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[期刊] 西南农业学报
[作者]
曹领改 刘杰 张洁 张盼 余世洲
【目的】探明普通烟草β-半乳糖苷酶基因NtBGAL的表达模式与蛋白特征，为后期创制烟草多用途利用的底盘材料提供依据。【方法】通过比对普通烟草K326的基因序列与本氏烟草NbBGAL1基因的同源性，以K326的cDNA为模板经PCR技术克隆获得NtBGAL基因，随后利用生信工具软件分析其基因结构及蛋白理化性质，并采用qRT-PCR检测该基因在烟草不同组织部位（根、茎、叶和花）的表达模式，最后开展了原核诱导表达、蛋白纯化及蛋白表征研究。【结果】克隆获得烟草NtBGAL基因，其与本氏烟草NbBGAL1基因同源性最高，二者具有相同的结构域（Motif）；该基因定位于9号染色体上，含有18个内含子，mRNA长度为6 649 bp，CDS长度为2 541 bp，编码846个氨基酸，翻译的β-半乳糖苷酶属于GH35家族，NtBGAL蛋白的分子量为92.44 kDa，理论等电点（pI）为6.8，GRAVY为－0.222，定位于细胞壁。该基因在普通烟草不同组织部位的表达量为花＞叶＞茎＞根，差异显著。在37 ℃下进行原核诱导，NtBGAL蛋白有明显表达；采用包涵体纯化方法获得较高纯度的NtBGAL蛋白。NtBGAL蛋白酶促反应最适温度为30～40 ℃，最适pH为4.0～6.5，Mn~(2＋)浓度为0.05～0.15 mmol/L时对NtBGAL酶活性有增强作用。【结论】研究明确了NtBGAL基因的组织表达模式及蛋白表征，为进一步通过改造NtBGAL基因，利用普通烟草生产人源化糖蛋白奠定了基础。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
龚月生 刘锦妮 王晶 杨明明 袁新宇
【目的】研究耐热β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达,并检测其酶学性质,为耐热β-半乳糖苷酶的应用和工业化生产奠定基础。【方法】利用基因工程的原理和方法,将来源于嗜热脂肪芽孢杆菌的耐热β-半乳糖苷酶基因(bgaB)克隆到大肠杆菌pET表达系统(pET-28a(+)),并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。将构建的重组菌(pET28a-bgaB)在含硫酸卡那霉素的液体LB培养基中以IPTG为诱导剂,对表达产物的最适反应温度、最适反应时间I、PTG诱导浓度、热稳定性及酶促动力学进行检测。【结果】成功构建了表达载体pET28a-bgaB,并测得耐热β-半乳糖苷酶的最适反应温度为65℃,最适反应时...
关键词：
β-半乳糖苷酶基因 大肠杆菌 酶学性质
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
唐香山 张学文 章怀云 周双德
用 PCR 方法从酿酒酵母 AH109 中扩增出 α-半乳糖苷酶 MEL1 基因片段,与乙醇脱氢酶组成型启动子重组后构建成表达重组质粒 pGAD-GAL.将重组质粒 pGAD-GAL 转化不带 α-半乳糖苷酶基因的酿酒酵母后,在预先涂布有 X-α-Gal 的亮氨酸缺陷培养基(SD/-Leu)平板上选择到蓝色菌落.实现了 α-半乳糖苷酶在酵母内的组成型表达.
关键词：
酿酒酵母 α-半乳糖苷酶 组成型表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
冯睿杰 侯丽霞 郭扬 马倩 刘新
为了研究葡萄肌醇半乳糖苷合成酶基因家族的特性,以抗低温品种左优红组培苗为材料,通过同源克隆技术,获得VvGolS2、VvGolS3和VvGolS4全长CDS,对其序列进行了生物信息学分析,同时利用实时定量PCR技术探究了3个基因的组织表达特性和响应逆境因子及相关信号分子的特性。结果显示:3个基因c DNA大小分别为954,978,1 011 bp,分别编码317,325,336个氨基酸序列;3个蛋白分子量分别为36.65,36.97,38.12 k Da;等电点分别为5.12,5.33和5.16,且均在C
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
周晶辉 胡超 刘晓柱 彭珍子 张学文
从湘西富含豆粕下脚料土壤中筛选鉴定出1株产α-半乳糖苷酶细菌,对其进行显微形态观察、分子生物学鉴定及酶学特性分析。结果表明,该细菌为球形细菌,革兰氏染色阳性,16S rDNA序列与乳球菌有98%的同源性,可以确定为乳球菌属。细菌产分泌性α-半乳糖苷酶,其胞外α-半乳糖苷酶摇瓶发酵液初酶活为6.21 U/mL,在45℃、pH 5.5时该酶活性表现为最大值。酶的表达受D-棉籽糖的诱导和葡萄糖的抑制,当D-棉籽糖的浓度为30μmol/mL时诱导效果最佳,当葡萄糖浓度为30μmol/mL时对该酶的合成有较明显的抑制作用,表现为糖代谢操纵元的典型调控方式。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
任锡亮 李英 侯喜林 王枫
采用RT-PCR、巢式PCR、3′RACE和5′RACE技术,获得了不结球白菜L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶(GLDH)基因cDNA2 034 bp全长序列。以苏州青为材料,进行光及黑暗对照处理,观察GLDH活性和L-抗坏血酸含量的日变化规律。结果表明:随着光照时数的增加,不结球白菜L-抗坏血酸水平和GLDH活性升高,而在持续黑暗条件下植株的L-抗坏血酸含量和GLDH活性没有发现这种日变化,表明GLDH活性可能受光诱导调控。
[期刊] 华北农学报
[作者]
林世锋 安雪琴 杨承 王仁刚 任学良 赵杰宏 付强
为了研究多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)在烟草中的生物学功能,运用生物信息学方法,结合RT-PCR和SMART RACE技术,从烟草中克隆到2个多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因c DNA和DNA全长序列,分别命名为Nt PGIP1(Gen Bank登录号:KF317203)和Nt PGIP2(Gen Bank登录号:KF317204)。Nt PGIP1基因全长为1 413 bp,编码338个氨基酸;Nt PGIP2基因全长为1 185 bp,编码329个氨基酸;两基因均没有内含子序列,核苷酸序列有50%的一致性,编码的氨基酸序列有54%的一致性。两基因编码蛋白均含有植物PGIP蛋白...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵艳琴 吴元华 赵秀香 陈建光 伏颖 安梦楠
【目的】内切多聚半乳糖醛酸酶(endo polygalacturonases,endoPGs)是重要的致病因子之一。论文从烟草靶斑病菌(Rhizoctonia solani)强致病力菌株YC-9和弱致病菌株LF-2中克隆该致病基因,分析比较该基因的序列特征、进化关系和表达特性,研究其在与烟草互作过程的致病作用。【方法】通过比较GenBank中不同植物病原真菌的endoPGs序列设计简并引物,首先获得菌株YC-9及LF-2的endoPGs基因片段,再采用RACE技术克隆获得其cDNA全长序列;生物信息学分析比较其保守结构域及序列特征;采用MEGA 4.0软件构建endoPGs的系统进化树;通过r...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
潘宝海 李德发 陆文清 代建国
旨在建立一种适合于测定饲用α-半乳糖苷酶活力的检测方法。实验利用对硝基酚 -α- D-吡喃半乳糖(p- NPG)作为酶反应底物 ,通过 4 0 0 nm比色检测酶反应所释放的对硝基酚的量来测定饲用酶制剂中 α-半乳糖苷酶的活性。研究表明 ,反应液中所含的对硝基酚的量大于 15 μmol.m L-1时 ,吸光值超过仪器的检测范围 ;酶制剂稀释倍数对对硝基酚比色法的影响较小 ,本底占总酶活的 10 %～ 16 % ,当酶稀释 10 0倍时 ,本底对酶活的影响最小 ;在测定酶活反应时间为 6 min时 ,已经有约 10 %的对硝基酚 - α- D-吡喃半乳糖水解 ,当酶液的酶活在 2 .0 U.m ...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王春林 李淑兰 陆文清 谯仕彦
探讨饲用α-半乳糖苷酶固态发酵的生产条件,对培养基中的关键组分碳源、氮源进行了优化筛选,选择豆粕、甜菜渣、硫酸铵和磷酸氢二钾4种底物原料作为4个主要因素,每个因素设3个不同的质量分数水平,按正交设计表L9(34)安排试验。极差分析结果表明,因素水平依次为16%、4%、2%和2%时,培养基中酶比活性达到172 U/g以上。随后选择豆粕、甜菜渣和磷酸氢二钾三因素水平进行响应面分析试验,结果显示,当培养基中豆粕的质量分数为19.20%,甜菜渣为3.89%,磷酸氢二钾为2.92%时,α-半乳糖苷酶理论比活性值最高(为174.98 U/g)。实验证明该优化条件下的最终酶比活性达到170 U/g以上。优化...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
宋春雷 闫巧娟 江正强 李一男 唐荦
从土壤中筛选得到1株高产β-半乳糖苷酶的凝结芽孢杆菌,研究该菌产β-半乳糖苷酶的发酵条件。结果表明:产酶适宜的培养基配方为蔗糖10 g/L,麦芽糖5 g/L,可溶性淀粉5 g/L,酵母提取物6.7 g/L,胰蛋白胨13.3 g/L,KCl 1.5 g/L;产酶的最适发酵温度为45℃。培养48 h总酶活力达到7.1 U/mL,60 h胞外酶活力最高为3.0 U/mL。胞外酶的最适pH为6.0,最适温度65℃。该酶能够完全水解乳糖,可适用于无乳糖乳制品的生产。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈寿松 邓慧莉 何水平 周子维 邓婷婷 孙云 赖钟雄
研究水仙和肉桂2种武夷岩茶加工过程中糖苷类香气前体物质的变化以及β-樱草糖苷酶和β-葡萄糖苷酶基因表达的差异性.结果表明:肉桂香气前体物质总量是水仙的0.801.93倍,香气前体物质总量变化具有差异性;水仙β-樱草糖苷酶基因平均相对表达量(1.10)低于β-葡萄糖苷酶基因(1.90),晒青过程中β-樱草糖苷酶和β-葡萄糖苷酶基因的相对表达量显著高于鲜叶,做青过程中的变化未达到显著水平;肉桂β-樱草糖苷酶基因的平均相对表达量(0.54)低于β-葡萄糖苷酶基因(0.76),晒青过程中β-樱草糖苷酶和β-葡萄糖
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
岳成鹤 曹随忠 李西睿 冯冲 龙川 余树民 储明星 潘登科
【目的】筛选α-1,3半乳糖苷转移酶(α1,3galactosyl transferase,GGTA1)基因缺失的猪成纤维细胞。【方法】用同源重组载体pBS-GGTA1-SKO和pBS-GGTA1-DKO电转染GGTA1单等位基因敲除(GGTA1+/-)的五指山小型猪胎儿成纤维细胞,利用磁激活细胞分选(MACS)、MACS联合流式细胞术(FACS)、TcdA联合FACS等3种方法进行细胞筛选;对MACS筛选获得的单细胞克隆进行PCR和FACS鉴定,对MACS联合FACS、TcdA联合FACS获得的细胞集落进行PCR鉴定。【结果】经MACS筛选获得了11个细胞克隆,经鉴定2个是GGTA1-/-细...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
俞乐 刘拥海 彭新湘
应用RT-PCR技术从水稻叶片中克隆了水稻L-半乳糖内酯脱氢酶(GLDH)的全长基因.序列分析表明,水稻GLDH基因全长1752bp,亚克隆其部分成熟蛋白编码基因(789bp),利用基因重组技术构建了E.coli/pET30a-GLDHe,经酶切鉴定,DNA测序,证实重组质粒构建正确;将重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析证实表达出相对分子质量约为36000的蛋白.用原核表达蛋白作为抗原免疫家兔制备抗体,用Westernblot检测抗体的特异性及效价,结果表明,抗体血清效价为1∶1000,在加IPTG诱导后的菌液中可以检测到相应的蛋白条带((相对分子质量为...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李远华 江昌俊 余有本
采用原位杂交技术对茶树β葡萄糖苷酶基因mRNA的表达进行了研究。结果表明,β葡萄糖苷酶基因mRNA主要在茶树叶片栅栏组织、叶主脉的薄壁组织表达;不同品种之间的表达位置基本相似,但表达信号却有差异,以龙井43号最强,福鼎大白茶、槠叶齐次之,而大叶乌龙、迎霜最弱。结果还显示,不同季节的表达信号以春梢最强,秋梢次之,夏梢最弱。
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