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[期刊] 中国水产科学
[作者]
王志平
本研究首次检测到斑马鱼(Danio rerio)受精卵中存在母源性补体成分C3和Bf。在斑马鱼卵子胞浆中加入适量C3(所有补体激活途径的关键因子)抗体使补体C3沉淀失活,或将卵子胞浆45℃水浴30min(热灭活补体),均可显著降低卵子胞浆的抑菌率,说明斑马鱼卵子胞浆中的补体系统具有免疫活性。在此基础上,通过补体激活途径的抑制实验研究了母源性补体的作用方式。向斑马鱼卵子胞浆中分别加入适量C1q(经典途径关键成分)抗体和C4(同时参与经典途径和凝集素途径)抗体对其抑菌率无显著影响,而加入Bf(替代途径关键成分)抗体却能够显著降低卵子胞浆的抑菌率。另外,在斑马鱼卵子胞浆中加入EGTA螯合Ca2+抑制...
关键词：
母源性补体 检测 溶菌活性 斑马鱼
[期刊] 淡水渔业
[作者]
丁凤玲 魏华 陈阿琴 沙晓姣 任周 余言想
为了阐明p38MAPK(p38丝裂原活化蛋白激酶)的激活在斑马鱼(Danio rerio)卵母细胞第一次减数分裂恢复中的作用,用卵泡刺激素(FSH)、SB203580(p38MAPK抑制剂)、PKA激活剂forskolin单独作用及FSH与SB203580、FSH与PKA抑制剂H89共同培养斑马鱼卵母细胞。采集不同培养时间的卵母细胞,用SDS-PAGE电泳和Western Blot蛋白质免疫印迹技术检测p38MAPK磷酸化,观察生发泡破裂(GVBD)情况。结果表明,斑马鱼卵母细胞在FSH诱发下,p38MAPK活性明显升高;单独添加SB203580斑马鱼卵母细胞p38MAPK活性受到明显抑制,同...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
濮俊毅 黄新新 陆承平
【目的】猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)菌株致病力各异,以斑马鱼为实验动物,建立了较为简便可靠的SS2致病力检测方法。【方法】选用1005尾AB系斑马鱼(Danio rerio)以检测SS2不同分离株的致病力。检测8株基因型均为mrp+ef+、对猪有致病力的SS2菌株。【结果】结果斑马鱼接种菌株12h后呈败血症病变,96h内对斑马鱼的半数致死量(LD50)在5.36×103至5.01×104cfu之间。上述接种菌株的斑马鱼均从体内重新分离到接种菌。同时检测1株基因型为mrp-ef-、对猪无致病力的SS2菌株,斑马鱼接种后96h内不表现任何病变,亦不出现死...
关键词：
斑马鱼 猪链球菌2型 半数致死量
[期刊] 中国水产科学
[作者]
孙效文 梁利群
用 50 0对斑马鱼SSLP标记引物对黑龙江野鲤 (CyprinuscarpiohaematopterusTemmincketSchlegel)和柏氏鲤 (CyprinuspellegrinipellegriniTchang)进行种间遗传差异分析 ,共发现 110个斑马鱼标记在鲤鱼种间表现出差异 ,故可作为黑龙江野鲤和柏氏鲤间的分子标记 ,也可作为建立遗传连锁图谱的遗传标记。
关键词：
黑龙江野鲤 柏氏鲤 斑马鱼 遗传标记
[期刊] 中国水产科学
[作者]
全迎春 梁利群 孙效文 姚昆 雷清泉
用6 072对斑马鱼(Danio rerio)微卫星引物对黑龙江鲤(Cyprinus carpio haematopterusTemminck et Schlegel)、荷包红鲤(Cyprinus carpiovar.wuyuanensis)和柏氏鲤(Cyprinus pellegriniTchang)进行种间遗传差异分析,共发现563个斑马鱼微卫星标记在鲤鱼种间表现出多态性。从中随机抽选25个标记,对斑马鱼和3种鲤鱼的遗传多样性进行分析,使用Phylip3.63软件按照Nei氏标准遗传距离计算种间遗传距离,再用MEGA3.0软件绘制NJ系统发生树,并进行1 000次bootstrap检验系统...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
李国鹏 陈阿琴 曹娜 吴婷婷 魏华
用不同浓度的促滤泡激素(FSH)和17α,20β-双羟孕酮分别作用于斑马鱼卵母细胞。结果表明,1 IU/mL的FSH和5 ng/mL的17α,20β-双羟孕酮对斑马鱼卵母细胞生发泡破裂都具有明显促进作用。其中17α,20β-双羟孕酮的作用效果较好,经过SDS-PDGE电泳和WesternBlot检测发现,5 ng/mL 17α,20β-双羟孕酮对斑马鱼卵母细胞诱导后,分裂原蛋白激酶被激活,生发泡破裂的卵母细胞数目增多。免疫组化检测证实,第Ⅰ期的卵母细胞中分裂原蛋白激酶没有激活,第Ⅱ期、第Ⅲ期细胞质中分裂原蛋白激酶开始激活,第Ⅴ期卵母细胞的胞质与核区同时存在活性的分裂原蛋白激酶,并伴有生发泡破裂...
[期刊] 水产学报
[作者]
郑清梅 叶星 白俊杰 吴锐全 劳海华 罗建仁
采用PCR方法对所克隆的斑节对虾溶菌酶基因的cDNA进行改造,并克隆至含温控启动子PRPL的大肠杆菌表达质粒pBV220,构建斑节对虾溶菌酶表达载体pBV220 lyz。该质粒转化大肠杆菌后经42℃诱导表达。SDS PAGE电泳表明,表达产物中有16kD左右的特异性条带,与预期斑节对虾溶菌酶分子量相符。薄层扫描显示,重组斑节对虾溶菌酶约占全菌总蛋白的32%,纯化后的重组斑节对虾溶菌酶占全菌可溶性蛋白的90%左右。比浊法检测复性后产物的生物活性,结果表明重组斑节对虾溶菌酶的最适pH为6.0,最适温度为40℃。测定了重组斑节对虾溶菌酶对溶壁微球菌和几种鱼病原菌菌株的溶菌活力,结果表明,重组斑节对虾...
关键词：
斑节对虾 溶菌酶基因 原核表达 溶菌活性
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
陶筱帆 谢婷婷 李小霞 罗军涛 白雅静 韩兵社 张俊芳
长散布核元件-1(Long spread nuclear element-1, LINE1)是跳跃基因。前期比较基因组研究发现,南极鱼经历漫长的低温适应进化后,与南极圈外的同亚目鱼类相比较,在基因水平上LINE1的扩增效率高达8～300倍,但LINE1的扩增与鱼类抵御寒冷之间的关系尚未明了。本实验对斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维细胞ZF4进行了不同时间梯度的低温处理(18℃、5 d和18℃、30 d),同时对斑马鱼成鱼也进行了不同时间的低温处理(10℃, 3 h、6 h、1 d、3 d、5 d)。采用RT-qPCR检测了LINE1的mRNA水平,并克隆了斑马鱼LINE1基因启动子区,利用Luciferase双荧光报告系统,在ZF4细胞中验证LINE1 5’UTR在低温压力下的生物活性。结果显示,短时间低温处理下,ZF4细胞中LINE1 mRNA水平有所降低,而在长时间低温处理中,LINE1的mRNA水平显著升高。在成鱼中,短时间低温处理下,LINE1 mRNA水平降低;长期低温处理下,LINE1 mRNA水平显著升高。在ZF4细胞中发现,LINE1 5’UTR具有生物活性。在低温处理(18℃,3 d)下,报告基因信号减弱,间接表明LINE1启动子活性减弱。研究结果表明,低温压力会影响LINE1在鱼类中的表达。本研究为进一步探究LINE1在鱼类适应低温环境中的作用机制奠定了基础。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
翟晓虎 李翎旭 陈小竹 蒋怀德 贺卫华 姚大伟
【目的】建立一种快速、准确的肉中猪源性成分定量检测方法。【方法】首先从GenBank数据库中筛选猪特异性的微卫星DNA，根据微卫星DNA核酸序列设计引物，对常见10种动物基因组DNA进行PCR扩增，通过有无扩增产物判断筛选的微卫星DNA对猪源性成分的特异性。然后根据微卫星DNA核酸序列，设计特异性引物和探针，建立猪源性成分Real-time PCR检测方法，采用双标准曲线分别对猪源性成分和总动物源性成分进行定量，计算猪源性成分的百分含量。【结果】筛选到猪特异性微卫星DNA(Accession EF172428)，根据其序列设计的引物SEQ-sus2-F/R只能从猪基因组DNA中扩增出目的条带，其他动物的基因组均无目的条带扩增。建立的Real-time PCR检测方法灵敏度为0.02 ng/25μL反应体系。该方法能够准确检测出混合DNA样品中猪源性成分和混合肉样品中猪源性成分，百分误差分别约为1.32%和1.06%—7.12%。【结论】本研究利用Real-time PCR技术建立的定量猪源性成分的检测方法可以用来检测猪源性成分在混合样品中的百分含量。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘荭 范万红 史秀杰 陈超 吕建强 何俊强 高隆英 江育林
用传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的反转录聚合酶链及该方法在来自国内养殖场的患病牙鲆和虹鳟及进口的匙吻鲟鱼卵中检测出IHNV,同时对扩增出的IHNV的DNA片段进行了序列分析。结果表明,从国内养殖的牙鲆和虹鳟中分离出的IHNV与IHNV的标准株RB-1株在序列上都具有98.1%的同源性,推导出在氨基酸序列上分别具有97%和99%的同源性。从进口匙吻鲟鱼卵中分离的IHNV与RB-1株在序列上都具有92.5%的同源性,推导出氨基酸序列有93%的同源性。系统发育树分析结果表明,从国内发病的养殖虹鳟中分离出的IHNV与进口匙吻鲟鱼卵中检测到的IHNV在进化上关系较为密切。
关键词：
传染性造血器官坏死病毒 检测 基因分析
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王娜 何成霞 邹强 苟兴华 陈松 吴昊俣 蔡心析 许天恒
【目的】人微小纤溶酶原是由261个氨基酸组成的肽链,位于人纤溶酶原第549～790位,含有纤溶酶原活性区域,被激活后具有纤溶活性,能够降解纤维蛋白。本文旨在优化人微小纤溶酶原cDNA在毕赤酵母中的表达条件。【方法】在NCBI中获取人微小纤溶酶原氨基酸序列,根据毕赤酵母密码子偏爱性原理,设计对应的DNA序列,然后进行人工合成。合成的基因序列经测序验证后酶切与表达载体pPICZαA连接形成重组表达质粒pPICZαA-mPlg,转入大肠杆菌JM109中扩增质粒,提取阳性菌落中的重组质粒,双酶切获得人微小纤溶酶原的表达单元,然后构建4拷贝(表达单元)pPICZαA-mPlg,单酶切线性化质粒。然后电转化导入感受态毕赤酵母SMD1168中,经表型筛选、PCR筛选阳性克隆,获得高表达人微小纤溶酶原工程菌。培养工程菌后,甲醇诱导工程菌细胞让人微小纤溶酶c DNA表达,用SDS-PAGE检查其分子量,发色底物法检测微小纤溶酶原活性,通过发酵条件优化提高人微小纤溶酶原的产量,用SP-Sepharose fast flow凝胶层析方法纯化目标蛋白。【结果】SDS-PAGE检测到符合人微小纤溶酶原分子量大小的蛋白条带,同时发色底物法检测出样品中含有纤溶活性,其水平达到90 U/mL。【结论】本文为后续进行大规模表达人微小纤溶酶原打下了基础。
关键词：
人微小纤溶酶原 甲醇诱导 发色底物法
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
黄权 王伟杰 张东鸣
【目的】建立黄颡鱼仔鱼(Pelteboagrus fulvidraco)卵黄蛋白的ELISA检测方法,探讨黄颡鱼仔鱼体内卵黄蛋白含量的发生规律及仔鱼投喂生物饵料的最佳时间,为研究黄颡鱼仔鱼早期营养和开口饵料提供依据。【方法】以黄颡鱼仔鱼为试验材料,卵黄蛋白抗血清为抗体,纯化的卵黄蛋白为抗原,建立间接竞争酶联免疫吸附反应(ELISA)检测方法,测定黄颡鱼仔鱼卵黄蛋白在不同发育时期(破膜43,48,57,65,72,81,89,96,105,113,120和129h)的变化情况。【结果】黄颡鱼仔鱼卵黄蛋白ELISA检测中,抗血清的最佳稀释倍数为1∶20 000倍,包被抗原的最佳质量浓度为125ng...
关键词：
黄颡鱼仔鱼 卵黄蛋白 ELISA检测
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵淑艳 呼世斌 吴焕利 唐艳 刘娟
为了确定山茱萸的抑菌活性成分,以几种常见的食品微生物为供试菌种,采用生物活性追踪法对山茱萸抑菌活性成分进行了初步分离与鉴定。结果表明,山茱萸体积分数70%乙醇粗提液和乙酸乙酯萃取物对供试细菌、霉菌均有较好的抑菌活性,对酵母菌的抑菌活性不明显;利用大孔吸附树脂柱层析和薄层层析对抑菌活性较强的乙酸乙酯组分进一步分离,得到2个活性组分,经化学定性检识,初步判定山茱萸抑菌活性成分为酚酸类化合物。
[期刊] 水产学报
[作者]
何浩斌 叶嘉文 梁冠宇 黄燕华 周萌 梁日深
鱼粉是水产饲料重要原料之一，其昂贵的价格导致市场上存在严重的掺杂、掺假现象，尼罗罗非鱼是其中常见掺杂原料。为快速准确检测出鱼粉中尼罗罗非鱼源性成分，本研究以尼罗罗非鱼特异性基因片段为基础，设计荧光定量PCR特异性引物，建立鱼粉尼罗罗非鱼源性成分荧光定量PCR检测方法。利用不同鱼类及虾蟹类组织DNA验证引物特异性，以尼罗罗非鱼DNA梯度稀释及纯鱼粉中掺不同含量尼罗罗非鱼粉进行灵敏度测试，最后针对市售8种鱼粉样品进行检测，确定方法的适用性和检测能力。结果显示，该方法对尼罗罗非鱼源性成分检测具有较高的特异性，在其他鱼类及虾蟹类样品中均无扩增信号。方法灵敏度高，可以检出浓度0.1000 ng/μL的尼罗罗非鱼源DNA，在自制混合鱼粉样品中可检出含量为0.0100%的尼罗罗非鱼成分。研究表明，利用该方法对8种市售鱼粉样品进行检测，其中有4种鱼粉检出一定含量的尼罗罗非鱼成分。本研究可以针对鱼粉中尼罗罗非鱼源性成分进行快速有效的检测。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
王凡 牛晓莹 刘飞 袁金翠 李聪歌 马雅雯 孟祥杰
为了探讨三氯生(TCS)对硬骨鱼类性腺损伤作用的分子机制,通过半静态水体暴露法对斑马鱼(Danio rerio)进行染毒,将斑马鱼暴露在2种不同TCS浓度(0.034 mg/L和0.068 mg/L)溶液中,同时设置空白对照组,42 d后,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,探究TCS对斑马鱼卵巢抗氧化及凋亡相关基因表达的影响。结果发现:与空白对照相比,SOD、CAT和GPx1a基因在0.068 mg/L TCS处理组表达水平显著下调,GPx1和MT-2基因在0.034 mg/L浓度组表达显著上调;Bcl-2基因在0.068 mg/L浓度组表达显著下调,p53基因在0.034 mg/L浓度组表达极显著上调,Bax在TCS处理组中均显著上调。以上研究结果表明:较高浓度TCS显著影响了斑马鱼卵巢抗氧化和凋亡相关基因的表达,从而产生了氧化损伤和加速细胞凋亡的发生。
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