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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张雯雯 喻伟峰 张宇飞 许伟鹤 张鑫宇 王涛 尹绍武 张凯
【目的】明确暗纹东方鲀(Takifugu fasciatus)5-羟色胺受体4(5-hydroxytryptamine receptor 4,HTR4)的分子结构、表达特征和功能,并探究HTR4基因SNP位点与暗纹东方鲀生长的相关性。【方法】采用分段克隆方法,分别扩增HTR4基因的3'RACE、5'RACE以及中间保守区域,将其拼接后获得暗纹东方鲀HTR4基因c DNA全长序列,对其进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR技术,分析HTR4基因在暗纹东方鲀脑、肾脏、肝脏、脾脏、心脏、卵巢、中肠、鳃、皮肤和肌肉等10种组织中的分布,以及其在卵巢5个不同发育时期(Ⅰ～Ⅴ期)的脑、肾脏、肝脏、脾脏、心脏、中肠、鳃和肌肉等8种组织中的表达模式;利用Sanger测序法,筛查HTR4编码区生长性状相关的SNP位点。【结果】暗纹东方鲀HTR4 c DNA全长2 302 bp,开放阅读框长度为1 170 bp,共编码389个氨基酸,包含5个外显子;氨基酸序列比对及系统进化树分析结果显示,暗纹东方鲀与红鳍东方鲀HTR4的一致性最高(99.53%),亲缘关系最近;三维结构预测显示,HTR4蛋白在鱼类中较为保守。荧光定量PCR结果表明,HTR4基因在暗纹东方鲀10个不同组织中均有表达,其中在脑组织表达量最高,其次是中肠,肌肉组织表达量最低;HTR4基因在卵巢5个不同发育时期的8个不同组织中均有表达,其中在卵巢发育的Ⅳ时期表达量最高。SNP位点筛查结果表明,暗纹东方鲀HTR4基因第4外显子1 202 bp处存在1个同义突变SNP位点(c.1202 C>G),关联分析表明该位点与暗纹东方鲀肥满度性状显著相关(P<0.05),其中CC基因型个体肥满度较高。【结论】HTR4基因在暗纹东方鲀生长发育中发挥了重要作用,可作为优良候选基因,在一定程度上可为暗纹东方鲀生长性状新品种的选育提供分子标记。
[期刊] 海洋渔业
[作者]
马思思 喻伟峰 张凯 张雯雯 唐晓东 刘雨曦 尹绍武 王涛
为探究暗纹东方鲀(Takifugu fasciatus)TGF-β1基因与其生长性状的关联及作用，本研究采用RACE技术克隆了暗纹东方鲀TGF-β1基因，分析了其基因结构与表达特征，并通过直接PCR扩增法对TGF-β1基因进行多片段比对，在此基础上筛选出与生长性状相关的SNP位点。研究发现TGF-β1基因cDNA全长共2217 bp，包含5’UTR 51 bp，3’UTR 1014 bp，ORF 1152 bp，编码383个氨基酸。氨基酸序列比对分析表明暗纹东方鲀TGF-β1基因与红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)同源性最高(92.82%)。进化树分析表明暗纹东方鲀TGF-β1基因编码氨基酸序列与红鳍东方鲀聚为一支，与鲈形目鱼类亲缘关系最近(68.46%～73.33%)。qRT-PCR检测显示TGF-β1基因在暗纹东方鲀8种不同组织(心脏、肝脏、脑、脾脏、肾脏、肌肉、中肠和鳃)都有表达，其中肾脏表达量最高，心脏和脾脏表达量次之。通过SNP位点不同基因型与个体生长性状的相关性分析，发现TGF-β1上的SNP g. 3908 C＞A位点与暗纹东方鲀多项生长性状有关，其中CC型是优势基因型，且CC型个体体宽、肥满度较高。研究结果证实了TGF-β1基因与暗纹东方鲀生长性状有一定的相关性，有望为暗纹东方鲀分子标记辅助育种提供基础资料。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
金武 闻海波 杜兴伟 马学艳 顾若波 徐跑
利用传统ＰＣＲ和ＡＢＩ ３７３０测序技术对暗纹东方鲀（ＴＡｋＩｆｕｇｕ ｏＢｓＣｕＲｕｓ）ＡｍｈＲ２基因外显子９进行了ｓＮＰ７２７１检测和测序分析，并对该ｓＮＰ位点与暗纹东方鲀性别相关性进行了研究。结果显示，在ｓＮＰ７２７１位点发生了ｇ／Ｃ碱基突变，产生了Ｃｇ、ＣＣ两种基因型。ｓＮＰ７２７１和暗纹东方鲀性别存在显著相关性（Ｐ＜０．０１）。基因型为Ｃｇ的个体生理性别为雄性，基因型ＣＣ的个体生理性别为雌性。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘福平 白俊杰 叶星 李胜杰 李小慧 于凌云
黑素皮质素受体-4(Melanocortin receptor-4,MC4R)是5种已发现的黑素皮质素受体家族成员之一,属于跨膜G-蛋白耦联受体超级家族,对于调节动物的采食量、体质量及能量稳态有着重要的作用。本研究采用基因组步移技术获得了尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)MC4R基因组DNA序列。该基因全长2547bp,其中5′侧翼序列长为1481bp,3′侧翼序列长为82bp,编码区序列长为984bp,只有1个外显子。采用PCR产物直接测序法、PCR-RFLP和CRS-PCR技术对尼罗罗非鱼MC4R基因启动子和外显子区域进行了SNPs位点的检测和分型,结果共检测到5个S...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
王婧 王润 林梦娇 王亚宁 鲍宝龙 龚小玲
为了探究暗纹东方鲀（Takifuguobscurus）组织内TTX含量与含毒组织电压门控钠离子通道基因表达特征。分别采用酶联免疫法（ELISA）测定暗纹东方鲀肝脏、心脏等8个组织TTX含量，实时荧光定量(RT-qPCR)方法检测电压门控钠离子通道α亚基基因家族成员scn1aa，scn1ab，scn4aa，scn4ab，scn5aa，scn5ab，scn8aa，scn8ab（以下简称“电压门控钠离子通道基因”）在各组织中的相对表达特征。结果显示：各组织中TTX含量由高到低为脑(9.521±2.816μg/g)、心脏(4.271±1.129μg/g)、鳃(1.586±0.527μg/g)、肌肉(1.494±0.938μg/g)、肝脏(0.913±0.206μg/g)、皮肤(0.902±0.235μg/g)、肠道(0.894±0.215μg/g)和眼(0.864±0.287μg/g)，脑、心脏组织为弱毒性，肝脏、皮肤、肌肉、眼、肠道、鳃组织为微毒性。RT-qPCR结果显示scn1aa、scn1ab、scn4ab、scn5aa、scn8aa、scn8ab基因均在肝脏组织的相对表达量最高，scn4aa基因仅在肌肉组织表达，皮肤组织仅有scn4ab基因表达，且scn4ab基因在所有检测组织种均有表达，表达具有广泛性。钠离子通道基因在斑马鱼和暗纹东方鲀组织表达特征存在差异。scn4ab基因可能在东方鲀属鱼类耐受TTX分子基础中发挥重要作用。
[期刊] 水产学报
[作者]
高晓艳 董迎辉 施沈佳 姚韩韩 阮文斌 赵家熙 林志华
为探索贝类GRB2基因的结构、功能特征,以及在贝类生长发育过程中的作用,实验通过已构建的文蛤转录组文库,利用SMART RACE技术扩增得到了文蛤GRB2基因的c DNA全长序列,对其生物信息学、组织及发育阶段表达特征进行了分析,并利用直接测序方法在外显子中筛选SNP位点。结果显示,GRB2基因c DNA全长1 791 bp,开放阅读框669 bp,编码223个氨基酸,蛋白由SH-SH2-SH3 3个结构域组成;氨基酸序列比对发现,文蛤G RB2与泥蚶的同源性最高,达到65.6%,与脊椎动物的同源性都在60%以上,说明GRB2基因在进化过程中比较保守。荧光实时定量PCR(qRT-PCR)结果表...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张德宁 吕建建 刘萍 冯艳艳 高保全 李健
为了发掘三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)与生长相关的SNP,本研究基于三疣梭子蟹比较转录组学数据,筛选出生长相关候选基因片段19条,利用该基因序列设计引物进行PCR扩增,得到总长为17 387 bp的DNA片段;通过直接测序法发现74个SNP位点,分布频率为0.43/100 bp,其中转换突变的比例为80%,颠换突变的比例为20%,转换的比例远远大于颠换,符合"transition bias"原理。C/T(G/A)突变所占比例为60%,G/T(C/A)突变占20%,A/T突变占9.33%,G/C突变占10.67%,C/T(G/A)突变所占比例最大。内含子上突变发生...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘德武 杜颖军 张豪 吴珍芳 张细权 杨关福
根据猪Leptin基因的已知序列设计引物(序列号:U66254、AF026976),PCR扩增产物用变性高效液相色谱技术(DHPLC)和直接测序法进行单核苷酸多态性(SNP)筛查,对其中的4个SNP位点(C3469T、C3952G、C4115T和C4227T)进行基因型与生长性状的关联分析。结果共获得35个多态位点,其中C4115T和C4227T位点在长蓝F2资源群中分别缺少1个基因型,且与各性状相关不显著;C3469T位点与猪的平均日增重存在极显著相关(P<0.01),TT型和CC型显著高于TC型;C3952G位点与猪的体长和眼肌面积等存在一定相关(P<0.1)。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
程长洪 张敏莹 徐东坡 刘凯 段金荣 周彦锋 施炜纲
采用10对暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)和16对红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)微卫星引物对4个暗纹东方鲀群体(1个长江常熟江段捕捞群体,1个江苏扬中放流群体和2个养殖群体)的遗传多样性进行分析。结果显示,20个微卫星位点能成功扩增出片段并且具有一定的多态性,在4个群体中共检测到113个等位基因。每个群体的平均等位基因数为4.95～5.50,平均观测杂合度为0.686 7～0.761 7,平均期望杂合度为0.653 0～0.700 0,平均多态信息含量为0.601 3～0.638 4。各个群体都有一些微卫星位点偏离Hardy-Wein-berg平衡(P<0.0...
[期刊] 水产学报
[作者]
华元渝 李廷友 邹宏海
观测养殖型暗纹东方鲀,获得4个年龄组的生长数据和解剖资料。拟合出雌、雄的体长体重关系和生长方程,分析其肥满度、胸腹围特点以及性腺和肝脏发育特点。结果显示,养殖型暗纹东方鲀雌雄体长生长规律相似;但体重在2.5龄前雄鱼生长速度大于雌鱼,2.5龄后则相反。养殖暗纹东方鲀体型比野生暗纹东方鲀肥胖,体重/体长和肥满度皆大于野生型。研究还发现,养殖暗纹东方鲀性腺发育不良和肝脏脂肪变性发生率高,且两者的发生存在一定关系,致使全人工育成的成鱼繁殖难以成功。
[期刊] 水产学报
[作者]
周瑞 李若男 周丽莎 邱婷婷 王静玉 谭啸 陈舜胜
为增加暗纹东方鲀附加值，考察不同处理方法对提取暗纹东方鲀鱼皮胶原蛋白的影响，本研究以暗纹东方鲀鱼皮为研究对象，通过热水法、酸法和胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶处理鱼皮提取 胶原蛋白。通过对不同胶原蛋白的提取率、氨基酸组成、傅里叶红外光谱（FTIR）、紫外光谱(UV)、扫描电镜、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的研究，对暗纹东方鲀鱼皮胶原蛋白特性进行表征和比较。结果显示，用胃蛋白酶得到的胶原蛋白提取率最高；氨基酸组成相似但含量不同；3种酶制备的胶原蛋白中脯氨酸含量显著低于酸和热水制备的胶原蛋白；FTIR扫描结果表明，5种处理方法得到的胶原蛋白都存在Amide A、Amide B、Amide Ⅰ、Amide Ⅱ和Ⅲ，均保持了胶原蛋白三螺旋结构；紫外光谱显示在235 nm左右有强吸收峰，结合FTIR确定其为典型的胶原蛋白，经过SDS-PAGE分析确定暗纹东方鲀皮中的胶原蛋白为Ⅰ型胶原蛋白，酸法和胃蛋白酶较好的保留了蛋白结构，木瓜蛋白酶作用化学键广泛，得到小分子量的胶原蛋白分子；扫描电镜结果显示，酸法提取的胶原蛋白最适合应用在生物医学材料上运载药物。由此可见，不同处理方法提取的胶原蛋白理化特性存在一定差异，不同的酶制备胶原蛋白分子量分布会产生明显差别，可根据研究需要选用不同处理方法开发胶原蛋白产品。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
邵爱华 朱江 陈葵 史全良
以暗纹东方鲀(Takifugu fasciatus)肝脏的线粒体DNA为模板,按照红鳍东方豚(Takifugu rubripes)线粒体DNA序列设计合成特异引物进行PCR扩增,克隆并测定线粒体细胞色素b(Cyt b)及其侧翼tRNA基因的全序列,结果显示,克隆的暗纹东方Cyt b基因(1 137 bp)及其5′端上游的tRNAGlu基因和3′端下游的tRNAThr基因序列共1 327 bp。用DNA分析软件对暗纹东方与GenBank中10个目13种鱼类的Cyt b序列进行比较分析,显示暗纹东方与这些鱼类的Cyt b基因具有较高的同源性,与同属红鳍东方的同源性最高,为96.1%;与同目不同科的...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
魏平平 李鑫 张俊鹏 费凡 马贺 高东奎 宋昌斌 陈涛 刘鹰
设置4种LED光谱环境,分别为蓝(λ450 nm)、绿(λ525 nm)、黄(λ590 nm)和白(λ400～780n m),水温控制在(22±1)℃,光周期为16L:8D,光强设为200 mW/m2。研究光谱对红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)受精卵孵化和孵化后1～18 d (即实验第6～23天)仔稚鱼形态性状(全长、体长、躯干长、尾长、头长、眼径和体高)以及生长相关基因,包括生长激素(GH)、生长激素受体1型(GHR1)、类胰岛素生长因子1型(IGF1)基因相对表达量的影响。结果显示,蓝、绿、黄光处理组的受精卵比白光处理组早2 d孵化;在实验结束时,蓝光处理组中,仔稚鱼的全长、体长、躯干长和尾长生长最快,黄光处理组中,头长、眼径和体高生长最快。对于生长相关基因,蓝光下的GH基因表达量显著高于黄、白光组(P<0.05),但与绿光组无显著性差异;不同光谱下,GHR1、IGF1基因的表达量无显著性差异。结果表明,蓝光、绿光和黄光促进红鳍东方鲀受精卵的孵化,蓝光有利于红鳍东方鲀仔稚鱼的生长发育。本文研究了不同光谱对红鳍东方鲀仔稚鱼早期发育的形态性状及生长相关基因表达的影响,为养殖厂对红鳍东方鲀育苗提供科学的参考依据。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
华元渝 顾志峰 周昕 邹宏海 石黎军 李勤 吴剑峰 秦桂祥 朱永祥
在 1 994～ 2 0 0 1年间 ,进行了暗纹东方鱼屯全人工繁殖→苗种培育→商品鱼养殖全过程的控毒技术研究。在养殖全过程中 ,通过运行生态型再生式水循环养鱼系统来改善水体生态环境 ,通过投喂自繁淡水轮虫和自制无毒配合饲料等措施 ,从食物链环节控制河鱼屯毒素TTX的来源 ,达到控毒的目的。经控毒的家化暗纹东方鱼屯亲本 ,采用高效液相色谱仪和荧光分光光度计联合法随机抽样检验 ,结果表明 :其体内四种组织器官的TTX平均含量低于 2 μg/g,属基本无毒
关键词：
暗纹东方鱼屯 控毒技术 循环水系统 轮虫
[期刊] 淡水渔业
[作者]
林玉坤
平均体长 3cm的暗纹东方苗种 ,经过 18个月养殖 ,出池规格 5 0 8～ 5 76 g/尾 ,平均单产 12 4 17～16 6 17kg/hm2 ,成活率 80 0 0 %～ 85 70 % ,饵料系数 2 6 5～ 3 12 ,为生产单位推广暗纹东方养殖提供了技术参考。
关键词：
暗纹东方鲀 池塘 养殖 试验
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