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[期刊] 西南农业学报
[作者]
许雪芬 高杰 蒋忠荣 刘曦 赵永华 彭海云 泽丹多吉 郑玉才
本研究分析了昌台牦牛(Bos grunniens)乳酸脱氢酶-1(LDH1)的遗传多态性。实验提取了80头昌台牦牛基因组DNA,采用PCR-RFLP和新建立的等位基因特异PCR技术,分别对LDH1的H亚基编码基因ldhb的2个突变点进行检测。结果表明,昌台牦牛中检测到2种ldhb G896A基因型(AA、AG),未检测到GG型,其中形成LDH1快带的G等位基因频率为0.1125,且均为杂合型(AG);首次从基因水平上分析牦牛ldhb A689C基因型,观察到AA和AC共2种基因型,其中仅1头牦牛携带LDH1慢带相关的C等位基因,且为AC杂合型。试验结果表明,昌台牦牛ldhb存在与其他牦牛品种类...
关键词：
牦牛 乳酸脱氢酶 遗传多态性
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郑玉才 司晓辉 贺庆华 金素钰 洪键
【目的】分离纯化牦牛骨骼肌中的乳酸脱氢酶-A(LDH-A),并克隆其cDNA。通过比较牦牛与普通牛的LDH-A的酶学性质和cDNA序列,为研究牦牛适应高海拔、低氧环境,在分子水平上找到一些线索。【方法】采用染料亲和层析和DEAE-Sephadex离子交换层析等方法,分别从牦牛和普通牛骨骼肌中纯化LDH-A,并对其酶学性质进行比较;通过RT-PCR方法克隆牦牛LDH-A的cDNA序列,并与GenBank登录的普通牛LDH-A的cDNA序列进行比对。【结果】纯化的牦牛LDH-A比活力为103.9U·mg-1蛋白,纯化倍数为18.2。SDS-PAGE和PAGE分析均显示一条带。酶动力学参数测定显示,...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郑玉才 赵兴波 周静 朴影 金素钰 贺庆华 洪键 李宁 吴常信
【目的】从乳酸脱氢酶(LDH)水平上探索牦牛(Bos grunniens)低氧适应性分子机制。【方法】利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析牦牛组织中LDH同工酶谱;用比色法测定牦牛、黄牛和水牛心脏、肝脏和肌肉组织中LDH总活力;采用染料亲和层析和DEAE-Sephadex离子交换层析从牦牛心肌组织中纯化LDH1(由4个H亚基组成)的2种遗传变异体,进行酶学性质的比较。【结果】电泳方法检测发现牦牛LDH1存在2种遗传变异体,根据电泳迁移率分别命名为快型和慢型(LDH1-F和LDH1-S)。获得纯化的牦牛LDH1-F和LDH1-S,比活力分别为21.4U·mg-1蛋白和17.8U·mg-1蛋白,在SDS-P...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈家祥 贾洪强 王长康 佟建明
以肉仔鸡外周血自然杀伤(NK)细胞作为研究对象,探讨乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性中5个最为关键的影响因素,选用Yac-1淋巴瘤细胞作靶细胞.结果表明:效靶细胞比为15∶1,在含2%犊牛血清的RPMI 1640维持液中,效靶细胞于37℃、5%CO2条件下作用2 h,于37℃恒温条件下酶促反应10 min,检测波长为492 nm可获得满意结果;验证试验结果表明,优化的LDH释放法检测鸡外周血NK细胞活性的方法是可行的.
[期刊] 西南农业学报
[作者]
胡廷章 黄小云 杨俊年 陈再刚
在大肠杆菌DL21中表达胚胎发育后期丰富蛋白基因Os LEA2,用Hi TrapTMchelating HP层析柱纯化得到了Os LEA2蛋白。研究表明,高温会使乳酸脱氢酶的活性降低,高温处理时间的延长会增加对乳酸脱氢酶的损害;干燥脱水5 h后,乳酸脱氢酶活性几乎全部失活,其活性仅仅是未处理的3.06%;反复冻融也会降低乳酸脱氢酶的活性。在高温、脱水和冻融胁迫下,Os LEA2的加入能保护乳酸脱氢酶;随着Os LEA2的增加,乳酸脱氢酶的活性增加。因此,Os LEA2蛋白对乳酸脱氢酶具有保护作用,能减少高温、脱水和冻融对乳酸脱氢酶的损伤。
[期刊] 水产学报
[作者]
崔东遥 任丽媛 邢冬飞 孙景贤 李莹莹 常亚青 湛垚垚
为明确中间球海胆乳酸脱氢酶(LDH)基因序列及表达特征,研究其对海水酸化胁迫的响应,实验利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得中间球海胆LDH基因(命名为SiLDH)的全长cDNA,并且比较了海水酸化胁迫下,中间球海胆不同组织SiLDH基因表达及总LDH活性的变化情况。结果显示:①SiLDH基因的cDNA全长为1 499 bp,包含133 bp的5′非编码区,349 bp的3′非编码区和1 017 bp编码338个氨基酸的开放阅读框(ORF)。SiLDH编码蛋白的相对分子量为36.40 ku,理论等电点为6.55,属于无信号肽的非跨膜、温和疏水蛋白。②生物信息学分析显示,SiLDH蛋白序列与紫球海胆LDH X4蛋白序列一致性最高(90.88%)。③实时荧光定量PCR(qRT-PCR)发现,SiLDH基因在检测的4种组织中均有表达,相对表达量从高到低为性腺>管足>肠>体腔液;总LDH活性检测显示,中间球海胆总LDH活性从高到低为性腺>管足>体腔液>肠;④海水酸化处理60 d后发现,与自然海水组(pH 8.06±0.01)相比,SiLDH基因在中间球海胆性腺、管足和肠道中呈现总体降低趋势,在体腔液中则呈现随海水pH降低先降低后显著升高的趋势;总LDH活性在性腺、管足和体腔液中呈现随海水pH降低而降低的趋势,在肠道中则呈现随海水pH降低先降低后显著升高的趋势。研究表明,中间球海胆面对海水酸化时可能通过调节SiLDH基因的表达和LDH活性来缓解海水酸化带来的负面影响。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
詹新贵 金宏 刘艳卉 谭超 傅童生
为了探讨猪各组织器官中乳酸脱氢酶同工酶酶谱特征 ,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法比较分析了 12头三元杂交猪的心、肝、脾、肺等组织中乳酸脱氢酶同工酶酶谱的分布特征 .结果表明 ,肺、脾两组织中乳酸脱氢酶有 5条酶带 ,分别为 L DH1 ,L DH2 ,L DH3,L DH4 ,L DH5,其中 L DH3最宽 ,着色最明显 ;肝组织中只有 4条酶带 ,分别为L DH1 ,L DH2 ,L DH3,L DH5;心肌组织中只含 3条酶带 ,分别为 L DH1 ,L DH2 ,L DH3.
关键词：
猪 组织 乳酸脱氢酶 同工酶
[期刊] 华北农学报
[作者]
张涛 陈建武 何力
为了了解尖裸鲤的生化遗传特性,丰富尖裸鲤种质资源研究的内容,通过配制不连续浓度聚丙烯酰胺凝胶,采用聚丙烯胺凝胶垂直板电泳对尖裸鲤5种组织(心脏、眼睛晶状体、肌肉、肝脏和肾脏)中的乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)进行了电泳。结果表明:所测样本鱼心脏、眼睛晶状体、肌肉、肝脏和肾脏中的LDH酶带数分别为:12～16条,17～18条,6～13条,6～10条和12～17条; MDH酶带数分别为3条,4条,3～5条,2条和4～7条。LDH在尖裸鲤厌氧器官(骨骼肌和肝脏)中表达的酶带数总体少于非厌氧器官(心脏和肾脏)。尖裸鲤的MDH分为上清液型(s-MDH)和线粒体型(mMDH)。尖裸鲤的LDH和MDH同工酶系统具有组织特异性,尖裸鲤相对较多的LDH酶带数可能与其独特的栖息环境和A亚基与B亚基的变异共同作用有关。本研究可从生化遗传角度为尖裸鲤的资源保护和利用提供一定理论依据。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
许文花 文亦芾 马向丽 罗富成
根据苜蓿基因组ALDH基因和稳定表达Actin基因mRNA序列,设计3对引物。提取苜蓿总RNA,采用oligo dT18作为反转录引物,经反转录获得cDNA,通过优化反应体系及反应条件,建立以苜蓿Actin基因为内参对照,检测苜蓿乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)基因(a亚基和b亚基)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,苜蓿ALDH基因(a亚基和b亚基)和Actin基因扩增曲线和标准曲线显示其基因扩增效率均大于99.9%,熔解曲线分析表明3个基因的扩增产物为特异性单峰,其Tm分别为(86.4±0.2),(80.6±0.1)和(83.0±0.1)℃。该方...
关键词：
苜蓿 乙醛脱氢酶 实时荧光定量PCR
[期刊] 水产学报
[作者]
吴婷婷 张燕生 薛国雄 夏德全
哺乳类动物各种组织和器官的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶较稳定,酶带分布非常有规律,同源组织的LDH同工酶酶谱通常相似和稳定。鱼类LDH同工酶复杂得多,有三分之二品种中,其LDH同工酶类似哺乳类动物的酶谱;但在其余三分之一种类中,两个亚基随机结合受到限制,出现了不规则酶谱,有的只有2—3条酶带,有的超过5条酶带。即使具有5条酶带的鱼中,其骨骼肌和心肌LDH在电泳酶谱上迁移快慢正好与哺乳类动物相反。此外鱼类C基因产物并不特定在某一组织或器官中,一些鱼的
关键词：
鳜鱼 奥利亚罗非鱼 乳酸脱氢酶 酶谱
[期刊] 华北农学报
[作者]
洪键 郑玉才 贺庆华
采用RT-PCR方法从黄牛睾丸组织中克隆睾丸特异乳酸脱氢酶-C(LDH-C)基因的cDNA序列,结果发现2种Ldhc剪接体,根据Ldhc基因在进化上的保守性,参照普通牛Ldhc基因结构分析了黄牛Ldhc基因的选择性剪接体的结构,结果显示,剪接体存在外显子缺失:其中剪接体1缺失第7个外显子,剪接体2缺失第4和第7两个外显子。因为LDH-C4酶的NAD+结合结构域由Ldhc的外显子2-4编码,酶的活性中心由外显子4编码。所以剪接体1包含完整酶的NAD+结合结构域和酶的活性中心,剪接体2失去了大部分NAD+结合结构域和酶的活性中心。对黄牛睾丸组织和精子LDH同工酶的电泳分析未检测到潜在的Ldhc剪接...
关键词：
黄牛 乳酸脱氢酶-C 睾丸
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
宋鸿雁 严若峰 徐立新 宋小凯 李祥瑞
克隆了堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)乳酸脱氢酶(LDH)基因(EaLDH),并在大肠杆菌中成功表达出重组蛋白。根据GenBank中收录的EaLDH核苷酸序列设计特异性引物,以其第一代裂殖体总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增获得EaLDH基因。将EaLDH基因片段与原核表达载体pET28a(+)连接,构建重组表达质粒pET28a(+)-LDH,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。结果表明,扩增出的EaLDH基因含993bp的开放阅读框,与GenBank中收录的EaLDH基因序列相似性为98%。诱导后,重组蛋白能够在大肠杆菌中高效表达,融合蛋白相对分子质量约为4...
关键词：
堆型艾美耳球虫 乳酸脱氢酶 克隆 表达
[期刊] 中国农业科学
[作者]
梅眉 黄永红 茆振川 刘志敏 谢丙炎
【目的】对南方根结线虫乳酸脱氢酶基因(mildh)进行克隆分析,并探索mildh沉默对南方根结线虫(Meloidogyne incognita)病害的抑制作用。【方法】在前期研究中,利用生物信息学方法在线虫全基因组中预测了一些线虫RNA干扰(RNAi)表型基因。本研究以预测的线虫ldh设计特异引物克隆南方根结线虫中mildh。对克隆到的mildh序列进行了特征分析后,利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术,将其导入番茄植株,并接种南方根结线虫,研究mildh基因沉默对根结线虫根结数量影响。【结果】克隆到的mildh包含1个完整的编码框序列,编码315个氨基酸。该基因与预测到的mildh核苷酸序...
[期刊] 华北农学报
[作者]
张涛 张林 周剑光 甘金华 何力
为了了解巨须裂腹鱼的生化遗传特性,丰富巨须裂腹鱼种质资源研究的内容,通过聚丙烯胺凝胶垂直板电泳对巨须裂腹鱼5种组织(心脏、眼睛晶状体、肌肉、肝脏和肾脏)中的乳酸脱氢酶(LDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)进行了电泳分析。结果表明:所测样本鱼心脏LDH酶带数为6～7条、眼睛晶状体LDH酶带数为6～10条、肌肉LDH酶带数为5～7条、肝脏LDH酶带数为8～11条和肾脏中的LDH酶带数为8～10条;LDH-C基因只在肝脏中特异性表达。心脏MDH酶带数为4～8条、眼睛晶状体MDH酶带数为2～4条、肌肉MDH酶带数为3～4条、肝脏MDH酶带数为4～5条和肾脏MDH酶带数为4～7条。5种组织中LDH在肝脏中表达的酶带数最多,肝脏MDH酶带着色最深,表达活性程度最强。巨须裂腹鱼的LDH和MDH同工酶系统具有组织特异性和个体差异性。组织特异性主要体现在LDH和MDH酶带数目和表达活性程度不同两方面,与各组织执行特定生理功能密切相关。巨须裂腹鱼同工酶个体差异性可能是其漫长的进化过程中为了能适应特殊生境的需要。研究结果可从生化遗传角度为巨须裂腹鱼制定种质标准和资源保护利用提供一定理论依据。
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