护处理对酶活性的影响 .种子萌发 48h形成的幼苗 (2d龄幼苗 )细胞膜ATPase活性反应强于种子萌发 72h形成的幼苗 (3d龄幼苗 ) ,但直接投入液氮 (LN2 )冻融后 ,2d及 3d龄幼苗的ATPase全部失活 .玻璃化技术保护处理后 ,2d及 3d龄幼苗ATPase活性有不同程度提高 .2d龄幼苗经玻璃化处理后ATPase活性明显提高 ,细胞膜ATPase在随之的LN2 冻融后仍保持了较高活性 ;3d龄幼苗经...
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵喜亭 王苗 邵换娟 李翔 李海兵 李明军
为了验证前期建立的包埋玻璃化超低温保存技术是山药(Dioscorea opposita)种质资源离体保存的一种有效的方法,对包埋玻璃化超低温保存后的山药再生植株的形态、生理和同工酶酶谱进行了研究。结果表明:与常温保存的植株相比,供试的铁棍山药再生植株的平均株高、叶片数、芽数和茎节长,叶片中叶绿素、可溶性蛋白和可溶性糖含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活力在绝对值上虽有差异,但均未达到显著水平,且能移栽成活,保持了形态和生理的稳定性;供试的铁棍、太谷、怀庆和嘉祥细长毛4种山药再生植株的SOD和蛋白水解酶的同工酶条带数目及强度均未发生变化,保持了酶蛋白的稳定性。说明前期建立的包埋玻璃化法超低温保存技...
关键词：
山药 超低温保存 包埋玻璃化法 稳定性
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
盛宏亚 万继花 徐川 王红清
以携带草莓斑驳病毒（Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ｍｏｔｔｌｅ ｖｉｒｕＳ）的‘红颜’草莓为材料，通过对玻璃化超低温脱毒技术中各程序的优化，建立适合‘红颜’草莓的茎尖玻璃化超低温脱毒体系。结果表明：１～２ｍｍ的茎尖在０．５ｍｏｌ／ｌ蔗糖的预培养基预培养３～７ｄ，室温装载处理６０ｍｉｎ，０℃玻璃化处理１８０ｍｉｎ，液氮冷冻６０ｍｉｎ，４０℃解冻２ｍｉｎ，高糖溶液卸载２０ｍｉｎ后接种到ｍＳ＋２．０ｍｇ／ｌ ６－ｂａ再生培养基上，成活率可达７０％以上。再生培养６０ｄ后，随机选取２０株再生植株，利用ｒｔ－ＰＣｒ技术检测草莓斑驳病毒的脱毒效果，脱毒率为１００％。利用该体系可以克服传统茎尖脱毒受茎尖大小的限制（０．．．
[期刊] 林业科学
[作者]
王贞 高健洲 刘燕
The shoot-tips of Euonymus fortunei cv.‘Yuanban’excised from healthy in vitro plants were successfully cryopreserved with the vitrification technique. After the shoot tips formed roots and were successfully transferred to soil of outside with the control plant. To study the adaptability to summer hi...
[期刊] 华北农学报
[作者]
吴永杰 赵艳华 周明德
苹果金冠品种的休眠茎尖经３种不同方法（玻璃化法、包埋－干燥法和两步降温法）超低温保存后，均获得成功，存活率达到了８３％。休眠茎尖由于经受了冬季的深冷驯化和具有较低的含水量，因而成为超低温保存的良好试材。经过玻璃化液（ＰＶＳ３：５０％甘油＋５０％蔗糖）预处理８０ｍｉｎ（２５℃条件下）后或经蔗糖溶液预培养并于无菌空气中干燥脱水至含水量３０％左右后，休眠茎尖可直接投入液氮进行超低温保存。保存后的休眠茎尖经离体培养后可直接再生植株。试验进一步验证了试材生理状态的选择是超低温保存成功的一个关键因素，这不仅可以简化超低温保存的程序，而且可以提高此方法的实用性，为早日建立植物种质的超低温保存库奠定了基础。
关键词：
苹果,休眠茎尖,超低温
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李青旺 于永生 江中良 王立强 胡建宏 常万存
采用一步法和二步法研究玻璃化冷冻保存的牛生发泡 (GV )期和体外成熟 (IVM)卵母细胞的发育潜力。结果表明 ,冷冻基础液 PBS和 TCM199在玻璃化冷冻中的效果差异不显著 (P>0 .0 5 ) ;冷冻程序和卵母细胞发育阶段对冷冻效果有明显影响 ,二步法冷冻效果显著优于一步法 (P
关键词：
牛 卵母细胞 玻璃化冷冻
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
程利红 段旭昌 张宗勤 孙宝胜
【目的】探索中国红豆杉种质资源的超低温保存技术,为红豆杉种质资源的开发利用提供支持。【方法】采用多重单因素试验法,将中国红豆杉种子前处理后,采用9种不同的冷冻保护剂处理,之后分别进行0℃冷浴静置、25℃室温0.6MPa抽真空和冰浴250W超声波处理,处理时间分别为0,5,10和15min;然后按照4种不同的冷冻方式投入液氮中冷冻保存,保存结束后分别采用37℃水浴快速、20℃流动自来水、5℃慢速和25℃室温静置进行解冻,最后探讨了在较优的3种冷冻保护剂条件下保存时间对红豆杉种子活力的影响。以氯化三苯基四氮唑(TTC)还原法测定冷冻保存后种子的活力。【结果】冷冻保护剂、保护剂处理方式和处理时间、冷...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
陈晓艺 江帅菲 代剑峰 袁德水 Lisheng Kong 张金凤 赵健
【目的】超低温保存是植物优良种质长期保存的重要方法。本文为探究梯度预处理对超低温保存存活率的影响,以期有效保存华北落叶松胚性组织的发育潜能。【方法】本研究以华北落叶松胚性组织为材料,对超低温冷冻保存程序中预培养、冷冻处理方式、解冻方式和恢复培养等关键环节开展研究。预培养和冷冻保护共设计成4种处理,以不经过预培养和冷冻保护直接冷冻保存为对照,每个处理重复3次。【结果】结果表明:处理组合1、2、3之间虽无显著差异,但结合冷冻保护剂二甲基亚砜(DMSO)对细胞具有一定毒害作用,高浓度的DMSO会影响后续胚性组织的恢复甚至造成细胞死亡,因此选出效果较好的超低温保存方法为:0.2、0.4 mol/L山梨醇液体梯度预处理与0.4 mol/L山梨醇+5%DMSO为冷冻保护剂进行冷冻保护,最佳解冻方式为37℃水浴,解冻后的胚性愈伤组织细胞活性最高达78%;超低温保存后的胚性组织与正常增殖的胚性组织在外观及显微结构上无明显差异,且低温保存后的愈伤组织仍保持分化形成体细胞胚的能力。【结论】研究结果为华北落叶松乃至其他针叶树胚性组织的超低温保存提供了参考。
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