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[期刊] 中国农业科学  [作者] 王爱萍  李发弟  胡骁飞  史兆国  周景明  杜晓明  王林林  禹乐乐  刘明阳  
【目的】研制新霉素(neomycin,NEO)免疫膜层析快速检测试纸。【方法】建立分泌抗新霉素单克隆抗体(NEO mAb)杂交瘤细胞株,用胶体金免疫膜层析试验(GICA)制备NEO残留快速检测试纸(NEO-Strip),并对其性能进行鉴定。【结果】抗新霉素单克隆抗体的亲和力常数为3.75×1010 mol.L-1;制备的NEO-Strip目测限为50 ng.mL-1;试纸可特异性检测NEO,与庆大霉素、链霉素、妥布霉素、紫苏霉素、莱克多巴胺、沙丁胺醇、泰乐菌素和氯霉素等其它药物均无交叉反应性;就定性检测而言,其结果与高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS-MS)完全一致;不同的基质液对试纸的敏...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 李向梅  王战辉  肖希龙  王照鹏  温凯  吴小平  夏曦  武晋孝  江海洋  
【目的】喹诺酮类药物和庆大霉素均为高效、广谱抗菌药物,对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有显著的抗菌效果,是中国畜牧业和水产业中常用的两类兽药。由于这两类药物在动物源性食品中的残留可能导致对人类健康的危害,因此,为了保护消费者的健康,研究和制定动物源性食品中同时检测这两类药物的残留检测方法对完善中国的食品安全监测体系具有重要意义。【方法】建立了同时检测牛奶中13种喹诺酮类和庆大霉素残留的胶体金免疫层析方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并对喹诺酮类和庆大霉素单克隆抗体按比例进行混合标记。同时,采用方阵法系统研究了胶体金标记这两类抗体时的pH值和抗体用量对灵敏度的影响,并对这两类药物抗...
[期刊] 浙江农林大学学报  [作者] 章先  王继璇  程高钏  李可  张晓峰  孙孟娇  程昌勇  宋厚辉  
【目的】真菌毒素可污染农产品和动物源性食品,其中黄曲霉毒素B_1(AFB_1)毒性强、危害大,建立AFB_1快速、高灵敏和便捷的检测方法对于监测相关产品中AFB_1污染水平,保障人和动物健康均具有重要意义。本研究基于侧向层析技术原理,采用竞争模式,优化建立免疫层析检测方法,以实现AFB_1的快速定性检测和定量分析。【方法】通过比较分析不同粒径金颗粒标记抗体效果,优化确定免疫层析各组分材料类型、相关缓冲液配方及最佳使用质量浓度,建立AFB_1高灵敏定性定量免疫层析检测方法。【结果】优化建立的AFB_1免疫层析检测法在实际样本中的定性和定量检测限分别为2.5和0.5μg·kg~(-1),灵敏度高、特异性强,与其他常见真菌毒素无交叉反应,加标回收实验结果显示:该方法准确稳定,且对AFB_1天然污染样本的定量检测结果与商品化试剂盒及LC-MS/MS一致性较好。【结论】本研究制备的免疫层析检测法可用于样本中AFB_1污染的快速定性检测与定量分析,适合缺乏实验条件的基层检验检疫机构和农产品加工企业对大量样本进行快速筛查,样本检测结果疑似阳性再采用仪器法进行确认,可降低检测成本,提升检测效率,同时为建立其他病原微生物免疫层析检测方法提供参考。图9表2参26
[期刊] 中国农业科学  [作者] 张兆威  李培武  张奇  丁小霞  
【目的】黄曲霉毒素严重污染农产品,威胁人畜生命健康,是政府重视、社会关注的一大焦点问题,因此亟需研究建立黄曲霉毒素高灵敏高快速检测方法。目前已研制出高特异性高灵敏度黄曲霉毒素单克隆抗体,本研究旨在应用该抗体,建立黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析快速检测技术,为农产品质量监管、风险评估提供技术支持。【方法】本研究通过将黄曲霉毒素抗体与乳胶铕进行偶联标记,利用自主研制的黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条进行黄曲霉毒素检测,通过检测线T信号值与质控线C信号值的比值和标准溶液浓度的自然对数值实现定量。针对花生、稻米、植物油等不同农产品,研究建立样品粉碎均质提取一体化技术。对铕标记时间分辨荧光免疫层析检...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 徐飞  周洁  吴超  王建芬  丁双阳  李秀波  
【目的】卡那霉素是一种在奶牛兽医临床常用药物,其在牛奶中的残留不容忽视。荧光微球作为一种新型的荧光示踪物,近年来在小分子快速检测方面呈现出独特的优势,试验开展了卡那霉素荧光微球免疫层析定量方法的研究,旨在为牛奶中卡那霉素药物的快速筛选提供新型有效的检测手段。【方法】采用戊二醛法和过碘酸钠法制备了两种卡那霉素的包被抗原(KANA-GA-OVA1、KANA-I2-OVA2),抗卡那霉素的单克隆抗体通过蛋白G免疫亲和柱进行纯化后,采用碳二亚胺法与荧光微球进行了共价偶联,成功制备了抗体-荧光微球标记物。免疫层析试纸条方法采用微孔测定法。包被卡那霉素包被抗原的NC膜作为固相载体,荧光微球标记的单克隆抗体...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 孙秀兰  张银志  汤坚  朱瑜  
为了扩大金标免疫层析试条(GICA)检测食品和饲料中黄曲霉毒素B1的应用范围,研究了样品基质对试剂条信号强度的影响,探讨了GICA测定饲料和各种发酵类食品样品时,提取液中NaCl、金属离子(Fe3+,Cu2+,Pb2+,As3+)和脂肪含量对检测结果的影响,并研究了消除影响的方法。结果表明,3种阴性样品(大米、玉米和小麦粉)均存在不同程度的非特异性干扰,大米的影响最小,其次为玉米和小麦粉,大米的最佳稀释倍数为10倍,玉米和小麦粉为30倍;随NaCl质量浓度增加,检测结果有偏向假阳性的趋势;4种金属离子对检测结果的影响程度依次为Fe3+>Cu2+>Pb2+>As3+;随着样品中油脂含量的增高,用...
[期刊] 上海海洋大学学报  [作者] 梁田田  卢玉平  潘迎捷  方国锋  林昕  黄天娇  卢瑛  
调查并比较了野生横纹东方鲀(Takifugu oblongus)与养殖的菊黄东方鲀(Takifugu flavidus)、暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)的毒性。随机选取17尾野生横纹东方鲀并用2%乙酸两次煮沸法提取各组织中河鲀毒素TTX,超滤离心去除杂蛋白,之后采用本实验室制备的免疫磁珠层析试纸条做定性检测,并对筛选出来的典型样本用国标小鼠生物法定量检测毒素含量与定性检测作对照,分析对比各组织TTX含量。野生横纹东方鲀肌肉和精巢TTX含量在0~7μg/g组织,由于个体差异处于无毒或弱毒水平;肝脏和卵巢TTX含量在4~400μg/g组织范围内,属于强毒水平;养殖菊黄东方鲀和暗纹东方鲀各组织均处于无毒水平。
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 王蔚芳  李青梅  郭军庆  雷霁霖  
建立快速、准确、简便易行的病害早期快速检测技术,是从事动物疫病防控研究工作者和产业界人士的迫切愿望。自从开辟免疫分析技术以来,越来越多更灵敏、更便捷的免疫分析方法被开发出来,以胶体金免疫层析法为基础建立起来的快速检测试纸,被认为是当前最快捷、高敏感的一种免疫学检测技术。该项技术真正实现了快速简易检测靶目标,并已在畜牧业中得到普及应用,成为当前畜禽病害早期防控的最有效方法之一。本文就该项技术在畜牧兽医领域的研究进展、应用现状、发展前景进行了介绍、分析和讨论,旨在为水产养殖动物病害的早期诊断提供借鉴,以期获得一种适用于水产动物病害的、专用的快速检测新技术和新产品。
[期刊] 水产学报  [作者] 高红艳  赵金龙  王雅晴  蒋秋燕  黄玉浩  林洪  李振兴  
为实现甲壳类水产品主要过敏原的快速检测,实验使用凡纳滨对虾原肌球蛋白(TM)作为检测靶标,构建了胶体金免疫层析检测方法。使用天然TM分别免疫SD大鼠和新西兰大白兔制备多克隆抗体,以40 nm胶体金标记的鼠多抗作为检测抗体,以兔多抗为捕获抗体,基于双抗体夹心原理组装免疫层析试纸条,并应用于市售食物样品的检测。结果表明,组建的免疫层析试纸条可在5 min之内显示结果,视觉检出限为10 ng/mL,对虾、蟹、克氏原螯虾及美洲螯龙虾等甲壳类水产品的特异性高,但与蛤蜊、扇贝存在微弱的交叉反应;在不含甲壳类水产品的市售食品中的加标回收率为81%~126%,准确性良好;试纸条的批内、批间变异系数低于15%,市售实际食物样品的检测结果与食物过敏原标签一致。研究表明,该方法具有高灵敏度与检测特异性,可在多种基质与商业化食物样品中实现甲壳类过敏原的有效检测,具有较强的实际应用价值。
[期刊] 林业科学  [作者] 白钢  王玉嬿  马洪周  李海燕  杨文博  
以松材线虫的粉碎虫体免疫家兔制备抗血清 ,通过免疫印迹考察抗血清的特异性。利用固相松材线虫抗原和游离线虫抗原同线虫抗体相竞争 ,建立竞争型ELISA法用于疫木中松材线虫的分析。该方法可以直接检测出 10mg的木屑中 0 1μg微量的线虫蛋白 ,约 7条线虫的存在。利用该方法对 2 0个不同地区、树种及类型的松材样品进行检测 ,疫木中松材线虫的检出率为 10 0 % ,但拟松材线虫也呈现了一定的交叉反应。研究结果表明 ,以松材线虫抗原蛋白为指标的免疫学检测方法简便快速、灵敏度高 ,为松材线虫的快速检疫提供一种可能的途径
[期刊] 中国农业科学  [作者] 李华  祭芳  徐剑宏  王裕中  史建荣  
【目的】建立快速、灵敏、有效的毒素检测方法,以保证麦类作物的安全生产以及谷物食品的安全性。【方法】以主要赤霉病菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)为对象,利用半琥珀酰化脱氧雪腐镰刀菌烯醇的牛血清蛋白偶联物(3-HS-DON-BSA)作免疫原,分别采用腹膜腔注射法和颈、背部多点注射法免疫Balb/c小鼠和豚鼠,获得DON的多抗血清,建立间接ELISA检测方法。【结果】多抗豚鼠血清的效价达到1∶6400,而小鼠混合血清的效价则为1∶12800。引起DON抗体最大结合50%抑制时,所需DON及其类似物3-Ac-DON和T-2毒素的量分别为63μg·ml-1、114μg·ml-1和>1000μg·ml-...
[期刊] 沈阳农业大学学报  [作者] 张勇  傅刚  翟峰  朱宇旌  孙景霞  邵彩梅  
为了研究3个不同蛋白质水平(10%、18%、26%)饲粮对肥育猪的钙蛋白抑制蛋白酶(CAST)的影响,对CAST蛋白提取、电泳、转膜等条件进行优化。试验表明:CAST被激活的条件是将蛋白提取液于上样缓冲液95℃煮15min后,立即在冰块上冷却,防止蛋白降解;采用分离胶浓度为10%进行电泳,可以明显检测到68kD、107 kD的CAST;采用预染Marker和DAB染色液可针对性地检测到目的蛋白的位置;利用上述程序检测到了猪CAST两种类型的表达,取得了较满意的结果。
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 徐重新  杨晶祎  陆梦晓  仲建峰  张存政  张霄  何鑫  刘媛  刘贤金  
免疫新西兰大白兔制备Cry1C毒素多克隆抗体,并建立间接竞争时间分辨荧光免疫分析(CI-TRFIA)方法用于食品中Cry1C毒素的残留检测。经4次免疫,采集Cry1C毒素多克隆抗体血清,采用饱和硫酸铵沉淀和ProteinA柱纯化,获得了浓度为3.86mg.ml-1的多克隆抗体,其效价为1:48000。通过制备Eu-N1标记的羊抗兔IgG作为检测抗体,建立Cry1C毒素的CI-TRFIA检测方法,其灵敏度(IC10)为0.074ng.ml-1,中抑制浓度(IC50)是60.16 ng.ml-1,线性检测范围(IC20 ~IC80)在0.96~1 633.60 ng.ml-1;对Cry1B、Cry...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 王战辉  米铁军  沈建忠  
及时、快速和准确地检测粮食中真菌毒素的污染,从而对其进行严格、科学的控制和处理是保障中国粮食安全和人民身体健康的重要途径。基于特异性分子识别的均相荧光偏振免疫分析技术(Fluorescence Polarization Immunoassay,FPIA)兼具高通量、高速度、高灵敏和易于实现自动化等优点,特别适用于大批量粮食样本的快速筛选。文章综述了近10年来荧光偏振免疫分析检测粮食中真菌毒素的研究进展,并着重讨论了荧光偏振免疫分析的发展方向。
[期刊] 林业科学  [作者] 梁善庆  王喜平  蔡智勇  Robert J.Ross  R.Bruce Allison  傅峰  
介绍弹性波层析成像技术应用于活立木内部缺陷检测的研究现状,阐述弹性波的产生、传播途径和成像原理,总结该技术在应用中出现的问题。并使用弹性波层析成像技术对美国林务局纳西比特营地脂松活立木进行检测。结果表明:弹性波层析成像技术能够模拟出不规则树干形状并以二维图像方式直观地显示立木腐朽部位、程度、大小及形状等情况。基于此方法发展的设备,具有检测方便、有效、实用性强等特点。
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