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[期刊] 中国农业科学
[作者]
彭金彪 韩宏晓 洪炀 王欣之 石耀军 傅志强 刘金明 林矫矫
【目的】克隆和表达了日本血吸虫CyclophilinA(Sj CyPA)编码基因cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。【方法】从实验室构建的7天童虫消减cDNA文库中,PCR扩增一EST序列的基因全长cDNA,提交到NCBI,登录号为GQ403666。应用荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,以pET28a(+)为载体构建重组表达质粒,并在大肠杆菌中表达。诱导、表达、纯化和复性重组蛋白,测定其PPIase活性。利用Western blot检测重组蛋白的抗原性。以重组抗原免疫小鼠,评估其对小鼠诱导...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
伍小松 黄复深 陈尔曼
为获得新的可表达保护性抗原分子的编码基因,以日本血吸虫虫卵抗原免疫血清筛选日本血吸虫虫卵cDNA 文库,对获得的阳性克隆进行 PCR 鉴定并测序后,通过互联网将测序结果进行同源性分析和功能预测.结果发现,筛选到 3 个与 GenBank 中 SjEA 基因(登录号为 AB017096)具有 100%同源性的阳性克隆.序列分析表明,该基因全长 774 bp,编码 257 个氨基酸,编码蛋白的等电点为 8.76,相对分子质量为 28 900;为一非跨膜蛋白,二级结构预测具有 2 个 α-螺旋区,3 个β-折叠区,4 个无规卷曲区,具有一个称为 TonB 的 PS00430 保守区.
关键词：
日本血吸虫 抗原分子 克隆 序列分析
[期刊] 中国农业科学
[作者]
韩宏晓 彭金彪 洪炀 王欣之 石耀军 傅志强 刘金明 程国锋 李祥瑞 林矫矫
【目的】克隆和表达日本血吸虫精氨酸甲基转移酶1(SjPRMT1)编码基因cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。【方法】从实验室构建的7d童虫消减cDNA文库中,获得一个EST序列,经序列测定和生物信息学分析命名为SjPRMT1,以SjcDNA为模板,获得其全长cDNA。荧光实时定量PCR分析该基因在童虫和成虫的表达情况。以pET28a(+)为载体构建重组表达质粒,Western blotting检测重组蛋白的抗原性与免疫原性,利用重组抗原免疫小鼠评估其免疫保护效果。【结果】获得了SjPRMT1编码基因的全长cDNA,开放阅读...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李红飞 王孝波 冯新港 靳亚平 杨健美 苑纯秀 林矫矫
【目的】分析β-连环蛋白(β-catenin)在不同发育阶段日本血吸虫体内的表达特征,为研究Wnt/β-catenin信号通路对虫体发育的调控奠定基础。【方法】以7 d童虫cDNA为模板,通过RACE技术获得日本血吸虫β-catenin基因全长cDNA序列。采用实时定量PCR分析该基因mRNA在不同发育阶段日本血吸虫体内表达水平的变化。以含有多个抗原表位的β-catenin部分cDNA序列为模板,构建原核pET28a-β-catenin-310重组质粒,表达β-catenin蛋白。以纯化的原核表达产物为抗原,免疫BALB/c小鼠制备抗血清,以此抗血清为一抗,通过Westernblotting分...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
付媛 张雪娟 赵俊龙 何永强 刘恩勇 卢福庄 江涛 冯尚连
为了得到重组的日本血吸虫22.6 ku膜相关蛋白,研究设计了1对引物,以日本血吸虫mRNA为模板,用RT-PCR方法克隆了576 bp的22.6 ku膜相关蛋白基因片段,测序结果表明,该片段与已公布的Sj22.6基因序列(U75510)同源性达到99%。将该基因片段插入原核表达载体pGEX-KG构建了原核表达质粒pGEX-Sj22.6,在大肠杆菌BL21 codn plus中表达获得了约48 ku的融合蛋白,经Western-blot检测,该重组蛋白具有良好的免疫原性。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
蔡学忠 林矫娇 杨冠珍 施福恢 沈纬 蔡幼民 吴祥甫
以日本血吸虫 mRNA 为模板,用 RT-PCR 法快速克隆到一大小约600bp 的 DNA 片段,DNA 序列分析证实,所扩增到的 DNA 片段中含有日本血吸虫22.6kD 膜相关蛋白(Sj-22.6(Ch))基因,将该基因重组到表达型质粒 pGEX-4T 中,表达的 GST 融合蛋白分子量约48kD,用谷胱甘肽琼脂塘凝胶亲和层析柱纯化的重组蛋白不仅纯度好,而且得率高,纯化产量可达40mg·L~(-1)培养物,免疫试验结果表明该重组蛋白具有良好的抗原性,为其在血吸虫病抗感染中的免疫作用研究创造了条件.
[期刊] 中国农业科学
[作者]
姚利晓 林矫矫 傅志强 朱传刚 李浩 陆珂 刘金明 石耀军 沈阳 蔡幼民
目的筛选克隆东方田鼠血清识别的日本血吸虫靶抗原基因,并研究其免疫保护效果。方法利用东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA表达文库获得阳性克隆,以5′RACE技术扩增获基因全长序列,构建含目的基因的核酸疫苗并研究在小鼠中的免疫保护效果。结果(1)获得4个日本血吸虫新的EST序列,即mfs-1(GenBank登录号BE974942)、mfs-3(GenBank登录号BE974944)、mfs-4(GenBank登录号BE974945)和mfs-5(GenBank登录号BE974946)。(2)mfs-5进行全长序列克隆,获得的日本血吸虫新基因SjPP(GenBank登录号AY...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
周智君 唐连飞 黄复深 曾宪芳 易新元
为观察日本血吸虫合成表位多肽疫苗诱导的保护性免疫,将用日本血吸虫抗原免疫血清筛选噬菌体随机12肽库得到的、具有较好免疫保护性的4个模拟抗原表位短肽进行人工合成,用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测它们的抗原性.将合成多肽分别与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)连接后免疫昆明小鼠,第3次免疫后收集血清,检测其针对各个多肽和可溶性成虫抗原(AWA)的IgG抗体滴度,以及补体介导的小鼠体外杀日本血吸虫童虫作用.结果显示,4个合成多肽均能被相应的抗体识别,具有良好的抗原性;能诱导产生特异性IgG抗体.这些抗体在补体参与下能在体外有效毒杀血吸虫童虫.与正常小鼠血清比较,4个合成多肽免疫血清的杀童虫率分别为31.7...
关键词：
日本血吸虫 合成肽 表位疫苗
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
向静 刘毅 江为民 曹满湖 李娜
为找寻特异性强、敏感性高,且操作简便、费用低廉,并能大规模应用于临床的日本血吸虫病血清学诊断方法,以疫区黄牛为研究对象,应用环卵沉淀试验(COPT)、血清法间接血凝试验(sIHA)和血纸法间接血凝试验(bpIHA)、胶乳凝集试验(PAPS)、三联斑点酶联免疫吸附试验(三联Dot-ELISA)5种血清学诊断方法与粪检方法检测牛日本血吸虫病,并对5种血清学检测结果进行评价.检测分析结果表明,用血清学方法COPT,sIHA,三联Dot-ELISA对疫区黄牛进行血吸虫病检测,与三粪九检结果符合率高,具有灵敏度高、特异性好、简捷方便、费用低等特点,特别适用于疫区家畜血吸虫病的诊断、普查,是比较理想的现场...
关键词：
黄牛 日本血吸虫病 粪检 血清学诊断
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
沈丽琳 陈伟华 史晓丽 包鸿俊
采用放射受体分析方法测定日本血吸虫体内γ─氨基丁酸（ＧＡＢＡ）受体．试验证实：日本血吸虫体内存在ＧＡＢＡ受体，其最大结合容量（Ｂｍａｘ）为３０．５８±１０．１９ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白，Ｋｄ值为１０．７２±６．２６ｐｍｏｌ；Ｓｃａｔｃｈａｒｄ图曲线下凹，说明ＧＡＢＡ受体与配体ＧＡＢＡ之间有较大结合容量和较高的亲和力，但其结合又可能存在不均一性和复杂性．
关键词：
日本血吸虫 GABA 受体 配体
[期刊] 地理科学进展
[作者]
赵安 蒋梅鑫 简敏菲 倪才英
医学地理研究由来已久,但地理学界血吸虫病医学地理研究相对薄弱,而且多是非地理专业人员在从事相应工作。本文首先从血吸虫病流行传播的机理出发,分析了血吸虫病医学地理的主要研究内容,认为钉螺滋生地与血吸虫病疫情的监测和预测是血吸虫病医学地理研究的主要内容;其次系统总结了气象气候因子、土壤植被因子、地貌高程因子、水文水力因子、人文经济因子对血吸虫生命史及其宿主的影响,并视其为血吸虫病医学地理研究的基础;然后回顾了近年国际、国内运用遥感、GIS技术和统计学方法(包括地统计学方法)进行钉螺滋生地与血吸虫病疫情确定的主要研究手段,归纳了7类钉螺滋生地预测方法和5类血吸虫病疫情预测方法;最后剖析了目前血吸虫病医学地理研究面临的主要挑战和未来血吸虫病医学地理研究努力方向。
[期刊] 长江流域资源与环境
[作者]
赵安
血吸虫病医学地理学与血吸虫病空间流行病学研究涉及到大量与血吸虫及其寄生宿主有关的生态环境知识与参数,这些方面为从地理学角度解释过去由实践经验和调查总结得到的中国血吸虫病疫区分类提供了丰富的信息。参阅了大量有关方面的研究成果,系统分析总结了血吸虫生活史中与生态环境关系密切的虫卵、毛蚴、尾蚴阶段和寄生宿主钉螺、哺乳动物的生态特点与流行机理。结果认为:生态环境条件能同时满足血吸虫及其寄生宿主的生态要求是血吸虫病流行传播的基本条件,血吸虫生活史的大部分时间都在终宿主哺乳动物和中间宿主钉螺体内度过,钉螺生态条件的苛刻性是血吸虫病流行传播空间分异的主要原因,钉螺的空间分异规律与特征成为血吸虫病疫区类型的划...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张振岚
栖霞区的摄山镇由于境内通江河道多,钉螺面积大,且主要沿江沿河分布,阳性钉螺密度在全市也属最高,每年均有急性感染病人、病畜发生,全市血吸虫病疫情及全省的急性血吸虫感染病人主要集中在该地区;同时,该镇又是我市奶牛主要产区之一,由于历史的原因及生产生活需要,居民村落大多沿河分布,故人畜接触疫水的机会也多.据血防部门96年春季螺情资料反映,该镇钉螺面积较1995年上升36.3%,
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王熙凤 乔军 孟庆玲 陈英 钟文强 贡莎莎 黄运福 才学鹏
【目的】为了研究肝片吸虫(Fh) SAP-2蛋白的反应原性及作为Fh血清学诊断抗原的潜力。【方法】本研究利用RT-PCR方法对Fh SAP-2基因进行扩增,将扩增产物克隆入p MD19-T载体后测序,对其进行分子特征分析;构建原核表达载体p ET-SAP-2,在E. coli BL21(DE3)中进行表达,通过SDS-PAGE和Western blot对表达的重组蛋白进行反应原性分析;以纯化的重组蛋白SAP-2(re SAP-2)为抗原,建立了检测Fh特异性抗体的间接ELISA,评估了SAP-2蛋白作为Fh血清学诊断抗原的潜力。【结果】Fh SAP-2基因全长306 bp,编码101个氨基酸。在线软件分析发现,SAP-2为疏水性、无跨膜区蛋白,信号肽位于第1～15个氨基酸之间。系统进化树分析表明,Fh SAP-2与曼氏裂体吸虫同源性最高,与其他寄生虫存在较大的差异。Western blot证实,re SAP-2蛋白可被Fh阳性血清特异性识别,有较强的反应原性。用re SAP-2蛋白建立了间接ELISA,对23份Fh阳性血清和10份阴性血清进行检测,结果证实re SAP-2蛋白有良好的特异性和敏感性。【结论】Fh SAP-2蛋白具有较强的反应原性,具有作为Fh血清学诊断抗原的潜力。
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