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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张洪英 F.Kraemer 沈永林 顾有方 沈涛 王丙云 毛鑫智 T.Schnieder
用斑点杂交试验检测苏、皖7县市肝片吸虫中间宿主小土窝螺(Galba pervia),共检测小土窝螺777个,阳性33个,阳性率为4.25%,其中江苏省小土窝螺的阳性率为4.46%,安徽省小土窝螺的阳性率是4.11%.结果表明本地水牛肝片吸虫感染率与小土窝螺阳性率呈正相关趋势,斑点杂交试验检测中间宿主小土窝螺可预测牛羊感染肝片吸虫的严重程度,是流行病学调查中值得采用的新技术.
关键词：
斑点杂文试验 小土窝螺 肝片吸虫
[期刊] 中国农业科学
[作者]
孟娟 古勤生 林石明 彭斌 刘丽锋 田延平 李莉
【目的】探索5种葫芦科作物病毒即小西葫芦黄花叶病毒(Zuccini yellow mosaic virus,ZYMV)、西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、番木瓜环斑病毒西瓜株系(Papaya ringspot viruswatermelon strain,PRSV-W)和南瓜花叶病毒(Squash mosaic virus,SqMV)的斑点杂交检测技术,为葫芦科作物种子带毒的快速准确鉴定、流行病学研究和转基因检测等提供技术和方法。【方法】以构建的重组质粒为模板,用PCR方法合成了相应的地高...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王朝辉 周益军 范永坚 薛宝娣 吴淑华 程兆榜 张文荟
用RT PCR技术、PCR标记的探针点杂交和SDS PAGE检测了生产上严重危害玉米和水稻的水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)。由RT PCR扩增的RBSDV第 7片段第 92 1～ 14 11碱基作探针 ,用PCR法DIG标记后点杂交 ,可以从 10 0ng玉米病叶中检测到RBSDV ,灵敏度是RT PCR的 1/10 ;10 %SDS PAGE只能检测到从 1g玉米病叶中提取的病毒dsRNA ,但对江苏玉米田间分离的不同的RBSDV样品电泳发现 ,该病毒基因组dsRNA有差异 ,表明该技术是研究RBSDV基因组多样性的简单有效的方法
[期刊] 中国水产科学
[作者]
杨冰 黄倢 宋晓玲 史成银 刘莉 刘庆慧
利用非放射性标记物地高辛(DIG),通过PCR方法制备了对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)DNA探针,探针长度705bp,标记产量为20ng/μL。通过核酸探针斑点杂交检测方法对此探针特异性及灵敏度进行验证,结果表明,该探针具有较高的灵敏度和较强的特异性,检测IHHNVDNA的检出灵敏度为24.8pg,可检出26.6ng患病对虾组织DNA中的IHHNV,与250.4ng健康虾组织DNA、202.5ng健康虾匀浆液,白斑综合症病毒(WSSV)DNA和肝胰腺细小病毒(HPV)DNA均不发生交叉反应。本方法可应用于健康亲虾、苗种的培育和无特定病原(SPF)对虾种群的选育及IHHNV流行病...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
马艳琴 郑俊梅 张映
为建立一种敏感、特异的检测疫苗中猪肺炎支原体污染的方法,设计了猪源支原体PCR通用外套引物和猪肺炎支原体种特异性内套引物及地高辛标记寡核苷酸探针,建立了PCR-斑点杂交技术,应用于猪瘟活疫苗中猪肺炎支原体污染的检测,并与套式PCR技术进行比较研究。结果显示,探针最低检出DNA量为23.4 pg,比套式PCR(最低检出量为62.5 pg)敏感性更高,且探针与鸡毒支原体和大肠杆菌DNA无交叉反应。对来自6个生产厂家共90批疫苗的检测结果显示,PCR-斑点杂交法比套式PCR法对疫苗猪肺炎支原体污染的检出率高10%。以上结果表明PCR-斑点杂交法具有更高的敏感性和特异性,在疫苗猪肺炎支原体污染的检测中...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
徐瑞 胡白石 田艳丽 黄艳宁 谢进 曹亮 彭斯文 朱校奇
【目的】甜瓜细菌性叶斑病是危害甜瓜的重要种传细菌病害,是由丁香假单胞杆菌流泪病致病变种甜瓜菌株(Pseudomonas syringae pv.lachrymans)引起的。论文旨在建立高效、快捷、操作简单的检测技术以防止此病原菌传播。【方法】以Gen Bank公布的甜瓜细菌性叶斑病菌的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因序列为靶标,设计甜瓜细菌性叶斑病菌特异性锁式探针,建立锁式探针与斑点杂交技术结合的检测体系。以保存的
[期刊] 中国水产科学
[作者]
宋晓玲 史成银 黄倢 张立敬
于 1996～ 1998年采用DNA斑点杂交法 ,完成了共计 836份养殖对虾 ,2 13份对虾饵料和环境生物样品的检测。结果显示 ,对虾在每年的 4～ 10月都可检测出白斑综合症病毒 (WSSV) ,6月出现最高峰 ,阳性检出率达到 4 2 .6 % ;其次 ,为 7月和 5月 ,分别达 31.6 %和 2 4 .5 %。在对虾不同生长阶段 (包括亲虾、各期幼体、仔虾、幼虾及成虾 )均可检出WSSV ,其中以仔虾的带毒率最高 ,达 36 .4 % ,其次为糠虾幼体 ,达 34.6 %。体长范围 1.1～ 2 .0cm的仔虾阳性率最高 ,其次体长为 5 .1～ 6 .0cm的幼虾样品。检测的中...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
孙伟 吴中勤 胡青海 李树香 李刚
利用地高辛标记的０８５ ｋｂ 的鸡传染性贫血病毒 （ Ｃ Ａ Ｖ） 核酸探针， 对江苏某地区疑为 Ｃ Ａ Ｖ 的１５～３０日龄病鸡的肝 Ｄ Ｎ Ａ 样品进行斑点杂交。结果在被检的２０份样品中有６份为阳性，阳性率为３０％ 。对相同样品根据已知引物（特异性扩增出 Ｃ Ａ Ｖ 的０５８ ｋｂ Ｄ Ｎ Ａ） 进行 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增， 所得结果与斑点杂交相同。对应的病鸡血清经间接免疫荧光试验 （ Ｉ Ｆ Ａ）， 有７份为 Ｃ Ａ Ｖ 抗体阳性， 与 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增结果的符合率为８３％ 。初步结果表明， 江苏某地区存在 Ｃ Ａ Ｖ 感染。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
顾有方 沈永林 I.Ferre T.Schnieder 毛鑫智 刘跃兴 彭立斌
采用粪便检查、斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和斑点杂交试验(Dot-hybridization),检测苏皖两个省10县市302农户的307头水牛的粪便、血清及中间宿主小土蜗(Galba pervia),进行水牛肝片吸虫(Fasciola hepatica)感染的调查分析。粪便虫卵呈阳性43头,阳性率为14.01%,安徽为13.61%(18/155),江苏为16.48%(25/152);感染水牛最小年龄为1.5岁,最大为16岁,阳性率随年龄增加而提高;母水牛阳
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
毛鑫智 王丙云 陈龙 杨倩 毛卫华 J.Gonzalez-Gallego
20头健康、2～3岁、体重300～400kg 雄性去势水牛,经粪便检查和 Dot-ELISA 检测确认为无肝片形吸虫感染。分二系列进行实验。第1系列8头水牛随机分成感染组(5头)和对照组(3头),感染组每天每头口服60个囊蚴,连续20天,共感染1200个囊蚴,从开始感染至实验结束历时26周,研究慢性感染的效果;第2系列12头水牛,分成感染组(9头)和对照组(3头),感染组1次每头经口感染1600个囊蚴,历时
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
江善祥 毛鑫智
将 8 5只体重 2 5 0～ 35 0 g的健康SD大鼠 (雌雄各半 )随机分成感染组 (n =5 5 )和对照组 (n =30 )。感染组大鼠每只一次经口感染 2 5个肝片吸虫囊蚴 ,每周采血测定血浆天冬氨酸转氨酶 (AST)、丙氨酸转氨酶 (ALT)及碱性磷酸酶 (ALP)活性。于感染后第 3,6 ,9,11和 13周分别宰杀 12只 (感染组 8只 ,对照组 4只 )大鼠 ,测定其肝微粒体蛋白、细胞色素P 4 5 0、细胞色素b5的浓度和肝脏药物代谢酶活性。结果表明 ,大鼠感染肝片吸虫后 ,血浆AST、ALT、ALP活性分别在感染后 3～ 7周、 3～ 5周、 5～ 13周极显著上升 ...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
顾有方 毛鑫智 沈永林 J.Gonzalez-Gallego
经粪便和Dot ELISA检查确认无肝片吸虫感染的 2 0头雄性去势水牛 ,分两系列试验。系列Ⅰ实验中 8头水牛随机分成感染组 (5头 )和对照组 (3头 ) ,感染组每头每天口服 6 0个肝片吸虫囊蚴 ,连续 2 0d ;系列Ⅱ实验中 12头水牛分成感染组 (9头 )和对照组 (3头 ) ,感染组每头一次口服 16 0 0个肝片吸虫囊蚴。在感染前及感染后每周颈静脉采血 ,分离血清 ,测定丙二醛 (MDA)、过氧化物酶 (CAT)、超氧化物歧化酶 (SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)的活力。在系列Ⅱ实验中 ,MDA在感染后 15周内显著高于对照组 ,以后下降 ,至 19～ 2 2周...
关键词：
水牛 感染 肝片吸虫 抗氧化功能 自由基
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王丙云 陈龙 毛鑫智 陈继明 Javier Gonzaloz
为研究水牛抗肝片吸虫的免疫反应机制,选择8头雄性去势水牛经粪便检查和 Dot-ELISA 检测确认无肝片吸虫感染.经2周适应性饲养后,随机分成感染(n=5)和对照组(n=3)。感染组水牛每天每头经口感染60个囊坳,连续20天,共接种1200个囊蚴。每周颈静脉采血,测定外周血的 T、B 淋巴细胞的比例、血清总蛋白含量和组分比例以及抗体(IgG)水平。结果表明:感染组水牛在感染肝片吸虫后第2周开始,T 淋
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
江善祥 毛鑫智 J.EBayon J.Gonzalez-Gallego
5头健康雄性去势水牛 (2～ 3岁、体重 30 0～ 5 0 0kg) ,经粪便检查和Dot ELISA检测确认无肝片吸虫感染。每头每天口服 6 0个肝片吸虫囊蚴 ,连续 2 0d ,共感染 12 0 0个囊蚴 ,用以研究水牛慢性感染 (少量多次感染 )肝片吸虫对安替比林代谢动力学的影响。每周定时由颈静脉采血 ,测定血清酶水平变化。于感染前、感染后急性期及慢性期进行安替比林动力学试验。由颈静脉瘘管收集血样 ,用尿液收集器收集尿样 ,用HPLC法分析血浆安替比林动力学参数及尿安替比林清除率。结果表明 :水牛慢性实验性感染肝片吸虫呈亚临床状态 ,AP的血浆及尿代谢物清除率在急性期分别下降了48%和...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
沈永林 顾有方 毛鑫智 高利华
为深入了解动物感染肝片吸虫后的疾病发展及免疫功能变化,本研究以山羊实验感染肝片吸虫囊蚴(200个和500个/只),连续17周,每周颈静脉采血1次,测定血液参数,血清酶、总蛋白及蛋白组分.结果:感染山羊血液的 RBC、Hb、PCV 均明显下降;血液指数 MCV,MCH,MCHC 变化不明显;WBC 和嗜酸性白细胞明显增加;血清中 AST 从第2周后开始上升,第8与第9周达高峰,GGT 于感染后第7与8周开始升高,第10与11周达到高峰;血清总蛋白前10周有缓慢上升趋势,以后呈直线下降,白蛋白显著减少,α-球
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