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[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘振兴 柯浩 曹艳林 张健騑 林敏 孟轩
采用RACE技术,克隆了日本鳗鲡(Anguilla japonica)谷胱甘肽过氧化物酶1和4(GPx1、GPx4)基因的完整编码序列(Complete coding sequence,CDS)。GPx1基因全长993bp,5′非编码区(UTR)29bp,CDS573bp,3′UTR372bp,PolyA19bp;第803-898位碱基(位于3′UTR)形成1个硒半胱氨酸插入序列(Selenocysteine insertion sequence,SECIS),协助144-146位密码子TGA编码Sec。GPX4基因全长1048bp,5′UTR115bp,CDS561bp,3′UTR346bp...
[期刊] 水产学报
[作者]
唐蕾 傅明骏 赵超 邱丽华 刘文生 江世贵
为了研究含硒谷胱甘肽过氧化物酶（ｓｅｌｅｎｉｕｍ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ｓｅｇｐｘ）在斑节对虾应激反应和卵巢发育中的作用，实验以斑节对虾肝胰腺转录组数据中筛选获得的ｓｅ－ｇｐｘ基因（ｐｍ ｓｅ－ｇｐｘ）片段为基础，利用ｒａＣｅ技术获得ｐｍ ｓｅ－ｇｐｘ基因的Ｃ ｄｎａ全长，并对其进行了生物信息学分析；利用荧光定量ｐＣｒ技术研究了ｐｍ ｓｅ－ｇｐｘ在斑节对虾不同组织、卵巢发育各期、肝胰腺组织在ｐｈ９、硫酸铜（Ｃｕ～（２＋））应激下的相对表达量和变化趋势。结果显示，ｐｍ ｓｅ－ｇｐｘ基因Ｃ ｄｎａ全长为９５９ ｂｐ，５＇非编码区（ｕｔｒ）长１０ｂｐ，开放．．．
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
陈虎 贾婕 罗群风 吴东山 杨章旗
克隆获得马尾松Pinus massoniana PmGPX基因,进行生物信息学分析以及在不同抗虫材料表达模式分析。在前期马尾松转录组测序获得该基因片段基础上,用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得基因全长,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术分析该基因在不同抗虫材料中的表达模式。克隆获得基因cDNA全长序列,命名为PmGPX。该基因包含741 bp开放阅读框,编码246个氨基酸。序列分析表明:该基因具有GPX家族典型的保守结构域,等电点PI 8.29,蛋白分子量27.08 kDa,与针叶植
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张孜宸 隋欣 高飞 周宜君 陈静 刘楠
【目的】克隆盐芥谷胱甘肽过氧化物酶(GPXs)基因ThGPX8,对其进行序列分析,构建原核表达载体,为进一步研究ThGPX8的结构和功能奠定基础。【方法】以盐芥为材料,利用RT-PCR技术获得其ThGPX8基因的全长cDNA序列;应用生物信息学手段对该基因编码的蛋白结构和系统进化关系进行分析;构建原核表达载体pET-ThGPX8,转化E.coli BL21(DE3),进行IPTG诱导表达、SDS-PAGE检测和Western blotting鉴定。【结果】获得的ThGPX8基因序列的开放阅读框(ORF)为504bp,编码167个氨基酸,具有GPXs的特征结构域,不是跨膜蛋白;其二级结构主要由无...
关键词：
ThGPX8 盐芥 基因克隆 原核表达
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张晗晗 徐燕 纪德华 陈昌生 许凯 谢潮添
谷胱甘肽过氧化物酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ｇｐｘ）是植物活性氧（ｒｏｓ）清除酶促系统的重要成员之一，在植物逆境胁迫应答中发挥着重要作用。本研究以坛紫菜（ｐｙｒｏｐｉａ ｈａｉｔａｎｅｎｓｉｓ）为研究材料采用ｒａＣｅ技术克隆获得了一条坛紫菜的ｇｐｘ全长基因序列，命名为ｐｈｇｐｘ（ｇｅｎ Ｂａｎｋ收录号：Ｊｘ６７３９０８）。该基因序列全长１０２７ Ｂｐ，包含５５５ Ｂｐ的开放阅读框，所编码的多肽包含１８４个氨基酸，分子量为１９．９ ｋ ｄ，等电点为８．７６。多序列比对和系统进化树分析结果表明ｐｈ ｇｐｘ属于植物ｇｐｘ基因家族成员。基因表达水平的ｑ ｐＣｒ分析结果表明ｐｈ ｇ．．．
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
姜晶晶 张殿昌 麻建军 苏天凤 江世贵
研究了合浦珠母贝含硒谷胱甘肽过氧化物酶(命名为poSe-GPx)基因结构特征和在应激状态下的表达调控机制,其cDNA全长为1271 bp,5′-非编码区(UTR)长28 bp,3′-UTR长631 bp,包括4个RNA不稳定信号结构域(ATTTA)、1个保守的硒代半胱氨酸插入序列(SECIS)和1个位于poly(A)尾巴上游22个核苷酸处的多聚腺苷信号(AATAAA).开放阅读框(ORF)为612 bp,编码由203个氨基酸组成的多肽,分子质量约23.1 ku,理论等电点为8.29.poSe-GPx第51个氨基酸为硒代半胱氨酸(Sec),由密码子TGA编码.poSe-GPx序列中存在1个保守的...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
肖蓉 罗慧珍 张小娟 邓舒 张春芬 任莹 孟玉平 曹秋芬 聂园军
【目的】研究枣树谷胱甘肽过氧化物酶基因(Zj GPX)的功能,为其在果树抗逆基因工程改良中的利用奠定基础。【方法】以‘壶瓶枣’(Ziziphus jujuba Mill.Hupingzao)结果枝构建的c DNA文库中选取一条与其他植物谷胱甘肽过氧化物酶基因有较高同源性的序列为研究对象进行序列分析,预测其功能。通过实时荧光定量技术分析目的基因在盐胁迫及干旱胁迫条件下的表达特性,并构建植物表达载体PEZR(K)-LNY-Zj GPX,运用农杆菌介导法,将Zj GPX转入拟南芥,对转基因及野生拟南芥植株作盐胁迫及干旱胁迫处理,验证其抗逆功能。【结果】Zj GPX编码序列(CDS)长510 bp,编...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈俏丽 王峰 李丹蕾 零雅茗 张瑞芝
根据转录组测序结果,克隆到水稻干尖线虫谷胱甘肽过氧化物酶基因(Ab-GPX),对其基因结构、在缺氧条件下的表达模式及功能进行研究.原位杂交结果表明,Ab-GPX在水稻干尖线虫生殖系统部位表达.RT-PCR结果表明,Ab-GPX在缺氧胁迫及恢复供氧过程中表达量上调.利用基因沉默技术进一步研究发现,Ab-GPX沉默后,水稻干尖线虫在缺氧条件下存活率显著下降,表明该基因可能参与调控水稻干尖线虫的缺氧隐生状态.
[期刊] 华北农学报
[作者]
程华 李琳玲 王燕 程水源
利用RACE技术从银杏中克隆到过氧化物酶基因(GbPOD1,FJ599670)的cDNA全长。GbPOD1基因编码序列为1 092 bp,编码一条长为329Aa的成熟阴离子POD蛋白,预测成熟蛋白分子量为35.8 kDa,等电点为8.10。Southern杂交及进化树分析结果表明,GbPOD1和其他物种的POD源自于相同的祖先,属于植物类型III的POD同工酶编码基因,为多基因家族。RT-PCR分析表明,GbPOD1在银杏的根、茎、叶和果中都有表达,在茎中的相对表达量最高,其次为根和果,而叶部位表达水平最低。植物激素MeJA、金属离子Cu和Cd以及MV和WOU的处理能显著诱导GbPOD1基因的...
关键词：
银杏 POD1基因 表达分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨尚谕 李立芹 陈倩 卓维 刘仑 鲁黎明
为烟草过氧化物酶基因的功能及结构研究奠定理论基础,采用同源克隆的方法,从烤烟品种K326中克隆出了过氧化物酶基因Nt POD1的c DNA全长,并进行了生物信息学分析;同时,运用q RT-PCR的方法,分析了该基因的组织器官及逆境胁迫表达模式。结果显示,该基因c DNA全长981 bp,编码326个氨基酸残基,预测分子量为37.19 ku,等电点为8.89。生物信息学分析表明,该蛋白是一个亲水性蛋白,结构域中含有4个保守的二硫键和2个保守的钙结合位点,可能定位在细胞外(包括细胞壁),属于植物血红素依赖性过氧化物酶超家族的Ⅲ类分泌氧化酶,与渐窄叶烟草POD42、美花烟草POD42、马铃薯POD42等具有很高的同源性。该基因在烟草根、茎、叶、花中均有表达,其中叶中表达量最高,花中表达量最低。同时,Nt POD1的表达受高盐、干旱、低钾、ABA和H2O2诱导。结果表明,Nt POD1基因属于烟草的过氧化物酶,并可能在烟草非生物逆境胁迫响应中发挥作用。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
乔枫 耿贵工 曾阳 金兰 谢惠春
为探索青海枸杞抗坏血酸过氧化物酶(APX)基因信息,并对枸杞APX基因进行生物信息学分析以及基因表达研究,通过RT-PCR和RACE方法克隆枸杞APX基因,利用生物信息学软件预测基因结构,采用实时荧光定量PCR方法分析基因表达的变化。结果显示:枸杞APX基因的全长cDNA序列为1 047bp(Genbank No.KX981601),命名为LcAPX基因。该基因含有1个753bp的完整开放阅读框(ORF),编码250个氨基酸,包含亚铁血红素结合位点、底物结合位点和K~+结合位点。枸杞LcAPX与茄科植物的APX蛋白聚为一类,说明两者的亲缘关系较近。LcAPX基因在枸杞的成熟叶中表达量最高,花中表达量最少。其在聚乙二醇(PEG)、氯化钠(NaCl)胁迫下诱导表达,显示LcAPX在枸杞抗干旱和抗盐逆境过程起一定作用。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王润豪 于永昂 胡海燕 丁超杰 李红民 牛晴晴 李成伟
为了研究非生物胁迫处理下小麦抗坏血酸过氧化物酶(APX)的作用,以小麦百农207为试验材料,根据小麦APX基因序列,采用RT-PCR技术对小麦APX基因进行克隆、生物信息学分析及组织表达模式分析;对小麦进行非生物胁迫处理,分析小麦APX基因在环境胁迫条件下的表达特征。结果表明,TaAPX基因包含876 bp的开放阅读框,编码1个291个氨基酸组成的蛋白质,分子质量为31.73 ku,等电点为7.74,分子式C_(1417)H_(2246)N_(394)O_(423)S_5,TaAPX可能是两性蛋白,无信号肽,为非分泌蛋白。蛋白质序列比对和进化树分析表明,小麦与大麦的APX编码蛋白的氨基酸全长序列相似性最高达到97.25%,亲缘关系最近。实时荧光定量PCR分析表明,TaAPX在小麦幼根、茎、茎节、幼叶、叶鞘、雌蕊和雄蕊中均有表达,其中在幼叶中表达量最高,其次是茎、茎节,在幼根、叶鞘中表达量较低,在雌、雄蕊中表达量最低。在非生物胁迫条件下该基因受干旱、低温胁迫表达增强,而在NaCl胁迫和渗透胁迫下表达降低。综上,获得了TaAPX基因的编码区序列,分析发现其响应干旱、低温和盐等逆境胁迫,提示该基因可能与小麦抗逆境机制密切相关。
[期刊] 华北农学报
[作者]
张安 曹清河 周志林 赵冬兰 逄洪波 唐君
为了从甘薯野生资源中获取抗逆基因，提取Ｉｐｏｍｏｅａ ｔｒＩｆＩｄａ组培苗总ｒＮａ，经反转录获得第一链ｃ ｄＮａ，使用特异引物进行ｐｃｒ扩增，获得了Ｉ．ｔｒＩｆＩｄａ抗坏血酸过氧化物酶编码区序列，并进行生物信息学分析以及组织特异性表达研究。经测序表明，所获得的序列长约７６９ ｂｐ，包含７５３ ｂｐ完整的开放阅读框；生物信息学分析结果表明，此序列编码２５０个氨基酸，蛋白大小约为２７．６ ｋ ｄａ，等电点为５．４２，有大范围亲水区，推测在细胞质中起到抗氧化作用；进化发育系统分析表明，Ｉｔ ａｐＸ和Ｉｂ ａｐＸ最为接近；组织特异性表达分析表明，Ｉｔ ａｐＸ在各组织中均有表达。Ｉ．ｔｒＩｆＩｄａ抗坏血．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
张安 曹清河 周志林 赵冬兰 逄洪波 唐君
为了从甘薯野生资源中获取抗逆基因,提取Ipomoea trifida组培苗总RNA,经反转录获得第一链c DNA,使用特异引物进行PCR扩增,获得了I.trifida抗坏血酸过氧化物酶编码区序列,并进行生物信息学分析以及组织特异性表达研究。经测序表明,所获得的序列长约769 bp,包含753 bp完整的开放阅读框;生物信息学分析结果表明,此序列编码250个氨基酸,蛋白大小约为27.6 k Da,等电点为5.42,有大范围亲水区,推测在细胞质中起到抗氧化作用;进化发育系统分析表明,It APX和Ib APX最为接近;组织特异性表达分析表明,It APX在各组织中均有表达。I.trifida抗坏血...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
蔡琼 丁贵杰 文晓鹏
［目的］克隆马尾松谷胱甘肽过氧化物酶基因，并对其进行功能研究。［方法］采用ＲＡＣＥ技术克隆基因Ｃ ＤＮＡ序列，实时荧光定量ＰＣＲ检测基因在马尾松干旱胁迫下的表达模式，花序浸泡法转化拟南芥，并对转基因与野生型拟南芥的生长表型和根系生长进行分析。利用荧光显微镜技术对转基因拟南芥不定根进行ＧＦＰ荧光检测。［结果］克隆到１个８７１ ｂＰ的ＧＰＸ基因全长Ｃ ＤＮＡ序列，命名为Ｐｍ ＧＰＸ６。Ｐｍ ＧＰＸ６包括５１３ ｂＰ的完整开放阅读框，编码１７０个氨基酸残基。Ｐｍ ＧＰＸ６蛋白与油松Ｐｔ ＧＰＸ蛋白同源性达９５％。Ｐｍ ＧＰＸ６在马尾松根中高表达，茎、叶中表达量低。在干旱胁迫下，Ｐｍ ＧＰＸ６在根、茎．．．
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