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[期刊] 海洋水产研究
[作者]
沙珍霞 陈松林 刘洋 徐美瑜 叶寒青
以鱼类胚胎细胞和胚胎干细胞为核供体进行细胞移植构建鱼类嵌合体研究方面,现有的成功报道均采用显微注射方法;在转基因海水鱼类研究中,显微注射也是最为常用的技术,本实验室在花鲈胚胎干细胞嵌合体构建和外源基因向花鲈胚胎的转移研究中取得的结果也充分证实,显微注射技术是开展海水鱼类细胞移植和转基因研究的首选技术。
关键词：
显微注射 细胞移植 转基因 鱼类
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张秋婷 苗向阳 安铁洙
【目的】通过重组逆转录病毒体内感染源于第X期胚盘细胞的方法获得嵌合体鸡。【方法】将扩增的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的开放阅读框插入逆转录病毒表达载体pour-pBabe中获得重组逆转录表达载体;采用磷酸钙转染法将其与包装载体pVSVG共转入29310A1包装细胞中进行病毒包装,得到病毒原液经超速离心浓缩200倍后注入种蛋(第X期)胚盘下腔,孵化种蛋。提取孵化5.5天的鸡胚基因组DNA,进行PCR检测和Southern杂交检测。【结果】构建含EGFP完整开放阅读框的逆转录病毒表达载体pour-pBabe-EGFP,提取孵化5.5d鸡胚基因组DNA,经PCR、Southern杂交检测,嵌合...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李建许 陈杰 蔡亚飞 刘健 徐世永 刘红林
试验Ⅰ:以狼山鸡为供体,AA肉鸡为受体,通过赤道开窗法制作了狼山鸡-AA肉鸡的嵌合体。共操作了108枚鸡蛋,孵化成活19只,孵化成活率17.6%。获得表型嵌合体鸡胚22枚,其中15只孵化成活,嵌合体率为13.9%。对2只嵌合体公鸡解剖发现,有1只的睾丸发育异常。PCR扩增禽类W染色体特异性的重复序列发现,2只嵌合体公鸡的性腺都嵌合了供体异性的细胞。结果表明所采用的嵌合体制作方法制备转基因鸡是可行的。试验Ⅱ:利用脂质体介导法,在体外将外源pEGFP质粒转入到鸡X期胚胎细胞中,培养8 h开始有外源基因的表达,体外培养12 h后获得了21.43%的转染效率。将转染后的鸡胚盘细胞移入到受体AA肉鸡的胚...
关键词：
胚盘细胞 嵌合体 转基因 狼山鸡
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
史洪才 玛依拉 黄俊成 刘明军 李建华 郭志勤
研究了移植方法和培养液对显微注射法生产转基因小鼠的影响。结果表明 ,小鼠受精卵显微注射外源基因后 ,进行单、双侧输卵管移植 ,受体的妊娠率分别为 34.4 %和 37.5 % (P>0 .0 5 ) ,差异不显著 ;但仔鼠成活率分别为 83.6 %和 97.2 % (P
关键词：
显微注射 转基因小鼠 受精卵移植
[期刊] 中国水产科学
[作者]
时瀚 孙谧 于建生 王跃军
以取自中国黄海的22种鱼类为研究对象,测定其鱼肉组织上清液的酶解物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制作用。从6种商业用酶和1种新型海洋低温碱性蛋白酶(MLAP)中,筛选出MLAP作为酶解制备ACEI的理想水解酶。以该酶水解上述22种海水鱼鱼肉组织上清液,并将水解液经Sephadex G-25凝胶层析和DEAE Sepharose阴离子交换层析,得到ACEI纯品。测定各类ACEI体外抑制ACE的活性发现,这22种海水鱼中以鱼(Engraulis japonicus)所产A-CEI活性最高,其余鱼类无显著差异。以鱼制备血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI-22),并对ACEI-22作进一步研究,结果发...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
蒿彩菊 杨鸣琦 朱小飞 帅学宏 乔海
配制了明矾注射液,采用滴定法测定了明矾注射液中明矾和葡萄糖的含量,并选择了最适pH,同时测定了制剂的稳定性。结果表明,明矾注射液制剂配制方法简单,样品中明矾和葡萄糖标示量分别为98.93%～100.12%,98.60%～100.21%,注射液的pH值应维持在3.0～4.5,有效期可暂定为2年,性质稳定,适合大批量生产。
关键词：
明矾 注射液 稳定性 制备
[期刊] 林业科学
[作者]
宋金耀 何文林 李松波 刘永军 孙艳军
对自宁晋县获得的毛白杨嵌合体扦插生根过程的动态跟踪分析表明 ,嵌合体过氧化物酶活性在扦插初期呈上升趋势 ,第 5d升至高峰 ,之后下降 ,第 7d至低谷 ,第 17d又出现一高峰 ,而毛白杨没有此规律 ,并且前期与此恰好相反 ;酚类、黄酮类物质与过氧化物酶活性变化相似 ,也有两个高峰 ,毛白杨中变化与嵌合体相反 ,且含量高于嵌合体 ;吲哚乙酸氧化酶活性变化规律与过氧化物酶刚好相反。试验证明嵌合体易生根与过氧化物酶活性、吲哚乙酸氧化酶活性及酚类、黄酮类含量密切相关 ,是协同作用的综合结果 ,而毛白杨不易生根也恰是不能满足这些要求
关键词：
毛白杨 嵌合体 生根机制
[期刊] 海洋渔业
[作者]
刘云 王际英 李宝山 乔洪金
微量元素作为海水鱼类生长发育和繁殖重要的营养物质,近年来受到越来越多水生动物营养与饲料方向科研工作者的关注。在这个背景下,本文简述了部分微量元素的生理功能、吸收机理,综述了牙鲆(Paralichthys olivaceus)、大菱鲆(Scophthalmus maximus)、大黄鱼(Larimichthys croceus)、石斑鱼属鱼类(Epinephelus)等海水鱼类对不同微量元素的需求量与缺乏或过量症,并列举了微量元素之间交互作用的研究进展。在此基础上,对海水鱼类微量元素需求研究进行了展望,提出了今后微量元素在海水鱼类营养需求上的研究方向。
关键词：
海水鱼类 微量元素 需求量
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
崔忠凯 王倩 刘新富 孟振 陈松林
本研究将100~300 pg含有肌肉特异表达启动子和绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因的重组质粒(smyd1:gfp)显微注射到大菱鲆(Scophthalmus maximus)受精卵动物极细胞中,通过细心培育,成功孵化出鱼苗约120尾。统计分析显示,显微注射后,大菱鲆胚胎存活率为4.8%。利用荧光显微镜观察大菱鲆胚胎及仔鱼,只在注射smyd1:gfp质粒的胚胎及仔鱼的肌肉中发现有绿色荧光。通过进一步PCR扩增检测,在注射的大菱鲆胚胎及仔鱼DNA中扩增出了GFP特异片段,大小约为340 bp。研究表明,本研究成功建立了大菱鲆显微注射技术,可为大菱鲆基因功能研究和遗传育种奠定基础。
关键词：
大菱鲆 受精卵 显微注射 GFP
[期刊] 中国水产科学
[作者]
丁浩 田永胜 武鹏飞 刘洋 陈松林
在鱼类胚胎的冷冻保存中,需要抗冻剂有效地渗入胚胎,才能对胚胎起到保护作用。本研究采用显微注射技术将抗冻剂直接注射到牙鲆(Paralichthys olivaceus)胚胎内,以实现牙鲆胚胎的玻璃化低温冷冻保存。研究中,首先对抗冻剂种类进行了选择,将抗冻剂的毒性由大到小依次排列为:乙二醇(EG)、甘油(Gly)、二甲基亚砜(DMSO)、甲醇(MeOH)、1,2丙二醇(PG)、PM21(PG∶MeOH=2∶1);对胚胎发育时期和注射剂量进行了筛选。实验结果显示,注射600pL(1pL=10-6mL)抗冻剂PM21后,牙鲆的心跳期胚胎成活率显著高于尾芽期胚胎(P<0.05),成活率为(64.04±2...
关键词：
牙鲆 胚胎 显微注射 玻璃化 冷冻保存
[期刊] 海洋渔业
[作者]
彭士明 李云莉 施兆鸿 高权新 张晨捷 王建钢
脂肪酸营养特别是其中的必需脂肪酸在海水鱼类生殖调控方面具有重要的生理作用。饲料中二十碳五烯酸（ＥＰＡ）、二十二碳六烯酸（ＤＨＡ）以及花生四烯酸（ＡＲＡ）含量在调控海水鱼类性腺发育、排卵、孵化率及仔鱼质量等方面作用显著。本文主要从必需脂肪酸需求量、对繁殖性能影响、对机体脂肪酸存储影响及对内分泌调控作用４个方面归纳总结了海水鱼类亲体脂肪酸营养的研究概况，并重点分析探讨了在内分泌调控方面的研究进展，同时对后续的研究重点提出了一些建议。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李华日 孙睿 李青梅 杨婷 冶冬阳 李伟伟 李引乾
【目的】制备复方盐酸土霉素注射液,并对其质量浓度进行测定。【方法】通过预试验,确定复方盐酸土霉素注射液的配方组分及其大致用量。以焦亚硫酸钠、MgCl2、乙醇胺和复合有机溶媒为影响因素,以灭菌前后盐酸土霉素和甲硝唑质量浓度变化为考察指标,利用L9(34)正交试验确定复方注射液的最优配方。利用紫外分光光度法对注射液中甲硝唑和盐酸土霉素的质量浓度进行考察,并计算其回收率和精密度。【结果】复方盐酸土霉素注射液的最优配方为:每100mL注射液中含有2.5g甲硝唑、5.0g盐酸土霉素、3g氯化镁、0.2g焦亚硫酸钠、40mL复合有机溶媒(由N,N-二甲基甲酰胺和聚乙二醇400组成,体积比为2∶1)、4mL...
[期刊] 工业技术经济
[作者]
王静宏
随着现代科学技术的发展,药品生产和生物技术领域中大量使用饮用水、纯化水和注射用水。水质的优劣影响药品质量。工艺用水制备技术是制药工艺的重要技术支撑。注射用水是配制注射剂的主要溶媒,其质量的高低直接影响注射剂的质量,特别是大输液,国家对此要求很高、很严。随着科学技术及检测手段的迅速发展,
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
郑碧娟 苏丽芳 陈世品 陈辉 林文俊 何艺凡
以100、200、300 mg·L-1的KT溶液浸泡油茶芽苗砧接穗,以清水处理为空白对照,研究KT处理后的油茶芽苗砧接穗对其嵌合体发育的影响.结果表明,经KT处理后的嵌合体成活率明显高于对照,其中100和200 mg·L-1浓度的KT溶液处理效果较好.嵌合体成活率与PPO活性呈极显著正相关,与POD活性呈显著负相关.接穗经低浓度KT浸泡后再进行嫁接,有利于嵌合体的愈合及成活率的提高.
关键词：
外源激动素 油茶 芽苗砧嵌合体 成活率
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