为研究无血清扩增犬脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs)移植对犬急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的临床治疗效果,采用胶原酶消化法分离犬UC-MSCs,无血清对其进行体外扩增,对P3代干细胞的形态、生长曲线、群体倍增时间、体外诱导分化和表面标记基因表达等生物学特性进行鉴定;通过静脉注射P3代无血清犬UC-MSCs对1例急性肾损伤的犬进行治疗。结果表明:无血清犬UC-MSCs原代48h发现有少量细胞贴壁,呈不规则形态。P3代犬UC-MSCs贴壁生长,呈长梭形或多边形等形态,P3代细胞较P6代细胞有更强的增值能力,在体外经诱导可分化为成骨细胞、脂肪细胞、成软骨细胞。病犬就诊前精神沉郁、脱水并伴有呕吐及腹泻等症状,经血液生化检查,该病犬肌酐389μmol·L~(-1)、尿素>46.4mmol·L~(-1)、无机磷4.40mmol·L~(-1),结合血常规及超声检查,确诊为犬急性肾损伤。在常规治疗联合干细胞移植后34d进行复查,病犬精神恢复良好,饮食正常,血液生化检测肌酐下降至133μmol·L~(-1)、尿素下降至14.7μmol·L~(-1)、磷离子下降至1.87μmol·L~(-1),肌酐和磷离子含量稳定在正常参考值范围内,尿素含量明显下降且接近正常参考值范围。表明无血清犬UC-MSCs移植的参与能安全有效治疗犬急性肾损伤,为兽医临床的细胞疗法提供新思路和更理想的细胞种子。

为了建立鸡脐带间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)体外培养体系并对其进行生物学特性研究。取11～15日龄鸡胚,脐带分离获得UCMSCs,在L-DMEM培养基中培养,观察其形态。通过传代、生长曲线和周期分析其增殖情况,并研究体外诱导分化潜能。结果表明,鸡UCMSCs可在体外扩增培养,目前传代至P30,表达CD29、CD44和CD71,并具有向胰岛β样细胞诱导分化的潜能。鸡脐带中可以分离出UCMSCs,能够在体外培养,并可诱导分化为胰岛β样细胞。

[目的]本试验旨在分离、多向诱导分化并鉴定犬脂肪间充质干细胞。[方法]无菌条件下采取经过健康筛查的犬腹部脂肪,机械剪碎,采用1 g·L~(-1)胶原酶Ⅰ型消化,用DMEM+10%FBS培养,观察细胞形态特征,流式细胞术分析细胞表面抗原标志的表达,并检测其体外成脂、成骨、成软骨分化能力。[结果]运用酶消化法可以从犬新鲜脂肪组织中分离到脂肪间充质干细胞,流式分析结果显示其高表达CD29(99.9%),低表达CD34(0.5%)和CD45(0.3%)。这些细胞在体外经诱导可以分化成为骨、软骨和脂肪。[结论]犬腹部脂肪组织中分离得到脂肪间充质干细胞,这些细胞具有多向分化能力。

[目的]本试验以犬肾小管上皮细胞(Madin-Daby canine kidney cell, MDCK)为模型，研究赭曲霉毒素A(OTA)对MDCK的毒性作用以及番茄红素(lycopene, LYC)对细胞损伤的缓解效应。[方法]将对数生长期MDCK,随机分为对照组(无添加)、OTA组(15μmol·L~(-1) OTA)、LYC组(55μmol·L~(-1) LYC)、O+L组(15μmol·L~(-1) OTA+55μmol·L~(-1) LYC),处理36 h,研究OTA对MDCK细胞结构、细胞凋亡、肾功能相关指标、氧化与抗氧化、炎性因子等指标的影响，并探讨LYC在OTA致MDCK损伤中的缓解作用。[结果]OTA作用导致细胞发生明显皱缩，细胞数量骤减；电镜结果显示OTA能够导致细胞膜破裂、细胞器出现不同程度损伤，MDCK中乳酸脱氢酶(LDH)、活性氧(ROS)水平与丙二醛(MDA)含量极显著增加(P<0.01),超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性极显著降低(P<0.01);细胞中肾功能相关指标N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β2-微球蛋白(β2-MG)、肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)、肾损伤分子1(KIM-1)、视黄醇结合蛋白(RBP)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)均极显著升高(P<0.01);同时极显著增加了MDCK的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素6(IL-6)、干扰素18(IL-18)及干扰素1β(IL-1β)的水平(P<0.01);OTA可诱导MDCK凋亡率极显著升高(P<0.01);而LYC能够有效减缓OTA造成的损伤，LYC组与OTA处理组相比形态较饱满，细胞间衔接紧密，细胞凋亡率显著下降；LDH、ROS、MDA水平(含量)降低，SOD、CAT、GSH-Px活性升高，并降低炎性细胞因子的表达。[结论]OTA能够抑制MDCK活性，改变细胞形态，导致肾功能指标、氧化与抗氧化功能与细胞炎性因子异常，加快细胞凋亡；LYC能够显著缓解OTA对MDCK的损伤。

【目的】研究干细胞标志分子,如干细胞"干性"调控关键基因及胚胎阶段特异性抗原(Stage-specific embryonic antigen,SSEA)在猪脐带组织中的表达状况,为猪脐带来源细胞的利用提供参考。【方法】以猪脐带为研究材料,利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法,分析干细胞"干性"调控关键基因Oct4、Nanog、Sox2、Rex1以及SSEA-1、SSEA-3和SSEA-4在猪脐带组织中的表达。【结果】RT-PCR分析显示,干细胞"干性"调控关键基因Oct4、Nanog、Sox2、Rex1在所有猪脐带样品中阳性转录,但Nanog mRNA的相对表达量显著低于Oc...

通过HPLC确定灌胃芦荟药物在家兔血清中达到峰值时相,确定最佳采血时间,制备芦荟药物血清,将血清加入糖基化终产物(AGEs)作用过的肾系膜细胞(RGMC)中,孵育24 h。之后,检测细胞内谷胱甘肽(GSH)和氨基葡萄糖苷酶(NAG)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、山梨醇脱氢酶(SDH)和醛糖还原酶(AR)的活性,研究芦荟药物血清对RGMC的保护效果,初步探讨芦荟防治糖尿病的机理。结果表明,芦荟药物在家兔灌胃后2 h的血清中血液达到相对峰值;AGEs作用过的细胞经芦荟药物血清处理后,其GSH含量、SOD活性均较未加芦荟处理的A组有所升高,且差异极显著(P<0.01),其SD...

将草鱼肾细胞(CIK)在28℃条件下培养24h后,分别置于28(对照)、32、36和40℃的条件下暴露2h,测定不同温度处理组的细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、细胞周期的改变、细胞内多泛素化蛋白水平以及caspase-3和bcl-2的表达变化;置于28(对照)、32、36和40℃的条件下暴露12h,测定不同温度处理组的细胞活力。试验结果表明,热应激引起细胞活力显著下降,导致CIK细胞的LDH漏出率显著上升,多泛素化蛋白表达量显著增加,bcl-2的表达量显著下调和caspase-3的表达量显著上调,G0/G1期细胞显著减少。急性热应激可能会引起CIK的细胞膜通透性和蛋白质表达量的变化,从而诱导细...

为了确定大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)体外分离和培养的方法,建立了稳定的MSCs体外培养扩增体系,通过密度梯度离心和贴壁筛选法分离培养大鼠MSCs,观察了细胞的形态,研究了其增殖及生长特征,并应用流式细胞术测定了细胞周期及CD29,CD44,CD45和HLA-DR的表达。结果表明,在体外培养条件下大鼠MSCs贴壁生长,为成纤维细胞样;CD45和HLA-DR的表达呈阴性,CD29和CD44的表达呈阳性;细胞周期的G0/G1期约占95%,具有原始细胞的特征。说明建立的体外培养扩增体系可获得形态单一、生长稳定、增殖性较强、较均一的大鼠MSCs。

为研究砷（Ａｒｓｅｎｉｃ，Ａｓ）和铅（ＬｅＡｄ，Ｐｂ）单独以及联合作用对人肝癌细胞（ＨｕｍＡｎ Ｌｉｖｅｒ ｃＡｒｃｉｎｏｍＡ ｃｅＬＬｓ，ＨｅＰＧ２）毒性作用和细胞氧化损伤的机制，采用不同质量浓度的Ａｓ（２．６５、３．１５、３．６５、４．１５和４．６５μＧ／ｍＬ）和Ｐｂ（１６０、１９０、２２０、２５０和２８０μＧ／ｍＬ）以及质量浓度比为１∶５５的Ａｓ＋Ｐｂ分别或联合处理ＨｅＰＧ２细胞２４、４８和７２Ｈ，使用ｍＴＴ法检测细胞活力；细胞培养２４Ｈ后测定细胞活性氧（ｒｏｓ）、乳酸脱氢酶（ＬｄＨ）、丙二醛（ｍｄＡ）和还原性谷胱甘肽（ＧｓＨ）的相对含量。ｍＴＴ结果表明：Ａｓ、Ｐｂ和Ａｓ＋Ｐｂ的２４、４．．．

分别以1.30 mg/kg、1.69 mg/kg、2.19 mg/kg、2.86 mg/kg、3.71 mg/kg、4.83 mg/kg、6.27 mg/kg、8.16 mg/kg剂量的伊维菌素(ivermectin)对松浦镜鲤(Cyprinus specularis songpu)进行口灌,并设置空白对照和溶剂对照,给药后连续观察96 h,记录各组鱼的行为和死亡情况。用SPPS软件计算得出松浦镜鲤口灌伊维菌素的96 h LD50为4.04 mg/kg,95%可信区间为3.42~4.80 mg/kg。对给药组和对照组鱼进行血细胞分析,发现随着给药剂量的增加,红细胞数无明显变化,血红蛋白浓度呈上...

[目的]大蒜的活性成分大蒜辣素（Allicin）是一种天然含硫有机化合物，具有抗菌、抗炎、抗氧化等药理活性。本研究旨在探讨大蒜辣素对四氯化碳（CCl_(4)）诱导的小鼠急性肝损伤的缓解作用及其潜在作用机制。[方法]将42只小鼠随机分为7组，分别为对照组、大蒜辣素处理组、CCl_(4)处理组、复方甘草酸苷治疗组（80 mg·kg~(-1)）、不同剂量大蒜辣素（40、20和10 mg·kg~(-1)）治疗组。小鼠腹腔注射1% CCl_(4)（10 mL·kg~(-1)）8 h后，灌胃给予不同剂量的大蒜辣素和复方甘草酸苷，于CCl_(4)处理48 h后，采集小鼠血液和肝脏组织，测定血清生化指标、血清中炎性因子以及肝组织MDA及CAT含量，并采用Western Blot方法检测了大蒜辣素对细胞凋亡相关蛋白表达的影响。[结果]试验期间单独使用大蒜辣素对小鼠肝脏无损伤作用（P>0.05）。40、20和10 mg·kg~(-1)体重的大蒜辣素均可显著降低CCl_(4)处理小鼠的血清AST、ALT及ALP水平（P<0.05），显著升高肝脏CAT含量、抑制MDA含量（P<0.05），显著升高肝组织NQO_(1)和Nrf_(2)的蛋白表达水平（P<0.05）。在降低小鼠血清生化指标、炎性因子和MDA方面，高、中剂量的大蒜辣素优于复方甘草酸苷（P<0.05）。[结论]大蒜辣素可通过抗氧化、抗炎作用以及减少肝细胞凋亡对CCl_(4)引起的急性肝损伤起到缓解作用。该研究显示大蒜辣素有望成为新型保肝药物在兽医临床中应用。

将 30日龄AA肉鸡在 ( 4 0± 1)℃高温中分别持续 2、 3、 5和 10h ,定期剖杀 ,进行临床血液病理学、组织病理学和免疫组织化学检测。结果表明 :在热应激 2～ 5h内 ,受试鸡外周血液中肌酸激酶活性持续升高 (P

用α-半乳糖苷酶对猪血红细胞进行处理后,输入到犬的体内,观察输血前后犬的临床指标变化,并检测其血常规和尿常规指标.待犬的临床指标和尿常规、血常规指标都恢复正常后进行第2次输血,以探讨异源猪红细胞输给犬的可能性.结果表明,2次输血均未引起明显的临床异常反应,提示猪红细胞用于犬异源输血存在可能性.

在脑膜炎奈瑟球菌(NM)菌血症家兔模型中,用细胞组织化学法观察5%碳酸氢钠溶液对心肌细胞器变性的影响。24只家兔均分为对照组、NM组、碳酸氢钠组(Sb组)、高渗盐水组(Hs组)。其中NM组、Sb组、Hs组动物分别静脉注射1.0×1011CFU.kg-1的NM;对照组动物静注生理盐水1 mL.kg-1。60 m in后,所有动物都静脉注射等量液体(3.3 mL.kg-1):对照组、NM组为生理盐水,Sb组为5%碳酸氢钠,Hs组为3.5%氯化钠。NM攻击120 m in后处死动物,观察心肌细胞超微结构,检测碱性磷酸酶、酸性磷酸酶活性变化。结果显示:菌体攻击引起心肌形态学改变,心肌内碱性磷酸酶分布异...