- 年份
- 2024(1417)
- 2023(2030)
- 2022(1744)
- 2021(1551)
- 2020(1400)
- 2019(3158)
- 2018(3078)
- 2017(5427)
- 2016(3229)
- 2015(3766)
- 2014(3590)
- 2013(3593)
- 2012(3594)
- 2011(3364)
- 2010(3304)
- 2009(3040)
- 2008(2993)
- 2007(2772)
- 2006(2509)
- 2005(2294)
- 学科
- 济(10387)
- 经济(10368)
- 管理(6615)
- 业(6202)
- 学(6036)
- 企(4886)
- 企业(4886)
- 方法(4721)
- 数学(4030)
- 数学方法(3952)
- 中国(2952)
- 农(2857)
- 水产(2586)
- 财(2554)
- 动物(2317)
- 制(2191)
- 业经(2040)
- 动物学(2026)
- 农业(1985)
- 贸(1913)
- 贸易(1911)
- 易(1858)
- 理论(1776)
- 及其(1775)
- 地方(1715)
- 和(1690)
- 融(1675)
- 金融(1675)
- 银(1568)
- 体(1567)
- 机构
- 大学(50759)
- 学院(48806)
- 研究(24529)
- 农(20315)
- 科学(20017)
- 农业(16899)
- 中国(16623)
- 济(15334)
- 所(15321)
- 经济(14936)
- 研究所(14398)
- 业大(13571)
- 管理(12477)
- 京(12220)
- 室(11417)
- 实验(10678)
- 理学(10561)
- 农业大学(10479)
- 实验室(10343)
- 理学院(10330)
- 中心(10220)
- 业(10064)
- 省(9926)
- 管理学(9893)
- 管理学院(9843)
- 重点(9837)
- 科学院(8820)
- 院(8802)
- 江(8450)
- 技术(8284)
共检索到76583条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘俊清 陈立勇 陈尚武 张文 马会勤
本试验以无花果的根、茎、叶、果作为材料,比较了CTAB法和Trizol法对无花果材料RNA的提取效果。以CTAB法提取的不同无花果材料的RNA为模板,反转成cDNA第一链,通过半定量RT-PCR,研究了植物常用内参基因18SrRNA、Actin和Tubulin的表达量变化。结果表明:CTAB法是适合不同无花果材料的RNA提取法;18SrRNA在无花果不同组织中的表达水平较高,且相对稳定,Tubulin在无花果不同组织中相对表达量较低,且相对稳定,是研究无花果不同组织基因表达水平较为适宜的内参基因。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
赵晓 马会勤 陈尚武 徐海英
葡萄果实发育后期基因表达水平的变化对果实品质形成具有重要影响,内参基因的选择是基因表达定量分析的关键影响因素。本试验以雷司令葡萄品种花后50、75和95 d的果实为材料,通过半定量RT-PCR,研究了常用持家基因Actin、Tubulin、GAPDH1、8 S rRNA的表达变化,探讨其作为葡萄果实发育后期基因表达半定量分析内参基因的可行性。结果表明:18 S rRNA的表达水平高,且最稳定,其次是Actin,而Tubulin和GADPH的相对表达水平较低;对VvTLP、GHF17 P和VvASR3个功能基因在不同果实材料中的表达水平进行半定量RT-PCR,VvTLP和VvASR的相对表达水平...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
阮小凤 Jelkmann Wilhelm 马锋旺
介绍了一种从木本植物组织中获得高质量RNA的快速、简单和高效的核酸提取方法。该方法是基于核酸的二氧化硅捕获,避免了使用苯酚、氯仿等有机溶剂。利用该方法从樱桃组织中提取的总RNA用RT-PCR技术检测PDV,PNRSV均获得成功。从感病植株的一年生枝的叶片、韧皮部及芽组织中扩增出了预期的目的片段,即172和449bp,而健康组织中无此扩增带。该法提取的总RNA用于RT-PCR技术检测,其敏感性至少与商业出售的QiagenRNeasy提取试剂盒相当,但简单经济。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈观水 潘大仁 周以飞 林生 高丽华 杨志伟
为进一步研究甘薯病原微生物的侵染对甘薯病程相关非表达子1基因(NPR1)表达的影响,以甘薯肌动蛋白(β-ac-tin)基因为内参照基因,提取甘薯叶片总RNA,反转录为cDNA,同批异管对该2个基因进行PCR扩增.通过对循环数的优化和对体系重复性、准确性的分析,建立了一个稳定、方便的半定量RT-PCR体系.
[期刊] 华北农学报
[作者]
李亚青 葛荣朝 赵保存 沈银柱
利用RT-PCR法检测在盐、ABA、冷胁迫下TaGSK1基因的表达,结果表明,该基因在这几种胁迫下的表达均有提高,说明TaGSK1基因在对抗盐、ABA和冷逆境胁迫信号通路中具有重要作用。
关键词：
TaGSK1基因 RT-PCR 基因表达
[期刊] 西南农业学报
[作者]
吕广磊 付坚 和志娇 白现广 蔺忠龙 黄兴奇 杨和生 程在全
以从疣粒野生稻受白叶枯病菌诱导所建的差减文库中筛选出的一个具有CC-NBS-LRR抗病结构域的基因(克隆号为ME281),用半定量RT-PCR法,以肌动蛋白(β-actin)基因为内参,研究疣粒野生稻抗白叶枯病相关基因ME281基因mRNA的表达水平。通过对PCR体系中循环次数及Mg2+浓度的优化,最终建立了一个稳定、方便的半定量RT-PCR体系。通过ME281基因与β-actin基因PCR产物的灰度之比,确定ME281为诱导性表达,并进一步推测其为疣粒野生稻抗白叶枯病相关基因,甚至为抗病基因。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
韩彩霞 赵德明 吴长德 宁章勇 杨建民 刘美丽 马李颖
为快速、准确定量绵羊PrP基因的mRNA,建立了绵羊PrP基因实时荧光定量聚合酶链反应检测方法。根据已报道的绵羊PrP基因序列,设计合成引物;采用RT-PCR方法扩增目的片段;构建标准重组质粒制备标准曲线,用于样品检测。结果发现,中枢神经系统组织PrP基因的表达量(copies/ng总RNA,39420)比外周组织(为7845)的高;在中枢神经系统中,脑干的PrP基因的表达量最高(为67020);外周器官中,淋巴结PrP基因的表达量最高(为29086),肾脏的表达量最低(为125)。建立绵羊PrP基因实时荧光定量PCR方法,对PCR扩增反应中每一个循环的产物进行定量分析,为进一步研究绵羊组织器...
[期刊] 华北农学报
[作者]
牛素清 白晨 张惠忠 李晓东 付增娟 赵尚敏 斯琴巴特尔 轩继雨 李树生
为选择较为适合甜菜总RNA的提取方法,构建和优化RT有效体系。以田间甜菜叶片、根毛及根表皮为材料,研究了提取甜菜总RNA的方法以及利用RT-PCR技术进行甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)的检测。研究表明,获得良好的RT-PCR扩增效果,RT体系中dNTPs浓度、引物、AMV、模板RNA的浓度要分别达到1 mmol/L,1μmol/L,0.1 U/μL,0.01μg/μL较好。PCR体系中dNTPs浓度、引物、TaqDNA聚合酶、Mg2+的浓度要分别达到0.1 mmol/L,0.1μmol/L,0.01U/μL,1.48 mmol/L效果较好。RT-PCR法对BNYVV检测,可作为甜菜品种(育种材...
关键词：
甜菜 甜菜坏死黄脉病毒 RT-PCR
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李玉保 鲍恩东 赵茹茜 王志亮
根据hsp70、hsp90和GAPDH基因mRNA序列,设计并合成3对引物,将PCR扩增的基因片段克隆到pGEM-T载体,重组质粒经筛选、鉴定,体外转录出RNA,系列稀释作为阳性标准品,用于标准曲线的绘制和样品检测,并用持家蛋白GAPDH基因对样品进行归一化,建立了一步法实时荧光定量RT-PCR技术平台,并对其扩增效率、敏感性、特异性进行了检测。结果证明,建立的一步法荧光定量RT-PCR技术可以真实地反映反应管中模板的数量,可用于猪hsp70、hsp90和GAPDH基因mRNA水平的检测。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
储岳峰 颜新敏 李祥瑞 胡元亮
应用半定量RT-PCR方法,测定了9种中药成分对小鼠脾脏T细胞IL-2mRNA水平的影响。结果显示,体内注射黄芪多糖、淫羊藿多糖、当归多糖、蜂胶黄酮和黄芪皂甙能够使ConA诱导的小鼠脾T细胞IL-2mRNA水平显著升高,蜂胶多糖、板兰根多糖、人参皂甙、淫羊藿黄酮不能影响细胞内IL-2mRNA丰度;中药成分体外诱导时与体内应用时的作用效应相同,但与对照相比较,蜂胶多糖在体外能够显著促进IL-2mRNA的诱生,与体内不同。
[期刊] 华北农学报
[作者]
苏岭 李绍戊 王荻 刘红柏 卢彤岩 尹家胜
依据GenBank已公布的鲫鱼热激蛋白70(Heat shock protein70,HSP70)和beta-actin mRNA序列,分别设计两对引物,应用半定量RT-PCR方法检测应激处理后不同恢复时期鲫鱼(Carassius auratus)肝脏中HSP70 mRNA的表达情况。结果表明,诱导后肝脏组织中HSP70 mRNA的表达量呈现时间依赖性,存在先升高后回落的趋势。在诱导后1h即有所升高,在4h时达到最高值,之后逐渐降低,至48h,表达量降至最初值。研究结果为鲫鱼HSP70的研究提供了基础数据,也为将HSP70用作鱼类生理状态的诊断提供了理论依据。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王海鸿 雷仲仁
【目的】比较温度胁迫对两种生物型烟粉虱体内hsps诱导表达的差异。【方法】根据烟粉虱hsp70基因、hsp90基因和18Sr RNA序列,设计并合成引物用于实时定量RT-PCR,扩增产物连接到质粒pMD18-T载体上,重组质粒经筛选、签定和10×梯度稀释后作为模板,用于标准曲线的制作和样品检测,检测温度胁迫对B型和ZHJ-1型烟粉虱hsp70和hsp90mRNA转录水平的诱导情况。【结果】在受到34℃、37℃、40℃和43℃的高温胁迫时,两者hsps的诱导水平无显著差异(P>0.05);在受到4℃、7℃、10℃和13℃的低温胁迫时,B型烟粉虱体内hsps的诱导表达水平显著超过了ZHJ-1型烟粉...
[期刊] 华北农学报
[作者]
马鹏 李林杰 常秋燕 王悦萦 郭富城 刘萍 马晓霞 马忠仁
利用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法和RT-PCR方法建立2种有效地实验室检测牛病毒性腹泻病毒的方法。根据Gen Bank中登录的牛病毒性腹泻病毒基因序列,选取14株BVDVⅠ型和7株BVDVⅡ型,经序列比对后,设计合成1对特异性引物,建立了检测BVDV的RT-PCR方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。通过对RT-PCR方法和SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的特异性、灵敏性和重复性进行检测。结果显示,该方法可从BVDV标准毒株Oregon C24V中扩增出250 bp的特异性片
[期刊] 草业科学
[作者]
杜江 马振男 王德富 牛颜冰
鹅绒藤（Cynanchum chinense）是一种传统中药，为明确造成鹅绒藤叶片花叶症状的原因，本研究采用小RNA深度测序技术结合RT-PCR的方法鉴定引起山西太谷鹅绒藤病毒花叶症状的病原，并通过生物信息学的手段对病毒序列进行分析。结果表明，鹅绒藤样品经小RNA深度测序技术共获得15 039 334个原始序列，将拼接contigs与NCBI中的病毒数据库进行比对注释，结果显示为苜蓿花叶病毒（AMV）和黄瓜花叶病毒（CMV）。利用特异引物克隆了AMV和CMV的外壳蛋白（CP）和移动蛋白（MP）基因全序列，分别命名为AMV-BR和CMV-BR。通过序列比对分析，发现AMV-BR CP氨基酸序列和核苷酸序列与AMV分离物AMV-Gyn（MH332899）、Dich-rep（MW835989）和VIC-320（MF075254）的相似性均达到100%；MP氨基酸序列和核苷酸序列与AMV分离物AMV-Gyn（MH332899）的相似性最高，均为99.3％。CMV-BR CP氨基酸序列和核苷酸序列分别与CMV亚组ⅠA中CMV分离物YA17（MH119159）的相似性最高，分别为100％和99.1％；MP氨基酸序列和核苷酸序列与CMV亚组Ⅰ分离物PV-0185（ON013887）的相似性最高，分别为98.2％和96.4％。MP和CP氨基酸序列系统进化分析表明，CMV-BR属于CMV亚组Ⅰ中的成员。这是首次在山西鹅绒藤上检测到AMV和CMV，该研究有助于深入了解AMV、CMV的分子进化，也为鹅绒藤病毒病的防治提供一定的理论依据。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张云 王亚宾 陈丽颖 张红英 侯贝贝 崔保安 胡慧
为建立猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank收录的TGEV-Miller毒株的S基因序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法从疫苗株中扩增TGEV S基因的部分保守片段,并克隆到pGEM-T Easy载体上,得到重组质粒作为荧光定量RT-PCR检测的标准模板,进行SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR扩增,并制作标准曲线,建立TGEV的荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明:该方法检测灵敏度可达30拷贝/μL,与猪圆环病毒、猪乙型脑炎病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒和猪流感病毒和猪细小病毒不发生交叉反应,具有重复性好、特异...
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
