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[期刊] 淡水渔业
[作者]
朱佳杰 沈夏霜 罗伟 敖秋桅 谭芸 罗永巨 蒋和生 甘西
为探讨无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染罗非鱼(Oreochromis spp)的致病途径。采用腹腔注射、灌胃和浸泡三种方式对吉富罗非鱼进行无乳链球菌(HN016菌株)胁迫感染,利用平板活菌计数法统计三种方式感染后病原菌在体内组织的分布。注射和灌胃两种方式感染后均出现典型的链球菌感染发病症状,其中注射组在感染24 h后出现死亡高峰,死亡率为92.5%;灌胃组感染48 h后出现死亡高峰,死亡率为90%;而浸泡组,感染后均没有出现明显的发病症状,也没有出现死鱼。注射组和灌胃组在感染后2 h,其脾脏、肝脏、前肾、胃、腮、皮肤和肌肉组织中均可分离出病原菌,5 h后在脑组织中均可分离出病原菌,8 h后各组织分离出的病原菌数达到峰值;而浸泡组在感染8 h后才从各组织中分离出病原菌,且它们的数量均低于同时期的注射组和灌胃组。注射和灌胃两种方式可使吉富罗非鱼快速感染无乳链球菌而发病,而浸泡方式感染后病原菌虽可以侵入机体,但不表现出症状。由此,我们推测在自然条件下养殖的罗非鱼是通过口腔采食携带无乳,链球菌的食物而被感染。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
郭富强 张德锋 曹建萌 刘志刚 可小丽 卢迈新
本研究以腹腔注射无乳链球菌(Streptococcusagalactiae,WC1535菌株)后的尼罗罗非鱼(Oreochromisniloticus,GIFTstrain)为研究对象,研究不同水温下无乳链球菌在尼罗罗非鱼体内的动态分布及消除规律。首先,分析25℃、29℃和33℃3个实验组罗非鱼的感染累积死亡率;其次,对3个实验组罗非鱼进行无乳链球菌的体外分离、培养和计数;然后,分析感染后不同实验组罗非鱼脑、肝脏、脾脏和肾脏组织中无乳链球菌的浓度。结果显示,随着水温的升高罗非鱼的累积死亡率也随之升高,25℃、29℃和33℃组的累积死亡率分别为6.67%、25.56%和78.90%。菌落统计结果显示,随着水温的升高,无乳链球菌在罗非鱼体内的增殖速度加快,同时,单位质量组织(脑、肝脏、脾脏和肾脏)中无乳链球菌的最大载菌量也随之升高。本研究还发现,无乳链球菌在罗非鱼脾脏中的浓度最高,在肾脏中的存活时间最长。综上可知,尼罗罗非鱼感染无乳链球菌后,体内各组织中链球菌的增殖、消除速度均与水温密切相关。本研究为研究无乳链球菌的致病机制奠定基础,也为通过合理调控水温及施药等措施防治尼罗罗非鱼链球菌病的暴发提供科学依据。
[期刊] 华北农学报
[作者]
朱佳杰 付强 敖秋桅 陈明 谭芸 李莉萍 蒋和生 甘西
为研究吉富罗非鱼感染无乳链球菌后肝脏组织多肽表达变化，采用串联飞行时间质谱仪（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ）扫描了吉富罗非鱼感染无乳链球菌２４ ｈ后与未感染的罗非鱼肝脏组织的多肽质谱峰值差异，并对表达差异的多肽峰值进行蛋白质质谱鉴定和功能分类。结果显示：对照组检测到信噪比（ｓ／ｎ）大于５０的质谱峰为４４个，试验组为５２个，发现６个质谱峰（Ｍ／ｚ １ ０８２，１ １６１，１ １９６，１ ４５９，１ ７４０，１ ８７７）在感染２４ ｈ后与未感染鱼之间的表达差异明显，其中质荷比（Ｍ／ｚ）１ １９６在试验组表达下降，而质荷比（Ｍ／ｚ）１ １６１和１ ４５９则是上升。共鉴定得到１９种多肽，其中１４个表达上．．．
关键词：
吉富罗非鱼 无乳链球菌 多肽 差异表达
[期刊] 水产学报
[作者]
朱佳杰 沈夏霜 付强 陈明 周宇 谭芸 甘西
为研究罗非鱼感染无乳链球菌前后肝脏组织蛋白质的表达变化。本研究以吉富罗非鱼为材料,采用双向电泳技术分析其在无乳链球菌感染胁迫下24 h、48~144 h、12 d与对照组(未感染)肝脏组织蛋白质组的变化,对差异表达蛋白进行质谱分析鉴定。结果显示:吉富罗非鱼在无乳链球菌胁迫下,3个实验组的蛋白质图谱与对照组相比存在显著差异,共有30个蛋白质点发生显著改变,其中13个表达上调,15个下调,2个蛋白质点在感染12 d后消失。通过MALDI-TOF/TOF 4800质谱分析和数据库检索对这些蛋白质进行了功能分类,发现它们涉及到能量代谢、细胞防御与应激、消化免疫、抗氧化与排毒等许多方面。推测这些蛋白质可...
[期刊] 水产学报
[作者]
崔静雯 汪开毓 贺扬 陈德芳 黄小丽 王均 龙波 张丽杰 蒋洁
针对尼罗罗非鱼无乳链球菌病的致病机制，本实验建立了无乳链球菌感染尼罗罗非鱼致脑膜炎的模型，并制定相应的临床症状及组织病理学评分系统对其进行了研究。将４３尾健康尼罗罗非鱼随机分为４组：对照组（ｎ＝１０）和３个实验组（ｎ＝３３）。３个实验组根据不同感染剂量分为１．０×１０～６ｃｆｕ组（ｎ＝１１）、１．０×１０～７ｃｆｕ组（ｎ＝１１）和１．０×１０～８ｃｆｕ组（ｎ＝１１）。实验组分别将１．０×１０～６、１．０×１０～７和１．０×１０～８ｃｆｕ的无乳链球菌菌液腹腔注射尼罗罗非鱼复制脑膜炎模型。对感染尼罗罗非鱼的临床症状、剖检病变、脑组织（端脑、中脑、小脑、延脑）病理学进行判定，并结合细菌学检测，按照拟．．．
关键词：
尼罗罗非鱼 无乳链球菌 脑膜炎 模型
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
董兰芳 张彩群 刘家辉 郑晓利 童潼 张琴 王秀华 杨慧赞
本实验旨在研究饲料中添加酵母水解物对吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)生长性能、免疫力以及抗病力的影响。在基础饲料中添加0% (对照组)、0.5%、1.0%、1.5%和2.0%的酵母水解物制成5种实验饲料，对5组初始体重为(25.80±0.45) g的吉富罗非鱼进行为期8周的养殖实验，每组3个重复，每个重复30尾鱼。实验结束后，每个重复选择12尾鱼进行无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)攻毒实验，每个重复选择12尾鱼进行攻毒，每尾鱼腹腔注射0.2 mL浓度为8.3×10~(5) CFU/mL的菌液，连续观察14 d，统计累积死亡率。结果显示，随着酵母水解物添加量的增加，吉富罗非鱼终末体质量(FBW)和特定生长率(SGR)均呈先显著上升(P<0.05)后下降的趋势。回归分析表明，当SGR达到最大值时，对应的酵母水解物添加量为1.29%。罗非鱼血清一氧化氮合酶、酚氧化酶、酸性磷酸酶、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性均随饲料中酵母水解物添加量的提高呈现上升后下降的趋势(P<0.05)，添加量1.5%时达最大值。饲料添加酵母水解物对吉富罗非鱼无乳链球菌的抵抗力有显著影响(P<0.05)，除添加量0.5%实验组死亡率与对照组差异不显著外，其他实验组罗非鱼的死亡率均显著低于对照组(P<0.05)。本研究中，饲料添加酵母水解物可有效提高吉富罗非鱼的生长性能、免疫力及抗病力，且在添加量为1.5%时，效果最显著。
[期刊] 水产学报
[作者]
祝璟琳 季桓涛 肖炜 李大宇 邹芝英 杨弘 李庆勇 朱德兴
为探讨池塘种植鱼腥草对无乳链球菌引起吉富罗非鱼肝脏损伤修复作用研究，在养殖池塘中分别种植0%（对照组）、5%、10%、15%比例池塘面积的鱼腥草，养殖90 d后进行无乳链球菌人工感染，分别在感染后0、24、48和72 h采集肝脏，进行肝脏生化、抗氧化性能、组织病理和HSP 70表达研究。结果显示，感染后48和72 h对照组肝脏ALT和AST活力最高，种植鱼腥草各组ALT活力在感染前后均无显著性变化，感染后72 h，10%组AST活力已恢复到感染前水平。抗氧化指标显示，种植鱼腥草能减缓链球菌感染引起吉富罗非鱼肝脏T-AOC下降，显著提高肝脏中SOD、GSH-PX、CAT和 NOS等抗氧化酶的活性，增加自由基清除能力，减少脂质过氧化MDA的产生。组织病理学观察显示，对照组罗非鱼感染后48 h 肝窦明显淤血，肝索排列紊乱，肝细胞脂肪变性，而各种植鱼腥草组罗非鱼在感染后仅表现为肝细胞明显嗜酸，肝窦轻度扩张。定量PCR结果显示，每组罗非鱼肝脏HSP 70表达量在感染后都显著性升高，感染后各时间点对照组的HSP 70表达量均显著高于鱼腥草种植组。研究表明，种植鱼腥草能显著改善链球菌感染所造成的吉富罗非鱼肝脏AST和ALT上升，提高抗氧化应激能力，减轻链球菌感染引起病理损伤；吉富罗非鱼通过肝脏HSP 70高表达促进受损蛋白质的早期修复与降解，种植鱼腥草具有抗炎作用和提高鱼体抵御病原菌的能力。
[期刊] 水产学报
[作者]
张新艳 樊海平 钟全福 卓玉琛 林煜 曾占壮
从患暴发性流行病罗非鱼的肝脏中分离获得一株细菌TL60829NA,将TL60829NA对罗非鱼进行人工感染致病性试验,试验感染罗非鱼表现出自然发病症状,确认分离菌株为罗非鱼暴发性流行病的致病菌。分离株菌经形态学观察、Bio Merieux Vitek全自动微生物分析系统GPI测定卡分析和16S rRNA特异性基因序列与NCBI中收录的其它引起罗非鱼病害的链球菌的16S rDNA序列构建的系统发育进化树显示,分离细菌与其它无乳链球菌的16S rDNA序列构成一个进化分支,而海豚链球菌则构成另一分支,确定分离菌株为无乳链球菌(Streptococcus agalaciate)。分离菌株对氨苄西林、...
[期刊] 水产学报
[作者]
祝璟琳 邹芝英 李大宇 肖炜 韩珏 杨弘
为了解尼罗罗非鱼感染无乳链球菌后各组织的病理变化,运用革兰氏染色和电镜负染技术对一株从自然发病的尼罗罗非鱼上分离的无乳链球菌进行形态观察,采用组织切片和超薄切片电镜技术对患病尼罗罗非鱼的肝脏、脾脏、肾脏、脑、心肌、骨骼肌、肠、鳃等8种组织进行病理学研究,探讨该病的致病机理。结果显示,革兰氏染色呈阳性,负染后透射电镜观察多数细菌呈链状排列;组织病理学变化主要是各内脏器官的广泛充血、水肿、变性和炎性细胞浸润,严重的细胞坏死;超微病理显示,大量球菌侵染脾脏等内脏组织,破坏细胞结构和各种细胞器;细胞界限模糊,细胞核畸形,线粒体肿大,嵴断裂,溶解;粗面内质网肿大、核糖体脱落;细胞质空泡化严重;心肌和骨骼...
关键词：
尼罗罗非鱼 无乳链球菌 病理学 超微结构
[期刊] 水产学报
[作者]
祝璟琳 李大宇 邹芝英 肖炜 韩珏 杨弘
为探究高水温对尼罗罗非鱼无乳链球菌病暴发的影响，以体质量为（６２．０±３．３３）ｇ的尼罗罗非鱼为研究对象，设置生长最适宜组（２９°Ｃ）和高温应激组（３３°Ｃ）２个处理水平，暂养７ ｄ后分别进行人工感染实验统计累计死亡率，并于攻毒后０、１２、２４、４８、９６和１２０ ｈ采集血液和组织样本，开展高温应激下无乳链球菌感染对尼罗罗非鱼血清生化指标和组织病理影响的研究。结果显示，水温３３°Ｃ高温应激组尼罗罗非鱼累计死亡率显著高于２９°Ｃ组；谷丙转氨酶（ＡＬＴ）活性在感染９６ ｈ之后３３°Ｃ组的值显著高于２９°Ｃ组；谷草转氨酶（ＡＳＴ）活性在感染４８ ｈ之后３３°Ｃ组的值显著高于２９°Ｃ组；钾（Ｋ＋）和钠．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
魏顺 张泽 李宇辉 胡敏强 余岸艮 张华 兰江风 张志 颜远义 林蠡
为了调查广东省惠州、肇庆、珠海、湛江４个吉富罗非鱼主养区链球菌病的流行情况和耐药性，并进一步分析β－内酰胺酶基因与青霉素类药物的耐药性关系。本实验通过传统的方法对菌株进行分离纯化，扩增特异性基因ｃｆｂ以及１６ｓ ｒ ＤＮＡ对各菌株进行鉴定；采用ｋ－ｂ法测定分离菌株的药物敏感性；通过Ｐｃｒ检测β－内酰胺酶类基因在分离菌株中的分布情况，并用ｓｔＡｔｉｓｔｉｃ６．０统计分析各β－内酰胺酶基因与青霉素类药物的耐药关系。实验结果表明，吉富罗非鱼无乳链球菌的阳性率从高到低的顺序为惠州（４６．４６％）＞湛江（４３．２４％）＞肇庆（１７．３０％）＞珠海（４．１７％）；药敏结果显示各地区无乳链球菌分离株对青霉素．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
杜苏兰 雷连成 王玲玲 张付贤
为探明湖北荆州某养殖场吉富罗非鱼(Genetic Improvement of Farmed Tilapia, GIFT)致病原因，对感染的罗非鱼精准施治，本研究从湖北荆州某养殖场患病吉富罗非鱼脑组织分离到一株优势菌。结果显示：该菌在BHI平板上生长出光滑、圆形、白色菌落，显微镜观察发现细菌呈单个、成对或球形短链状，长短不一，且革兰氏染色为阳性。经16S rRNA序列、PCR鉴定和生理生化特性鉴定，确定分离菌株为罗非鱼无乳链球菌，命名为JZ-202108。分离菌株JZ-202108血清型为Ⅰa型，携带gapC、sodA、bac、bca和hly等5种毒力基因。分离菌株JZ-202108人工感染吉富罗非鱼的症状与自然发病症状类似，出现神经症状和严重的内脏出血现象，并从脑组织中分离到强毒株，其LD_(50)为3.4×10~5 CFU/尾，对吉富罗非鱼致病性较强。药物敏感性实验表明，分离菌株JZ-202108对β-内酰胺类、头孢类药物敏感，对氨基酸糖苷类药物耐药；乌梅、黄连、朱砂、野菊花等中药对JZ-202108菌株有明显抑制作用，乌梅和野菊花在菌株JZ-202108感染吉富罗非鱼的体内治疗效果最佳。生产中可考虑用β-内酰胺和头孢类抗菌药物，以及中药乌梅和野菊花等药物进行治疗。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吴颖瑞 龚庆芳 方宏 梁万文 陈明 袁耀彬 何瑞杰
【目的】研究中草药对罗非鱼无乳链球菌和海豚链球菌的抑菌活性,为生产中罗非鱼链球菌病害的防治提供参考。【方法】采用琼脂扩散法,测定153种中草药乙醇提取物对罗非鱼(Tilapiasp.)无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)和海豚链球菌(S.iniae)的体外抑菌作用,并采用二倍稀释法测定中草药乙醇提取物的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。【结果】153种中草药中,博落回(Macleaya cordata)、十大功劳(Mahonia fortunei)、三颗针(Berberis spp.)、紫草(Lithospermum erythrorhizon)、田七须...
关键词：
中草药 无乳链球菌 海豚链球菌 抑菌活性
[期刊] 中国水产科学
[作者]
余泽辉 张佳 耿毅 邓梦玲 汪开毓 黄小丽 陈德芳 王均
2012–2013年四川齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)养殖场流行一种临床特征为突眼、体表出血和神经症状的传染病,在肝、肾涂片检查中发现链状G+球菌。从自然发病齐口裂腹鱼分离到2株形态与涂片检查一致的G+球菌(DML120817,YZH130830),其在脑心浸液培养基(BHI)平板上28℃培养48 h,形成白色圆形、表面光滑、边缘整齐的针尖大小菌落。经人工感染实验证实分离菌株为该病的病原菌。根据分离菌株的形态学和生理生化检测结果初步判定其为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae);16S r RNA基因序列分析表明,2分离株(Gen Bank登录...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
邵辰 易弋 黎娅 黄荷 伍时华 杨军
根据无乳链球菌（ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕＳ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）ｃｆｂ基因序列，设计、合成２对引物，优化扩增条件，建立了快速高灵敏度鉴别无乳链球菌的巢式ｐｃｒ方法。结果显示：使用该方法对罗非鱼（ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉＳ ｍｏＳＳａｍｂｉｃｕＳ）血液样品进行检测，可检测到活菌浓度为８．７×１０４ｃｆｕ／ｍ ｌ的无乳链球菌。对采自广西地区受无乳链球菌感染的１９份罗非鱼样品进行检测，１８份可获得目的片段，扩增到的序列均为无乳链球菌ｃｆｂ基因序列，检测准确度达到９４．７％。
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