【目的】探究日本医蛭在不同摄食阶段、各个组织（唾液腺、肠、嗉囊、皮肤及精卵巢）中水蛭素基因（hirudin）的时空表达模式，以期为水蛭药材的科学合理利用提供理论依据。【方法】基于课题组前期的水蛭唾液腺转录组数据筛选结果及基因克隆获得的水蛭素基因序列信息，利用实时荧光定量PCR方法，对水蛭关键活性成分的编码基因hirudin在不同摄食阶段、不同组织中的表达量进行检测分析，研究该基因的时空表达模式。【结果】水蛭素基因（hirudin）在日本医蛭的唾液腺、肠、嗉囊、皮肤及精卵巢组织中均有表达，且在唾液腺中的表达量显著高于其他组织；Hirudin基因在不同摄食阶段的唾液腺组织中表达结果显示，摄食后第2天表达量显著升高，之后随着摄食时间的推延而出现下降趋势；Hirudin基因在嗉囊、肠中的表达量呈先升高后下降的趋势，分别于摄食后第1天、第2天达到最高，之后会随着停食时间延长而呈现下降趋势，尤其是在摄食后第7天、第8天的表达量呈现显著性降低；Hirudin基因在皮肤组织中也有表达，并随着停食时间的延长呈先升后降的趋势，最高峰出现在摄食后第2天；在精卵巢组织中，摄食期间hirudin基因的表达量最高，与其他摄食阶段的表达呈现显著性差异。【结论】水蛭素基因hirudin在日本医蛭的唾液腺、肠、嗉囊、皮肤和精卵巢组织中均有不同程度的表达，在唾液腺中的表达量显著高于其他组织。摄食行为及食物刺激可能影响水蛭素基因（hirudin）的表达，在不同摄食阶段的表达量存在显著差异。研究结果可为水蛭药材的科学采收加工、提取部位的科学选取、合理入药提供理论依据和技术支撑，对未来水蛭药材资源的可持续利用具有重要的参考价值。

本研究基于转录组学的分析结果，克隆分析了银鲳(Pampus argenteus)二肽酶(dehydropeptidase， dp1)、羧肽酶A (carboxypeptidases， cpa2l)和磺基转移酶(sulfotransferase， sult2) 3个营养代谢相关基因，并探讨了其在消化吸收水母(Scyphozoa)过程中发挥的功能。通过RACE技术克隆获得了银鲳dp1、cpa2l和sult2基因的cDNA全长序列。dp1基因全长2 522 bp，包含1个1 272 bp的开放阅读框(ORF)，含有1个由23个氨基酸组成的信号蛋白肽和1个典型的酰胺水解酶超家族的结构域。cpa2l基因全长1421 bp，ORF长1260 bp，含有1个由16个氨基酸组成的信号蛋白肽和1个典型的M14金属羧肽酶家族的结构域。sult2基因全长1 834 bp，ORF长714 bp，含有1个典型的磺基转移酶家族的结构域。银鲳Dp1、Cpa2l和Sult2与蓝鳍金枪鱼(Thunnus maccoyii)同源性最高，系统进化树结果也显示，银鲳dp1、cpa2l和sult2和蓝鳍金枪鱼对应基因聚在一个分支上，亲缘关系最近。运用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测了dp1、cpa2l和sult2基因在不同组织中的表达水平及摄食水母对3个基因不同组织中表达规律的影响。结果发现，银鲳dp1基因在肝脏中表达量最高(P<0.05)，与未摄食水母组相比，dp1基因在摄食水母组的脑和鳃中表达量均极显著增加(P<0.01)，在中肠和肾脏中显著增加(P<0.05)，而在肌肉中显著下降(P<0.05)。cpa2l基因在未摄食水母组的中肠的表达量最高，而在摄食水母组的肾脏的表达量最高(P<0.05)，与未摄食水母组相比，摄食水母组cpa2l基因在肝脏中的表达量极显著增加(P<0.01)，而在中肠和肌肉中却极显著下降(P<0.01)。sult2基因在肝脏中表达量最高(P<0.05)，与未摄食水母组相比，sult2基因在摄食水母组的中肠、脑、鳃、肝脏和肾脏中表达量显著增加(P<0.05)。上述结果表明，dp1、cpa2l和sult2基因在银鲳摄食水母后机体营养物质的消化吸收和代谢过程中起重要的调节作用，基于摄食水母后3个基因组织表达模式的比较分析，推测dp1主要参与调控消化吸收和组织中营养素沉积的过程，cpa2l主要参与调控肝脏中营养代谢的过程，而sult2可能在整个消化吸收和代谢过程中均起到重要的调控作用。

报道了水蛭素全基因的合成及克隆。根据已知水蛭素氨基酸序列及酵母菌体内蛋白质表达特性 ,设计了水蛭素的全基因序列 ,采用化学合成及酶学相结合的方法 ,合成了该基因片段 ,并逐段克隆至载体 pBS上 ,得到全长水蛭素基因。序列测定表明 ,克隆后DNA顺序同原设计序列。

２０１４年，将广西的菲牛蛭（Ｈｉｒｕｄｉｎａｒｉａ ｍａｎｉｌｌｅｎｓｉｓ）引种入贵州开展驯养试验，对菲牛蛭的摄食与生长进行了研究。结果显示：（１）引种菲牛蛭摄食系数随着体重的增加而降低，其中在体重小于１ ｇ时摄食系数最大，为０．８９±０．６０，体重在１～４ ｇ时为０．５４±０．４５，体重在４～１０ ｇ、１１～１７ ｇ的摄食系数分别为０．３７±０．２６、０．２４±０．１８。（２）引种菲牛蛭平均快速代谢期随着体重的增加而延长，体重小于１ ｇ时平均快速代谢期最短，为（３．３０±０．８２）ｄ，体重在１～１７ ｇ之间时快速代谢期相近，约为６～７ ｄ。（３）引种菲牛蛭增重率随体重的增加呈现下降趋势，其中．．．

为研究crh (Corticotropin-releasing hormone)基因对鱼类摄食的调控作用,首次克隆了银鲫(Carassius auratus gibelio) crh基因c DNA全长序列。运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测crh基因m RNA在不同组织的表达及餐前、餐后和禁食对其表达的影响。结果显示,银鲫crh基因的c DNA序列全长为920 bp,其中,5’-UTR为53 bp,3’-UTR为378 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)为489 bp。推导银鲫crh基因的ORF区编码蛋白由162个氨基酸组成,其中,含有11个氨基酸的保守区,24个氨基酸的信号肽,41个氨基酸的成熟肽。氨基酸序列的多重比较分析显示,银鲫crh基因与金鱼(Carassiusauratus)的同源性为99%,与鲤(Cyprinuscarpio)的同源性为96%。荧光定量PCR表达分析显示,银鲫crh基因在下丘脑中的表达量最高,其次是端脑和心脏。crh基因的表达量在餐前与餐后没有显著变化(P>0.05),在禁食第5天、第7天出现极显著降低(P<0.01),而在复投喂后第9天、第11天出现极显著升高(P<0.01)。以上结果显示,crh基因在银鲫摄食调控方面可能扮演着重要角色。

利用半滑舌鳎性腺转录组测序获得的StAR基因部分序列,设计RACE引物,克隆了半滑舌鳎StAR基因的cDNA序列,全长为1 294 bp,5'端UTR为132 bp,3'端UTR为310 bp,开放阅读框(ORF)为852 bp,共编码283个氨基酸。将半滑舌鳎StAR基因与其他物种StAR基因进行氨基酸同源性分析,结果显示,半滑舌鳎StAR与塞内加尔鳎、大口黑鲈、花鲈、金头鲷的同源性都达到了85%,与虹鳟、斜带石斑鱼及日本鳗鲡的同源性分别为81%、83%和76%。雌、雄鱼不同组织StAR基因的表达分析表明,StAR基因在雄鱼性腺中高表达,在雄鱼的肝脏、脑及心脏中表达量较低,而在雄鱼的其他组织...

以肉食性鱼类翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)为研究对象,对其肽YY(peptide YY,PYY)基因进行鉴定和分析,并通过中枢注射人工合成的鳜PYY多肽,研究PYY对翘嘴鳜摄食量的影响。氨基酸序列多重比对结果发现,sc-PYY与各个物种的氨基酸序列高度保守,鱼类中与狼鲈(Dicentrarchus labrax)、红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)一致性较高;实时荧光定量PCR检测sc-PYY mRNA表达的组织分布,结果显示,sc-PYY mRNA在脑中表达量最高,在肠道、肌肉、眼睛中亦有较高的表达;翘嘴鳜中枢注射PYY后,摄食量在4 h相比于对照组(PBS)显著性下降。这表明PYY可能在减少鳜的食物摄入量中发挥着重要的作用。

【目的】研究磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶(PHGPx)在山羊各种组织中的表达特点及在性腺中的定位情况。【方法】提取各种组织总RNA,应用实时荧光定量PCR方法检测各种组织PHGPx mRNA表达规律,利用免疫组化技术对睾丸和附睾PHGPx进行定位分析。【结果】PHGPx mRNA在各种组织表达水平由高到低依次为:睾丸>>心>脑>附睾>肾>肝>肺>脾>背最长肌,在性腺和附睾中:睾丸>>附睾尾>附睾头>附睾体;免疫组化结果显示睾丸间质组织、生精细胞均有阳性产物,附睾头部平滑肌纤维表达弱阳性,附睾尾部附睾管中的单层柱状上皮表达呈强阳性。【结论】PHGPx在不同组织广泛表达,发挥重要的生物学功能,免疫组化...

【目的】研究脂联素基因在荷斯坦公牛不同组织及月龄间的相对表达差异性,为脂联素基因作为荷斯坦公牛育肥指标的分子辅助标记提供依据。【方法】运用实时荧光定量PCR法检测了脂联素基因在15和17月龄荷斯坦公牛脂肪组织(背部脂肪、腰部脂肪、肾周脂肪、肠系膜脂肪)和肌肉组织(背最长肌和半腱肌)间的相对表达差异性。【结果】15月龄时脂联素基因在荷斯坦公牛肾周脂肪和肠系膜脂肪中的相对表达量极显著高于腰部脂肪、背部脂肪、背最长肌和半腱肌(P<0.01),17月龄时仅显著高于背最长肌和半腱肌(P<0.05);17月龄时该基因在背部脂肪中的相对表达量显著高于15月龄时(P<0.05)。【结论】脂联素基因在15和17...

采用RT-PCR技术,对90日龄大白猪心肌、肝脏、胃、肾脏、肺、大肠、小肠、背肌和腿肌组织中表达情况进行研究,得到Cst B基因在肾脏、肺、大肠和小肠中有较高的表达,而在心肌、背肌和腿肌等肌肉组织中表达量相对较低。

为了探讨瘦蛋白受体(OBR)基因在肉鸡不同组织中的表达差异,采用半定量RT-PCR和Northern blot方法检测OBR基因在不同发育阶段的肉鸡高脂系公鸡多种组织中的表达情况。结果表明:OBR基因在所检测的8种组织中均有表达,且表达量存在差异,其中大脑、心脏中的表达量高,并显著高于其他组织(p<0.05),腿肌和胸肌中的表达量较低。

【目的】研究IRX3（Iroquois homeobox 3）基因在秦川牛各组织中的表达规律，为通过现代分子技术手段改良秦川牛肉用性状提供理论依据。【方法】根据秦川牛IRX3的mRNA序列设计实时定量特异性引物，采用实时荧光定量PCR方法,检测IRX3基因在秦川牛不同生长发育阶段(胎儿、6月龄、24月龄)不同组织（心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大肠、小肠、肌肉（背最长肌））及在6月龄、18月龄、24月龄、60月龄秦川牛脂肪组织中的表达水平。【结果】IRX3基因在秦川牛胎牛、6月龄、24月龄3个阶段均在

MicroRNA(miRNAs)是一类长度为18-25nt的内源性非编码单链小RNA,参与细胞增殖与凋亡、免疫、脂肪代谢等过程。本试验以三组投喂不同类型饵料的鲤(Cyprinus carpio)肝脏为研究材料,通过HiSeq 2500深度测序技术和生物信息学分析miRNA,鉴定出235个已知miRNAs。三种饵料组共表达的差异miRNAs有13个,随机挑选5个miRNA并采用qPCR进行验证,表达趋势在qRT-PCR结果和RNA测序结果中高度相似;对13个共表达的差异表达miRNAs进行靶基因预测,共预测到靶基因530个。对预测靶基因进行KEGG通路分析,结果显示参与2-羰基羧酸代谢,糖基磷脂酰肌醇(GPI)-锚定生物合成,柠檬酸循环(TCA循环)等通路的调节。本研究首次了解鲤摄食不同种类饵料的miRNAs表达特征,可以为深入了解miRNA对鲤摄食不同种类饵料过程的调控作用奠定基础。

【目的】探究家蚕感染BmNPV后,不同组织碱性磷酸酶(ALP)及其基因表达变化规律,为阐明BmNPV的侵染机制及培育抗NPV蚕品种的选育提供借鉴和思考。【方法】通过经口添食BmNPV,检测分析家蚕中肠、血淋巴和脂肪体ALP基因的表达水平及其编码的碱性磷酸酶活性变化情况。【结果】家蚕中肠ALP基因在感染BmNPV后6、9和12 h呈现上调表达趋势,其编码的碱性磷酸酶活性显著高于对照组,在感染24 h基因表达被抑制,同时酶活性显著降低。血淋巴碱性磷酸酶及ALP基因对BmNPV的响应略晚于中肠,ALP基因在感染9 h开始上调表达,在12 h表达量最高,在24 h表达量急剧降低。碱性磷酸酶活性在9和12 h极显著高于对照组,而在24 h急剧减弱,显著低于对照组。脂肪体ALP基因表达量及碱性磷酸酶活性仅在感染12 h显著高于对照组。【结论】家蚕感染BmNPV后,中肠、血淋巴和脂肪体ALP基因表达水平及碱性磷酸酶活性变化均是呈现先升高后急剧减弱的趋势。基因的表达情况与酶活性变化规律一致,这与家蚕感染BmNPV后,其自身机体的生理代谢进程存在紧密联系,暗示碱性磷酸酶在家蚕抗病毒过程中发挥了重要作用。

5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸合成酶(EPSPs)是植物芳香族氨基酸合成途径的重要酶,是优良除草剂草甘膦作用的靶酶.根据已克隆的抗草甘膦植物薤白EPSPs基因cDNA序列的3′端非保守区域设计引物,采用RT-PCR半定量技术,研究了该基因在薤白不同组织中的表达情况.利用18S rRNA为表达的内参基因,建立一个针对EPSPs特异、稳定的RT-PCR半定量检测体系.对EPSPs基因表达的检测表明,薤白幼叶中基因表达水平最高,总表达水平高低依次为:幼叶,根,茎,壮叶.相对18S rRNA表达量为:幼叶0.631,根0.246,茎0.218,壮叶0.120.