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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
周智君 唐连飞 黄复深 曾宪芳 易新元
为观察日本血吸虫合成表位多肽疫苗诱导的保护性免疫,将用日本血吸虫抗原免疫血清筛选噬菌体随机12肽库得到的、具有较好免疫保护性的4个模拟抗原表位短肽进行人工合成,用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测它们的抗原性.将合成多肽分别与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)连接后免疫昆明小鼠,第3次免疫后收集血清,检测其针对各个多肽和可溶性成虫抗原(AWA)的IgG抗体滴度,以及补体介导的小鼠体外杀日本血吸虫童虫作用.结果显示,4个合成多肽均能被相应的抗体识别,具有良好的抗原性;能诱导产生特异性IgG抗体.这些抗体在补体参与下能在体外有效毒杀血吸虫童虫.与正常小鼠血清比较,4个合成多肽免疫血清的杀童虫率分别为31.7...
关键词：
日本血吸虫 合成肽 表位疫苗
[期刊] 中国农业科学
[作者]
姚利晓 林矫矫 傅志强 朱传刚 李浩 陆珂 刘金明 石耀军 沈阳 蔡幼民
目的筛选克隆东方田鼠血清识别的日本血吸虫靶抗原基因,并研究其免疫保护效果。方法利用东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA表达文库获得阳性克隆,以5′RACE技术扩增获基因全长序列,构建含目的基因的核酸疫苗并研究在小鼠中的免疫保护效果。结果(1)获得4个日本血吸虫新的EST序列,即mfs-1(GenBank登录号BE974942)、mfs-3(GenBank登录号BE974944)、mfs-4(GenBank登录号BE974945)和mfs-5(GenBank登录号BE974946)。(2)mfs-5进行全长序列克隆,获得的日本血吸虫新基因SjPP(GenBank登录号AY...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘金明 王美 叶萍 傅志强 蔡学忠 石耀军 陈永军 林矫矫 林邦发 施幅恢
免疫刺激复合物(ISCOM)是 Morein 创立的一种疫苗免疫载体,其中的主要佐剂成分是 Quil A(皂素的一种成分).本研究首先用日本血吸虫中国大陆株成虫可溶性租抗原(SWA)作为免疫抗原,按改进方法结合皂素制备 ISCOM,对其在小鼠体内诱导的免疫保护力和 SWA 在 FCA/FIA、蜂胶二种佐剂条件下的免疫保护力进行了比较研究,然后对不同剂量 SWA-ISCOM 的免疫效果进行考察;最后对重组日本血吸虫中国大陆株28kD GST(rSj28GST)-ISCOM 在小鼠体内所诱导的免疫保护力进行观察.结果表明 IS-COM 在进一步应用于各种基因工程苗方面有研究价值。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
韩宏晓 彭金彪 洪炀 王欣之 石耀军 傅志强 刘金明 程国锋 李祥瑞 林矫矫
【目的】克隆和表达日本血吸虫精氨酸甲基转移酶1(SjPRMT1)编码基因cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。【方法】从实验室构建的7d童虫消减cDNA文库中,获得一个EST序列,经序列测定和生物信息学分析命名为SjPRMT1,以SjcDNA为模板,获得其全长cDNA。荧光实时定量PCR分析该基因在童虫和成虫的表达情况。以pET28a(+)为载体构建重组表达质粒,Western blotting检测重组蛋白的抗原性与免疫原性,利用重组抗原免疫小鼠评估其免疫保护效果。【结果】获得了SjPRMT1编码基因的全长cDNA,开放阅读...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
魏冰 陈文娟 朱琳 李建军 吕传忠 任东兴 陈庚 付旭彬
[目的]本文旨在研究Th表位肽和聚肌胞苷酸[Poly(I:C)]2种免疫增强剂对猪O型口蹄疫合成肽抗原细胞免疫和体液免疫的增强作用。[方法]将上述2种免疫增强剂分别与O型口蹄疫病毒(FMDV)合成肽抗原混合乳化,分组免疫Balb/c小鼠,分别在免疫后7、14、21和28 d检测小鼠血清中的VP1抗体、IL-4和IFN-γ水平,以及脾脏中T淋巴细胞转化率及脾脏组织形态变化。[结果]免疫后14 d Th表位肽疫苗组和Poly(I:C)疫苗组血清VP1抗体水平显著高于普通疫苗组(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
严若峰 徐立新 孙延鸣 赵光伟 李祥瑞
【目的】构建捻转血矛线虫DNA疫苗,并研究该疫苗对山羊的免疫保护效果。【方法】将捻转血矛线虫重要保护性抗原H11的编码基因分H11-1、H11-2和H11-3三部分,分别亚克隆到基因疫苗载体pcDNA4/HisMaxC中,用酶切反应、序列测定等方法鉴定重组疫苗。将纯化的DNA疫苗肌肉注射山羊后,用RT-PCR、Westernblotting和ELISA方法检测疫苗在山羊体内的转录、翻译和诱导IgG的产生。第2次免疫后2W用10000条捻转血矛线虫第3期幼虫攻击实验动物,检测山羊虫卵排出、虫卵孵化率、成虫数量等免疫保护性指标。【结果】获得了捻转血矛线虫H11DNA疫苗,疫苗第1次免疫7d后在山羊...
关键词：
山羊 捻转血矛线虫 H11 DNA疫苗
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杜重波 张德林 李惠萍 李学瑞
用细胞培养方法制备了弓形虫(GJS 株)ES 抗原(Exceted/Sereted Antigen,E/SA),用油佐剂 M206按不同剂型制备 ES 苗,随机分组免疫健康小鼠(昆明鼠,23～25 g·只~(-1)),每组5只,皮注/腹注0.3 mL·只~(-1)。其中:组1,E/SA 浓缩苗;组2,E/SA 苗;组3,E/SA-H 浓缩苗;组4,E/SA-H;组5,培养液对照;组6,M206对照.另设:组7,健康攻毒对照;组8,健康对照.先后免疫2次(间隔15 d),第28 d 用弓形虫 GJS 速殖子强毒攻毒,每鼠腹注10~2.免疫前后分别取尾血片检测弓形虫血清抗体(IHA 法).
[期刊] 中国水产科学
[作者]
庞欢瑛 周泽军 丁燏 闫秀英 蔡双虎 简纪常 吴灶和
采用Overlap PCR和同源重组技术,结合氯霉素(Cm)正向筛选和sacB基因蔗糖负向筛选,构建了溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)Ⅲ型分泌系统(Type III secretion system,T3SS)注射装置蛋白vscO基因无标记框内缺失突变株ZJ03ΔvscO。在以石斑鱼(Epinephelus coioides)为模型的感染实验中发现ZJ03ΔvscO的毒力较ZJ03下降约150倍。将ZJ03ΔvscO作为减毒活疫苗通过注射、浸泡的途径免疫石斑鱼(Epinephelus coioides)后,发现其对溶藻弧菌有很好的保护效应,其中注射组的免疫保护率达84%,浸...
关键词：
溶藻弧菌 vscO 减毒活疫苗 免疫保护
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
秦磊 陆承平 陈怀青
将嗜水气单胞菌的胞外毒素(HEC) 和胞外蛋白酶(ECPase) 与迟缓爱德华氏菌脂多糖(LPS)、脱毒多糖(PS) 偶联, 制成3 种亚单位偶联疫苗 (HEC-PS、HEC-LPS、ECPase-PS), 分别免疫小鼠。另设这两种细菌的全菌灭活苗免疫及注射生理盐水对照组, 每组8 只。在第2 次免疫后第7 天用四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT), 检测脾淋巴细胞转化率与腹腔巨噬细胞吞噬活性, 并检测各组小鼠的全菌凝集抗体。结果表明, 亚单位疫苗的这两项细胞免疫指标明显高于对照组,但略低于全菌灭活苗免疫组, 而细胞免疫指标与抗体水平无对应的平行关系。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
邵美丽 刘思国 王春来 王勇 宫强 尹训南 郭设平 刘建东 佟恒敏
【目的】欲构建具有较好交叉免疫保护效果的多组分重组亚单位疫苗,从而为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考。【方法】利用分子克隆和重组表达技术获得了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要毒力因子rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP。并设立以灭活苗(5×108cfu)为试验Ⅰ组,以重组蛋白rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rOMP为试验Ⅱ组,以rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP为试验Ⅲ组,以PBS为空白对照组。分3次免疫BALB/c小鼠,每次间隔2周,第3次免疫后的第7天以APP1型(5×109cfu)和APP2型(5×1010cfu...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
梁爱心 姚艳丰 金定恩 武睿 韩丽 付平 刘耘 杨利国
通过研究细胞因子GM-CSF与生长抑素pcS/2SS融合表达质粒pGM-CSF/SS诱导小鼠免疫应答的影响,探求生长抑素基因免疫新策略。将60只20日龄雄性昆明小白鼠均分为6组,分别用PBS(C0)、pGM-CSF质粒(C1)、pGM-CSF/SS质粒(T1、T2、T3)、pcS/2SS(T4)质粒口服免疫,T1~T4组的免疫剂量分别为2×106cfu/mL、2×108cfu/mL、2×1010cfu/mL、2×108cfu/mL,以上质粒均以减毒沙门氏菌为传导载体。结果显示:pGM-CSF/SS组的抗生长抑素抗体AP/AN值显著高于pcS/2SS组,阳性鼠体增重亦高于pcS/2SS组,抗体阳...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈思颖 黄剑梅 张杨 陈玉凤 丁文傒 刘佳斌 徐立新 严若峰 宋小凯 李祥瑞
[目的]本试验旨在评估重组蛋白rN1T1L2E1和rN1T1L2E1I2作为亚单位疫苗候选抗原的潜力。[方法]应用PCR技术分别扩增NA4-1-TA4-1-LDH-2-EMCDPK-1与NA4-1-TA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2基因,用LaserGene分析基因编码蛋白序列特性;表达重组蛋白rN1T1L2E1和rN1T1L2E1I2,经Western blot分析重组蛋白的免疫原性,采用流式细胞术检测蛋白免疫后鸡脾脏中CD~+_4和CD~+_8 T淋巴细胞的比值,经间接ELISA法检测鸡血清中细胞因子水平和特异性IgG水平以分析重组蛋白的免疫原性。取柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫新鲜卵囊经口感染免疫后的雏鸡,统计平均增重、病变计分、盲肠内容物卵囊数等指标,计算各组抗球虫指数(ACI),评估重组蛋白对球虫感染的免疫保护效果。[结果]LaserGene分析显示重组蛋白拥有密集且连续的T细胞表位,抗原指数高;Western blot分析显示重组蛋白可被4种艾美耳球虫的多克隆抗体识别,重组蛋白rN1T1L2E1和rN1T1L2E1I2均可提高机体CD~+_4/CD~+_3和CD~+_8/CD~+_3细胞比例,提高血清中IFN-γ、IL-4、IL-17、TGF-β和IgG抗体水平。以上结果表明重组蛋白具有良好的反应原性和球虫抗原性。免疫重组蛋白后试验组鸡平均增重高于对照组,卵囊产量下降明显,肠道病变程度减轻,抗球虫指数提升。[结论]重组蛋白rN1T1L2E1和rN1T1L2E1I2可作为多价多表位亚单位抗球虫疫苗的候选抗原。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
郑新生 姚宝安 王艳蕊 段存争
考察吡喹酮在不同溶媒中的溶解度、稳定性和对小鼠的刺激性,研制出了200 mg/mL的吡喹酮注射剂。用此注射剂对人工感染日本血吸虫22 d后的小鼠进行了肌肉注射治疗试验。结果表明:200 mg/mL吡喹酮注射剂对日本血吸虫病小鼠的治疗效果良好,减虫率可达100%。该注射剂在室温自然条件下避光保存8个月或在80℃恒温24 h,其颜色及吡喹酮的浓度均无变化。小鼠注射给药部位没有炎症和组织坏死变化。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘建奎 魏春华 侯喜林 余丽芸 王桂华
【目的】利用干酪乳酸菌作为抗原传递系统来刺激机体产生黏膜免疫反应,从而研制有效的黏膜疫苗预防ETECF41的感染。【方法】重组菌在MRS培养基中进行表达,经SDS-PAGE、Western blot检测目的蛋白的表达,间接免疫荧光分析及流式细胞术检测外源蛋白展示到菌体表面。将重组菌及空质粒菌株分别滴鼻接种SPF级Balb/c小鼠,采集血液样品测定小鼠产生抗F41的特异性IgG,收集小鼠肺部冲洗液、肠道冲洗液、阴道冲洗液及粪便样品测定小鼠产生抗F41的特异性sIgA,并对小鼠进行攻毒保护性试验。【结果】重组干酪乳杆菌pLA-F41/L.casei免疫小鼠能够产生明显的抗F41的sIgA和IgG抗...
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