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[期刊] 林业科学研究
[作者]
梁重钧 李麟坤 胡振华 张薇 许慧慧 王利兵
[目的 ]探究调控文冠果种子神经酸合成关键基因。[方法 ]本研究根据参考基因组联合转录组分析文冠果3-酮酯酰-CoA合酶（3-ketoacyl-CoA synthase,KCS）基因家族在不同发育时期种子中的表达模式；通过RT-PCR扩增文冠果XsKCS7基因并进行生物信息学分析；XsKCS7基因异源转化酿酒酵母鉴定基因功能。[结果 ]文冠果XsKCS7基因在不同发育时期种子中的表达量远高于其他KCS基因；克隆XsKCS7基因，生物信息学分析显示，XsKCS7基因的开放阅读框为1 512 bp，编码503个氨基酸，含有典型的KCS家族保守基序“GMGCSA”、“FGNTSSSS”以及“GSGFKCNSAVW”，与橡胶树KCS的亲缘性关系最近，为67.62%; XsKCS7异源转化酿酒酵母鉴定其具有调控芥酸和神经酸合成的功能。[结论 ]XsKCS7基因确为调控文冠果种子芥酸和神经酸合成的关键基因。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
路蒙蒙 韩硕 杨琦 王俊秀 郭惠红
【目的】文冠果隶属无患子科,是我国北方重要的油料树种,种子含油量高,是制备食用油、生物柴油等的优质原料。本研究旨在克隆文冠果Leafy Cotyledon 1(XsLEC1)基因,进行序列及表达模式的分析。【方法】以文冠果种胚为试材,利用RT-PCR和RACE技术克隆文冠果LEC1基因。采用Protparam及TMHMM2.0软件预测XsLEC1蛋白的理化性质和跨膜结构域,Prot Comp9.0及Motif Scan软件预测XsLEC1蛋白的亚细胞定位及蛋白功能,BioEdit及MEGA7软件分析XsL
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张桂敏 张晚鸣 何国帮 马立新
根据文献报道的烟曲霉植酸酶序列,设计引物以烟曲霉CCTCCAF93044的总DNA为模板进行梯度PCR,扩增出了1条约1.4 kb的带,将该片段进行DNA序列测定,其序列与已报道的烟曲霉植酸酶序列完全一致,但只编码完整的成熟植酸酶序列。将该片段克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K上,获得表达质粒pHBM108。该质粒转化毕赤酵母KM71所得重组子经PCR验证后进行诱导表达,其中一重组子经144 h诱导,植酸酶表达量至少为1.25 mg/ml,比同类报道的表达量高出60％以上,以植酸钠为底物测得酶活为11.17U/ml。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
黄鹭强 张丽萍 雷秀清 林志钦 郑宝东
以粟酒裂殖酵母基因组DNA为模版,逆转录获得cDNA;以cDNA为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增,得到苹果酸通透酶(mae1)基因,将其与pMD-18T连接并测序.结果表明cDNA全长为1316 bp,编码438氨基酸,分子质量49ku,与已报道的mae1基因序列的同源性达到99%.mae1与整合型表达质粒pSH47连接后,用重组的表达质粒转化产朊假丝酵母,经PCR验证筛选阳性克隆子.通过对转化子的摇瓶筛选,发现重组子的降酸幅度均大于原始菌株,培养40 h降解了48.6%的L-苹果酸,降解率比原始菌株提高了9.8%.
[期刊] 华北农学报
[作者]
孔卫青 杨金宏
磷酸盐是蚕必需的无机物,钠离子依赖性的磷酸盐转运蛋白(Na(+)-dependent phosphate cotransporter,Na-Pi)调节磷酸盐在生物体内的代谢和转运。本研究通过生物信息学分析和分子生物学试验获得了家蚕NaPi的同源基因BmNaPi,该基因位于家蚕8号染色体,编码区长1 437 bp,有10个外显子,编码478个氨基酸,预测蛋白序列在氨基末端含有一信号肽,序列中间有8个转膜结构域,与登录号为AAF57968、XP_001602874、EAA00281、XP_393759、XP_001950194等同源蛋白的一致性均在70%及以上。RT-PCR检测该基因在5龄3 d家...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
李麟坤 梁重钧 宁楚龙 张薇 姜国维 张鑫 王利兵
[目的]验证ACT基因是否适用于文冠果种子发育的相关基因表达分析，并筛选出在文冠果基因表达分析中最稳定的内参基因。[方法]本研究采用了4种数学算法（ΔCT、BestKeeper、NormFinder、geNorm）评估12个候选内参基因的表达稳定性，并利用在线工具RefFinder综合评价。[结果]在文冠果不同发育时期种子内参基因综合评分排名为PP2A>Tip41> EF-1α>18r>UCE>β-TUB>UBQ>α-TUB>CYP>SAM>ACT>GADPH；在文冠果不同组织内参基因综合评分排名为PP2A>Tip41>CYP>18r>UBQ>SAM>EF-1α>UCE>GADPH>α-TUB>ACT>β-TUB。[结论] PP2A和Tip41基因是文冠果基因表达分析最稳定的内参基因。
关键词：
文冠果 内参基因 基因表达 种子发育
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
李雯 陶妍
从鲤鱼鳃组织中分离克隆到一种新的g型溶菌酶同工型基因(CLYG).该基因的全长cDNA为558 bp,除去终止密码子,编码185个氨基酸,推断的氨基酸序列没有信号肽,含3个催化位点(谷氨酸73、脯氨酸86和天冬氨酸97),具有鱼类g型溶菌酶的基本特征.通过PCR方法在CLYG基因的5'和3'端分别引入XhoⅠ和XbaⅠ酶切位点.扩增到的目的片段与表达载体pPICZαA连接构建重组表达载体pPICZαA-CLYG后,电转至毕赤酵母X-33,筛选得到的阳性转化子在1.0%甲醇、29℃、pH 6.0的条件下诱导
关键词：
鲤鱼 g型溶菌酶 毕赤酵母 重组表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘加爱 陈蕾 林元山 张小鹃 邹洪彬 张学文
为了以酿酒酵母S78为宿主菌异源高效表达糖化酶基因,进一步扩大糖化酶基因在工业生产上的应用。运用RT-PCR法从黑曲霉中克隆得到糖化酶基因(glaA)cDNA,去除其信号肽编码区后的序列重组到酵母表达载体pVT102U/αADH1强启动子下游,并与α因子分泌肽信号序列融合。用PEG/LiAc法将构建的重组表达载体转入酿酒酵母S78菌株,筛选出的转化菌点种到可溶性淀粉平板上培养,用碘染法鉴定重组基因的表达情况。鉴定出了典型水解圈的酵母转化子,转化子接种到YPD培养基中摇瓶培养后,取发酵上清液经SDS-PAG
关键词：
黑曲霉 糖化酶 酿酒酵母 异源表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
张慧荣 赵萍萍 冯杰 王迎春 郑琳琳
黄烷酮-3-羟基转移酶(F3H)是植物黄酮合成途径上游的一个关键酶,它催化黄烷酮C3位羟化,形成二氢黄酮醇。构建长叶红砂Rt F3H3基因酵母表达载体,为进一步研究Rt F3H3基因功能奠定基础。基于高通量转录组测序结果,利用RT-PCR技术克隆获得长叶红砂F3H3(Rt F3H3,GenBank登录号LC055546)基因,其开放阅读框长1 014 bp,编码338个氨基酸,推测蛋白分子量为38.46 k Da,理论等电点为5.7。通过定量RT-PCR研究发现,Rt F3H3在茎中表达量较高,在根和叶中表达量较低。不同程度Na Cl(100,300,500 mmol/L)和不同时间UV(12...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
石耀华 王嫣 顾志峰 王爱民 苏树叶
Rab家族基因在囊泡的形成、转运、黏附、锚定和融合等各个阶段发挥重要作用。在已有的马氏珠母贝RabcDNA片段的基础上,采用RACE方法克隆了该基因的全长。cDNA长度2519bp,编码区长618bp,编码206个氨基酸。编码的蛋白质序列分析表明,该基因具有Rab家族的全部保守结构,与人类等其他生物的Rab7亚家族的同源性最高。RT-PCR结果显示,该基因在马氏珠母贝的鳃、足和胃组织中没有扩增产物,在卵、感染和未感染凿贝才女虫Polydora ciliata的马氏珠母贝的肝脏和血液中均检测到了与预期大小相符的扩增产物,存在组织差异性表达。
关键词：
马氏珠母贝 Rab 克隆 表达特征
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张焕 仇忠凯 阎新 欧阳解秀 李绍波 王鑫
以粳稻中花11为材料,利用生物信息学技术,结合RT–PCR,克隆了水稻OsEnS38的c DNA序列;其编码的蛋白序列包含2个Cupin_1保守结构域,属于典型的Bicupin亚家族。启动子分析发现,OsEnS38启动子区域含有多种与胚乳特异表达相关的顺式作用元件;q RT–PCR和原位杂交结果证实,OsEnS38在开花后7~14 d的种子中特异表达,在第10天的胚乳中表达量最高,达29.73;杂交信号在第7、10天的胚乳中高表达;共表达分析显示,共表达基因参与水稻胚后发育和生殖发育调控,表明该基因在种子发育和储藏物质积累过程中发挥作用。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
涂珺 朱平 程克棣
天然产物紫杉醇是一种重要的抗癌药。其天然来源的匮乏和缺少商业上可行的化学全合成促进了对紫杉醇生物来源的深入研究。紫杉醇的生物合成是一个复杂的多步过程,主要包括四环骨架的构建和加入各种羟基和酰基基团,其中羟基的加入由细胞色素P450氧化酶催化。我们从中国红豆杉愈伤组织细胞mRNA构建的cDNA文库中克隆得到几个P450 cDNA片段。其中一个长1 494 bp的cDNA片段,编码497个氨基酸,推断蛋白分子量为56470 Da,等电点为9.42。序列比较显示,这个推断蛋白包含多个细胞色素P450氧化酶的保守区,具有典型的细胞色素P450氧化酶的特征,进一步的比较发现其与已鉴定的东北红豆杉紫杉烷-...
[期刊] 草业科学
[作者]
李珍珍 张正芳 马晓兰 王文颖 邱庆辉 王小梅 周华坤 殷恒霞
异黄酮是豆科植物中一类典型的次级代谢产物，其化学结构多样性对于植物生长发育及抵御环境胁迫具有重要功能。本研究以高寒地区豆科牧草红豆草（Onobrychis viciifolia）为研究材料，根据转录组测序数据，从红豆草叶片中克隆获得一个异黄酮7-O-糖基转移酶（Isoflavone 7-O-glucosyltransferase，OvIF7GT）基因，并对该基因进行了生物信息学、亚细胞定位和干旱胁迫下表达水平的分析。结果显示：（1）本研究克隆得到的OvIF7GT大小为1512 bp，编码503个氨基酸，蛋白质相对分子质量为56774.36 Da；其编码蛋白是一种亲水性蛋白，具有两个跨膜结构域，62个磷酸化结合位点，理论等电点为5.51；（2）保守结构域分析推测，OvIF7GT蛋白属于异黄酮糖基转移酶家族，主要由α-螺旋（41.75%）和无规则卷曲（35.79%）构成；系统发育进化关系分析表明该蛋白与蒺藜苜蓿（Medicago truncatula）和鹰嘴豆（Cicer arietinum）中的IF7GT亲缘关系较近；此外，亚细胞定位分析显示OvIF7GT主要存在于细胞质中，在细胞核中也有分布；（3）实时荧光定量PCR（qRT-PCR）结果表明，在干旱胁迫72 h后，红豆草幼苗中OvIF7GT显著受到干旱胁迫的诱导表达，且在叶中比根中的表达量更高。该研究结果表明，OvIF7GT参与了红豆草干旱胁迫的响应，可能在红豆草的抗旱中具有潜在功能。
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨文杰 吴燕民 唐益雄
MYB蛋白是植物体中一类重要的转录因子,广泛参与植物生理代谢和发育过程的调节。本研究对利用RACE-PCR分离克隆的MYB转录因子基因GmMYBJ7的功能进行了初步研究。Norhern杂交对GmMYBJ7在不同组织中的表达情况进行了检测,结果只在茎、叶中检测到了GmMYBJ7的表达;酵母表达结果显示,GmMYBJ7具有明显的转录激活功能,β-半乳糖苷酶活性为24.31 U;半定量RT-PCR检测显示,在表达GmMYBJ7的转化烟草中,类黄酮代谢途径中的苯丙氨酸氨基裂解酶(PAL)、肉桂酸-4-羟化酶(C4H)、4-香豆酰辅酶A连接酶(4CL)、查尔酮合成酶(CHS)、黄烷酮-3-羟化酶(F3H...
关键词：
大豆 MYB转录因子 基因表达调控
[期刊] 中国水产科学
[作者]
蒋菁菁 李英文 陈大庆 刘绍平 段辛斌 李小芳 范振华 汪登强
补体系统经活化形成末端补体复合物,C7是将此复合物与目的细胞的细胞膜结合的重要分子。本研究从已有的cDNA文库中克隆鲢(Hypophthalmichthys molitrix)补体C7的cDNA,其全长2 625 bp,编码821个氨基酸。同源性分析表明,鲢补体C7与草鲤鱼的氨基酸序列相同率最高(为93%)。与已报道的硬骨鱼类补体C7相同,鲢补体C7具有一些保守的结构,如TSP1、LDLRa、MACPF、EGF、TSP1、CCP。对12尾鲢补体C7进行遗传多样性分析发现有6个突变位点,其中5个是同义突变,另外一个是非同义突变,确定6个等位基因。在鲢正常组织和嗜水气单胞菌感染的免疫器官组织中,对...
关键词：
鲢 C7 遗传多样性 克隆 表达
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