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[期刊] 林业科学研究
[作者]
范艳如 兰倩 韩素英 齐力旺 张立峰
[目的 ]通过研究LaSPL2和LaSPL3的分子特征和表达模式,揭示其在落叶松体细胞胚发育中的功能。[方法 ]利用同源克隆及RACE技术,获得LaSPL2和LaSPL3的全长cDNA序列,通过生物信息学分析其编码蛋白保守结构域、进化关系等,利用烟草瞬时表达体系进行亚细胞定位研究,采用qRT-PCR检测2个基因在落叶松体细胞胚发育过程的表达模式。[结果 ]本研究获得了2个落叶松SPL同源基因LaSPL2和LaSPL3,分别编码532个氨基酸和191个氨基酸,其c DNA序列均存在miR156识别位点。多序列比对分析发现:它们均具有保守的SBP结构域。亚细胞定位结果显示:LaSPL2和LaSPL3定位于细胞核中。qRT-PCR结果表明:在落叶松体细胞胚发育早期,ABA下调LaSPL2和LaSPL3表达;随着体细胞胚的进一步发育,LaSPL2和LaSPL3的表达水平分别在10 d和14 d达到峰值;之后随着体细胞胚发育成熟,它们的转录水平逐渐下降,并在42 d达到最低值。[结论 ]通过分析ABA缺失对LaSPL2和LaSPL3表达的影响,表明ABA可能是落叶松体细胞胚发育早期LaSPL2和LaSPL3下调表达的主要因子;LaSPL2和LaSPL3的表达量在体细胞胚发育的早期阶段均达到最高峰,表明它们可能是早期胚胎形成的一个重要调控因子;LaSPL2和LaSPL3序列分析及表达模式,表明它们在体细胞胚发育中可能受miR156调控,并在体细胞胚的成熟过程中具有重要意义。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
李龙 张立峰 齐力旺 韩素英
本研究克隆了日本落叶松体细胞胚胎发生相关受体类蛋白激酶基因LaSERK1,并检测了在不同培养条件下LaSERK1的表达情况,发现LaSERK1与已发现的其他物种SERK1基因有高度相似性,qRT-PCR结果显示:LaSERK1在体胚发生早期高表达。结果表明:LaSERK1可能在落叶松体胚发育早期起重要作用,LaSERK1也可能成为早期胚性细胞的标记基因。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
张俊红 吴涛 韩素英 齐力旺 张守攻
以落叶松体细胞胚胎发育8个阶段的材料构建小RNA文库,进行了Solexa测序、miRNA鉴定、靶基因预测、qRT-PCR定量分析等研究。结果表明:发现的87个miRNAs中,29个为针叶树特异的,来自12个家族,分别为miR946、miR947、miR950、miR951、miR1311、miR1312、miR1313、miR1314、miR1316、miR3701、miR3702和miR3704,其中25个长度为22nt,且在小RNA文库中的最低拷贝数为18(miR1311),最高拷贝数为33 009(miR950)。发现12个miRNA家族的34个靶基因可能参与生长发育、抗病、AGO反馈调...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
李哲馨 李万峰 韩素英 齐力旺
[目的]研究落叶松体细胞胚萌发能力,为落叶松在应用方面规模化繁殖提供理论依据。[方法]以落叶松体胚性细胞系S287的成熟体细胞胚为材料,区分了落叶松体细胞胚的不同子叶形态;进行树脂切片及显微观察后,对其萌发能力进行了统计;并利用外源施用激素的方法研究了影响落叶松体胚再生成苗的重要因子。[结果]成熟的落叶松体细胞胚主要以四种形态存在,分别是正常子叶胚(NC≥4),裂生子叶胚(2
关键词：
落叶松 体细胞胚再生体系 萌发率 IAA
[期刊] 中国林业科学研究院
[作者]
刘雅丽
落叶松是我国北方中高山地区重要的速生造林用材树种。落叶松体细胞胚发生是细胞工程规模化繁育的理想实验体系,也为林木基因功能研究提供了优良材料。本课题组已经对落叶松体细胞胚发生的形态发生、生理生化、分子调控等不同层次进行了研究,揭示了落叶松体细胞胚发生过程中胚性维持以及畸形胚率高等分子机制。近年研究证明氢分子作为一种新型的抗氧化剂或信号分子,在植物和动物中有促进细胞增殖、调控细胞周期与凋亡,缓解氧化损伤以及延缓细胞衰老等功能。但是目前外源氢处理对植物体细胞胚的作用尚不清楚。本研究旨在通过在体细胞胚发生过程中进
[期刊] 林业科学
[作者]
吕守芳 张守攻 齐力旺 孙晓梅 王建华
日本落叶松日永 10、日永 6 9和日草 34三个优株 ,将其未成熟种子和成熟种子的胚及成熟种子萌发的胚根、胚轴和绿色愈伤组织 5种外植体进行体细胞胚胎发生的试验 ,其中只有未成熟胚诱导出胚性愈伤组织 ,筛选出1)胚性愈伤组织诱导培养基 :S培养基 +6_BA 0 5mg·L- 1 +KT 0 5mg·L- 1 +2 ,4_D 1 0mg·L- 1 ;2 )胚性愈伤组织保持与增殖培养基 :S培养基 +6_BA 0 2 5mg·L- 1 +KT 0 2 5mg·L- 1 +2 ,4_D 0 1mg·L- 1 ;3)成熟体细胞胚诱导培养基 :S培养基 +ABA 15mg·L- 1 +PE...
[期刊] 中国林业科学研究院
[作者]
李哲馨
落叶松体细胞胚再生体系是对针叶树进行分子遗传改良、研究裸子植物早期发育调控和形态发生的理想模式系统。然而在实践中仍然存在体细胞胚畸形率高、萌发率低等问题。前期研究发现,过表达miR166a前体基因LaMIR166a后,落叶松体细胞胚顶端发育异常,这与生长素极性运输抑制剂N-1-萘基酞氨酸(N-1-naphthylphthalamic acid,NPA)处理的结果类似,表明miR166及其目标基因LaHDZ31-34与生长素信号途径共同参与调控落叶松体细胞胚形态建成。本研究以落叶松胚性细胞系S287为受体材
[期刊] 林业科学
[作者]
王伟达 李成浩 杨静莉 张含国 张淑玲
以未成熟合子胚为外植体,建立杂种落叶松胚性愈伤组织诱导和植株再生体系。从日本落叶松5×长白落叶松77-3和日本落叶松5×兴安落叶松9两个家系诱导出胚性愈伤组织,授粉后65天左右采集的合子胚在添加0.5mg·L-12,4-D+0.5mg·L-16-BA+0.5mg·L-1KT的S培养基上胚性愈伤组织诱导率最高,为10%。从胚性愈伤组织中筛选出3个具有稳定分化能力的胚性细胞系,其中授粉后65天采集的日本落叶松5×长白落叶松77-3合子胚诱导的胚性细胞系的每克胚性愈伤组织形成的体胚数、体胚萌发率、植株再生率最高,分别为18.1个,77.0%,28.1%。再生植株的移栽成活率为41.8%。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
肖霞 张立峰 齐力旺 韩素英
［目的］探讨ｍｉＲ３９６在落叶松体细胞胚胎发生中的功能。以期该研究能为解决体胚发育中子叶畸形胚与生根率低的问题提供新的视角，同时也为进一步揭示体胚发育的分子调控网络做基础铺垫。［方法］构建ｐＲｅ－ｍｉＲ３９６超表达载体，通过农杆菌介导侵染，将ｐＲｅ－ｍｉＲ３９６转入落叶松胚性细胞中，筛选稳定抗性细胞系。在ＤＮＡ与ＲＮＡ水平上，对抗性细胞系进行的鉴定、检测，同时统计比对其与野生细胞系间发芽率、叶片数目以及生根率的差异。［结果］在抗性细胞系基因组中，扩增出ＨＴｐ与ｍｉＲ３９６的特异性片段，且无农杆菌ＶｉＲｇ基因片段。ＲＮＡ表达水平上，抗性系ｐＲｅ－ｍｉＲ３９６与ｍｉＲ３９６表达皆增加，而靶基因ＬＡ．．．
[期刊] 林业科学
[作者]
宋跃 甄成 张含国 李淑娟
【目的】以长白落叶松的未成熟合子胚为外植体，进行胚性愈伤组织的诱导、增殖培养及体细胞胚胎发生的相关研究，揭示影响长白落叶松胚性愈伤组织诱导的关键因素，并探讨继代培养过程中添加不同种类、浓度的生长调节剂对胚性愈伤组织增殖及体胚发生的影响。【方法】采集长白落叶松３个家系优良单株的种子，诱导胚性愈伤组织，比较外植体采集时间、家系、２，４－Ｄ浓度及基本培养基对胚性愈伤组织诱导的影响。诱导出的胚性愈伤组织继代于含不同种类、浓度生长调节剂的增殖培养基，通过体胚发生途径获得体细胞胚。选取发育正常的体胚进行萌发，待体胚生根后移栽。【结果】不同时间采集的未成熟合子胚，其胚性愈伤组织诱导率存在较大差别，授粉后６３．．．
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
何玉琴 刘英 刘佳利 崔胜
利用免疫荧光标记方法研究了鸡胚发育过程中垂体促乳素 (PRL)细胞的发生。结果表明 ,在鸡胚发育的第 14 5天可观察到有少量PRL免疫荧光阳性细胞散在分布于腺垂体前叶。随着胚龄的增加 ,垂体PRL细胞的体积逐渐增大 ,细胞直径从第 14 5天的 6 83μm增加到第 2 0 5天的 11 2 4 μm ,胞核直径从 4 2 7μm增加到 5 99μm。PRL细胞占腺垂体细胞总数的百分比在胚胎发育的第 14 5天为 0 86 % ,第 2 0 5天增加到 18 85 % ,并且分布于整个腺垂体前叶 ,细胞多呈索状排列或团状分布。研究结果表明 ,鸡胚垂体催乳素细胞的增殖、分化和...
关键词：
鸡胚 腺垂体 催乳素细胞 免疫荧光标记
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘文婷 田立宁 聂小妮 梁宗锁 何蔚娟
【目的】探讨转基因苜蓿植株根、茎、叶和体细胞胚中外源GUS的表达情况,为外源蛋白在苜蓿体细胞胚中的积累提供理论依据。【方法】以在加拿大广泛种植的N4.4.2紫花苜蓿品种的叶柄为外植体,进行农杆菌GV3101介导的苜蓿遗传转化,将感染的苜蓿叶柄外植体置于不同的转化培养基中培养,获得了适合于农杆菌介导的转基因苜蓿植株,将其用于转基因体细胞胚的诱导。采用PCR方法筛选阳性株系,并对其进行GUS组织化学染色分析,对转基因植株根、茎、叶和体细胞胚进行荧光定量分析。【结果】以苜蓿叶柄为外植体成功获得11株阳性转基因植物,转化效率为30.6%。GUS荧光定量分析结果表明,体细胞胚中GUS外源蛋白的表达量明显...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
吕守芳 张守攻 齐力旺 孙晓梅 王建华
综述了欧洲落叶松、日本落叶松、欧日和日欧杂种落叶松、西部落叶松和华北落叶松体细胞胚胎发生的研究进展,对胚性培养物的超低温保存、原生质体培养和基因转化等技术进行了介绍,并对落叶松体细胞胚胎发生的研究趋势作了展望。
[期刊] 林业科学
[作者]
齐力旺 韩一凡 韩素英 王建华 Dietrich Ewald
研究了麦芽糖、NAA、ABA对华北落叶松体细胞胚发生及体细胞胚根发生和再生完整植株的影响。结果表明 :在胚性愈伤组织继代、增殖过程中 ,以 0 5mg·L- 1 的NAA代替 2 ,4 -D后 ,有利于体细胞胚的成熟和根发生。在ABA 16mg·L- 1 时 ,产生的华北落叶松体细胞胚 ,能够再生良好植株 ,ABA大于 2 0mg·L- 1 时对体细胞胚根的发育不利。在含 3%麦芽糖、4 %PEG4 0 0 0活性炭 1g·L- 1 的成熟培养基上 ,华北落叶松每克愈伤组织子叶胚达 10 6 7个 ,生根率达 5 7 89% ;显著地提高了成熟体细胞胚及其根的质量。
关键词：
华北落叶松 体细胞胚 麦芽糖 下胚轴
[期刊] 林业科学
[作者]
杨玲 沈海龙
利用花楸树人工控制授粉后的未成熟合子胚进行体细胞胚的诱导培养,通过石蜡切片、扫描电镜和透射电镜对合子胚和体细胞胚的发生发育过程进行组织、细胞观察。结果表明:1)体细胞胚发生进程与合子胚相似,均经历了球形期、心形期、鱼雷形期,最终发育成成熟胚;2)直接发生和间接发生在愈伤组织表面的体细胞胚均为单细胞起源,间接发生在愈伤组织内部的体细胞胚存在单细胞起源,同时还存在可能的多细胞起源;3)子叶和愈伤组织表面发生的体细胞胚在发育早期均具明显的胚柄,鱼雷形胚期胚柄退化;4)愈伤组织内部发生的体细胞胚没有胚柄;5)与合子不同,胚性细胞的第1次分裂为均等分裂;6)多细胞原胚周围降解的细胞具有细胞程序性死亡的形...
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