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[期刊] 水产学报  [作者] 汪桂玲  朱琴  李家乐  
SRY基因是人类及哺乳动物睾丸决定因子的最佳候选基因,HMG盒是SRY基因编码蛋白质的唯一功能区,在性别决定中极其重要且高度保守,许多进化程度上明显不同的物种中都能检测出SRY基因的HMG盒,即Sox基因。斑节对虾是一种重要经济虾类,其性别决定机制研究薄弱,至今未找到性染色体。本研究根据人的SRY基因的HMG盒保守区的核苷酸序列,设计了1对兼并引物,通过PCR扩增出斑节对虾的Sox基因,并对扩增产物进行SSCP分析。结果表明,斑节对虾雌雄个体均存在Sox基因,从雌雄个体中均扩增出约350bp和220bp两条基因片段,推测其中350bp片段含内含子,SSCP结果显示斑节对虾内存在Sox基因家族的...
[期刊] 淡水渔业  [作者] 付元帅  龙华  陈建武  张燕  汪登强  
选用根据人类SRY基因HMG保守区序列、HMG-box序列以及HOX基因保守序列设计的3对引物,分别对白缘(Liobagrus marginatus)、大拟缘(Liobagrus marginatoidesW u(b ig))、小拟缘(Liobagrus margina-toidesW u(sm all))、黑尾(Liobagrus nigricauda)4种鱼的雌雄基因组进行了PCR扩增。结果在4种鱼的雌雄基因组中发现1个1 200 bp左右的SRY基因同源序列片段,3个分别为200 bp、500 bp和1 200 bp左右的SOX基因同源序列片段,2个分别为150 bp和200 bp左右的...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 张建勇  王清印  王伟继  孟宪红  孔杰  张全启  
采用四引物扩增受阻突变体系PCR(Tetra-primer ARMS-PCR)技术,对中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)的80个单核苷酸多态性位点(Single Nucleotide Polymorphisms,SNPs)进行验证。结果表明,通过优化PCR反应条件、调整内外引物浓度和采取Touchdown PCR程序可优化扩增效果,80组引物中有20组引物得到良好的分型效果。群体多态性分析表明有效等位基因数(Ne)、观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)及多态性信息含量(PIC)的范围分别为1.127~1.993、0.136~0.607、0.119~0.492和0....
[期刊] 中国水产科学  [作者] 王成扬  赵超  傅明骏  邱丽华  
为研究增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,pcna)在斑节对虾(penaeus monodon)卵巢发育中的功能,利用race技术克隆得到了斑节对虾pcna基因(pmpcna)的cdna全长序列。该序列全长978 bp,包括135 bp的5′非编码区(5′utr)、60 bp的3′utr和编码260个氨基酸的783 bp的开放阅读框(orf)。同源性分析结果表明,pmpcna与其他物种具有很高的蛋白同源性。组织表达模式分析表明,pmpcna在所监测的各组织中为组成性表达,其中在卵巢和脑中表达量较高;卵巢发育不同阶段基因的表达分析则表明pmpcn...
[期刊] 上海海洋大学学报  [作者] 郑丽明  周发林  杨其彬  黄建华  邱丽华  苏天凤  杨丽诗  江世贵  
采用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNAends,RACE)获得了1 672 bp的斑节对虾钙网蛋白(Penaeusmonodon calreticulin,PmCRT)基因cDNA序列。该序列包含37 bp的5'非编码区(UTR)和414 bp的3'非编码区(UTR)以及1 221 bp的开放阅读框(ORF),可编码406个氨基酸。预测的分子量约为46.8ku,理论等电点为4.13。序列比对分析表明PmCRT与中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)的相似性和同源性最高,分别为100%和98.8%。实时荧光定量PCR对组织表达...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 许宝红  肖调义  肖真明  苏建明  刘巧林  陈开健  王冬武  徐永福  
为探明Sox基因在物种进化中的保守性及其性别分型,以大鲵雌、雄个体为材料,参照Sox基因HMG-box保守区的序列,设计简并引物扩增,两因子均在雌、雄个体内得到217 bp PCR扩增产物,不存在性别差异。将二者编码的氨基酸序列与NCBI中其他物种Sox基因编码的氨基酸序列进行比对,其中一个基因与人、斑马鱼、家鼠、鸡、热带爪蟾、扬子鳄Sox11基因的同源性均为90%,另一个基因与罗非鱼、鸭嘴兽、家鼠、红鳍东方鲀、斑马鱼、鸡、人、非洲爪蟾和大鲵Sox14基因的同源性均为90%,故根据大鲵的学名,将这2个基因分别命名为adSox11和adSox14c。adSox11和adSox14c在大鲵精巢、卵...
[期刊] 水产学报  [作者] 李晓静  孔杰  王伟继  孟宪红  田燚  孟鹏  毛连菊  
为评估DNA随机扩增多态性标记在中国对虾遗传连锁图谱构建中的应用前景,利用中国对虾单对交配亲本及其子二代材料,对RAPD标记及其遗传规律进行了研究。22条RAPD随机引物扩增结果的统计分析表明,标记在中国对虾F2的遗传规律可归为不分离标记和分离标记:不分离标记,指在亲本和后代中均不分离的标记,占总位点的54.1%;分离标记占总位点的45.9%。其中,分离标记又包括符合孟德尔遗传分离的标记、偏离孟德尔遗传分离标记和异常分离标记。符合孟德尔分离的标记中,分离比例为3∶1的标记占分离标记的14.7%;总的1∶1标记占分离标记的64.7%;偏离孟德尔分离和异常分离的标记分别占分离标记的11.7%和8....
[期刊] 水产学报  [作者] 孔凡骏  张东  
斑节对虾(Penaeus monodon)是主要分布在暖水性海域中的大型虾类,有生长快,适盐范围广,离水存活较久等特点在我国养殖颇具规模。相建海(1988),相建海等(1990)对我国部分经济虾类的染色体研究有报道。本文为斑节对虾染色体的初步研究报道。
[期刊] 中国水产科学  [作者] 王卫芳  邱丽华  黄建华  张殿昌  苏天风  杨其彬  江世贵  
通过同源克隆和RACE技术获得斑节对虾(Penaeus monodon)亲环素A(cyclophilin A,CYPA)的cDNA序列。根据已克隆的cDNA序列设计引物,利用染色体步移技术(Genomic DNA walking)从斑节对虾卵巢组织中克隆了CYPA基因的启动子和基因组DNA序列。测序结果表明,斑节对虾亲环素A(PmCYPA)cDNA全长834bp,其中开放阅读框(open reading frame,ORF)为495bp,可编码164个氨基酸;5’非编码区为31bp,3’非编码区为308bp。从斑节对虾基因组文库中扩增的CYPA基因组DNA全长3181bp,其中包括启动子区域1...
[期刊] 水产学报  [作者] 唐蕾  傅明骏  赵超  邱丽华  刘文生  江世贵  
为了研究含硒谷胱甘肽过氧化物酶(selenium-dependent glutathione peroxidase,segpx)在斑节对虾应激反应和卵巢发育中的作用,实验以斑节对虾肝胰腺转录组数据中筛选获得的se-gpx基因(pm se-gpx)片段为基础,利用raCe技术获得pm se-gpx基因的C dna全长,并对其进行了生物信息学分析;利用荧光定量pCr技术研究了pm se-gpx在斑节对虾不同组织、卵巢发育各期、肝胰腺组织在ph9、硫酸铜(Cu~(2+))应激下的相对表达量和变化趋势。结果显示,pm se-gpx基因C dna全长为959 bp,5'非编码区(utr)长10bp,开放...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 赵超  傅明骏  江世贵  周发林  杨其彬  朱彩艳  邱丽华  
为了解细胞周期蛋白E(cyclin E)基因在斑节对虾(Penaeus monodon)发育过程中的作用,构建和测序了斑节对虾全组织cDNA文库,获得了斑节对虾细胞周期蛋白(Pmcyclin)E的部分表达序列。通过RACE技术克隆得到1条全长1 706 bp的cDNA序列。Pmcyclin E开放阅读框(ORF)为1 263 bp,编码420个氨基酸。生物信息学分析表明,该氨基酸序列含有周期蛋白家族特有的CYCLIN保守区并含有N-糖基化位点及磷酸化位点。经BLAST同源性分析表明,该基因编码蛋白与红火蚁(Solenopsis invicta)、切叶蜂(Megachile rotundata)...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 谢波波  郭松  傅明骏  赵超  杨其彬  焦宗垚  邱丽华  
细胞周期蛋白G2(cyclin G2)是细胞周期中的重要调控因子。该研究初步探讨斑节对虾(Penaeus monodon)细胞周期蛋白G2(Pmcyclin G2)在卵巢发育中的作用,利用Race技术克隆获得4075bP Pmcyclin G2 c dna全长,其开放阅读框(oRF)1161bP,编码386个氨基酸。利用荧光定量PcR技术研究了Pmcyclin G2组织表达模式,结果显示,Pmcyclin G2在斑节对虾的心脏、血淋巴、肝胰腺、卵巢等组织中均有表达,其中肌肉中表达量最高;卵巢发育不同阶段Pmcyclin G2的表达分析则表明,Pmcyclin G2在iii期表达量最高;注射5-...
[期刊] 上海海洋大学学报  [作者] 孙文文  周发林  黄建华  邱丽华  杨其彬  江世贵  
利用RACE技术获得了斑节对虾(Penaeus monodon)ANT基因(PmANT)的cDNA序列。该序列全长1 388 bp,开放阅读框(ORF)为930 bp,3'非编码区(UTR)为393 bp,5'非编码区(UTR)为65 bp。ORF可编码309个氨基酸,分子量大约为33.622 ku。与所有ANT家族成员一样,PmANT蛋白具有3个重复同源的线粒体跨膜结构域,但不含信号肽和糖基化位点。相似性、同源性及系统进化树分析显示,斑节对虾的ANT基因与凡纳滨对虾的同源性和相似性最高,并与其聚为一支。采用荧光定量的方法研究了ANT基因在雌雄个体不同组织、卵巢不同发育阶段及未成熟和成熟精巢的...
[期刊] 水产学报  [作者] 周发林  江世贵  姜永杰  黄建华  马之明  
对中国南海海域5个斑节对虾野生群体三亚群体(SY)、深圳群体(SZ)、阳江群体(YJ)、湛江群体(ZJ)、北海群体(BH)——100个样品的16S rRNA序列进行PCR扩增,并对扩增产物进行了测序。用CLUSTAL_X排序软件对测序所得的100个16S rRNA序列进行比对。通过ARLEQUIN软件对所得100个16S rRNA序列进行比较分析,共检测出28个变异位点,19种单倍型。三亚、深圳、阳江、湛江以及北海等5个野生群体的核苷酸多样性(π)依次分别为0.004 35,0.005 86,0.010 50,0.010 81,0.011 68。三亚、深圳、阳江、湛江以及北海等5个野生群体的单...
[期刊] 中国水产科学  [作者] 史成银  王印庚  黄倢  王清印  
应用同源PCR技术,从被一种球状病毒感染的患病大菱鲆(Scophthalmus maximus)脾脏和肾脏组织中扩增出了一段长度为620 bp的DNA片断。序列测定和Blast分析表明,该DNA片断与鱼类虹彩病毒主要衣壳蛋白(MCP)C末端编码区的DNA序列高度相似,由此证实感染养殖大菱鲆的这种球状病毒为一种鱼类虹彩病毒,暂命名为大菱鲆红体病虹彩病毒(TRBIV)。多序列比对和分析发现,TRBIV MCP C末端的205个氨基酸序列与GenBank中20种虹彩病毒相应序列的相似性分别为99.47%(韩国大菱鲆虹彩病毒)、97%~98%(待指定病毒属的7种病毒),以及50%以下(蛙病毒属、淋巴囊...
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