【目的】去除鼠曲草粗多糖中蛋白质的最优方法,是研发的基础。【方法】以蛋白质清除率和粗多糖损失率为指标,进行综合评价。采用碱性法、酸性法、醋酸铅法、三氯乙酸法、Sevag法、酶法,研究了去除蛋白质的效果。【结果】醋酸铅法、三氯乙酸法、木瓜蛋白酶-三氯乙酸法去除蛋白质的效果较好,其蛋白质清除率分别为97.55%、81.97%、100.00%,粗多糖损失率分别为12.17%、5.89%、52.71%。【结论】由综合指标评价可知,其效果依次为醋酸铅法、三氯乙酸法、木瓜蛋白酶-三氯乙酸法。

探讨了酶法与Sevage法联用脱除紫贻贝(Mytilus edulislinnaeus)多糖蛋白。通过正交中心组合实验,应用响应面分析法考察酶法脱蛋白的工艺条件。结果表明,酶法脱蛋白的最优工艺参数为:pH7.1,枯草杆菌中性蛋白酶加入量0.5 U/mg粗多糖,温度41℃,氯化钙加入量7.4 mg/g,时间3 h。在酶解的基础上应用Sevage法脱除游离蛋白,适宜的工艺条件为:氯仿∶正丁醇=5∶1,料液比4∶1,振摇时间20 min。酶法与Sevage联用法脱除贻贝多糖蛋白的脱除率为78.5%;与其它传统脱蛋白方法比较,该法适应范围广、样品损耗少、经济、快速、效果理想,为多糖的分离纯化研究提供了...

【目的】采用4种不同方法进行金柑叶片蛋白质提取的相关研究,摸索出一套适合金柑叶片蛋白质的提取方法,也为其他近缘植物高质量蛋白质的提取提供科学参考依据。【方法】选择‘桂金柑一号’为供试材料,分别采用Tris-HCl提取法、尿素提取法、DTT/丙酮提取法和TCA/丙酮提取法提取叶片组织蛋白质,分析比较获得的蛋白质产率、单向电泳图和双向电泳图。【结果】不同方法的提取效果各异,Tris-HCl提取法提取的蛋白质产率、单向电泳以及双向电泳结果较理想,单双向电泳图辨识度高,蛋白点数丰富,蛋白点整齐且少有纵横纹现象。【结论】Tris-HCl提取法能够兼顾产率和质量,在4种方法中综合提取效果最好,是适用于金柑叶片蛋白质提取的理想方法。

为比较不同方法提取的玉米叶片蛋白质对双向电泳效果的影响。采用TCA-丙酮沉淀和TRIzol试剂盒2种方法,提取国审玉米品种郑单958叶片全基因组蛋白质,并对提取的蛋白质样品进行双向电泳。结果表明:TCA-丙酮方法提取的蛋白质一向水平聚焦电压上升缓慢且达不到程序设置的电压,而TRIzol试剂盒方法实时监测图与程序设置图相吻合;对电泳胶图分析后可知,TRIzol试剂盒法分离出的蛋白点多于900个,低丰度蛋白质得到充分显现,大多数蛋白点分子量为20~80 k Da,p H值为4~7,蛋白点的形状较规则;TCA-丙酮沉淀法分离出的蛋白点仅有350个,表明样品中蛋白质分离种类较少,高丰度蛋白质过度显现,...

【目的】建立一种小麦叶片蛋白质组分析时去除全蛋白提取物中高丰度蛋白Rubisco酶的方法,为富集低丰度蛋白,提高双向电泳灵敏度提供技术支持。【方法】采用分离技术,以铭贤169小麦苗期叶片为材料,使用不同浓度(1,2,5,10 mmol/L)的肌醇六磷酸钠,结合二水氯化钙在不同温度(4,20,37℃)去除小麦叶片蛋白中的Rubi-sco酶,筛选去除小麦叶片蛋白Rubisco酶的最佳条件,并采用一维凝胶电泳(1-DE)、Western blot方法检测去除Rubisco酶的有效性,用二维凝胶电泳(2-DE)评估该方法对样品在二维凝胶上分辨率的影响。【结果】在37℃条件下,采用10 mmol/L肌醇...

采用超声法提取豚草活性物质,通过灌胃给药途径喂给小白鼠,以有机磷药剂敌敌畏(DDVP)和空白组作为对照,研究豚草提取液对哺乳动物肝脏羧酸酯酶(CarE)活性及蛋白质含量的影响。结果表明:豚草提取液对小鼠肝脏CarE活性有激活作用,在给药后6h内酶比活力值上升显著,达到15.006μmol/(min·mg);随后逐渐降低,24h时酶比活力值降至9.156μmol/(min·mg),基本恢复至正常水平。DDVP对小鼠肝脏CarE活性产生明显抑制作用,给药后其CarE活性始终处于被抑制状态,显著低于空白组,且恢复缓慢。豚草提取液和DDVP均对小鼠肝脏蛋白质含量有抑制作用。作为杀虫抑菌制剂,豚草活性物...

为了筛选出适合褐飞虱Nilaparvata lugens类酵母共生菌蛋白质提取的细胞破碎方法,选择超声波破碎法、反复冻融法和液氮研磨法等3种细胞破碎方法提取共生菌吡虫啉敏感菌株和抗性菌株蛋白质。结果表明:菌体显微形态观察发现,使用超声波破碎法和液氮研磨法处理类酵母共生菌的细胞破碎效果均优于反复冻融法,处理后菌体分布均匀,破碎彻底;72 h是提取菌体蛋白质的最佳培养时间。定量分析表明:用超声波破碎法提取蛋白质质量浓度最高,液氮研磨法次之,反复冻融法提取蛋白质质量浓度的效果最差,各方法所提蛋白质质量浓度差异显著(P

为探索苹果叶片蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的样品制备方法,比较了三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法、改良的Tris-HCl法、酚-甲醇/醋酸铵沉淀法、二硫苏糖醇(DTT)/丙酮法及Tris-HCl法等5种蛋白质的提取方法。制备的样品经SDS-PAGE分离采用银染显色。结果表明,改良的Tris-HCl法在加大PVPP用量和蛋白质提取缓冲液的基础上,将丙酮沉淀蛋白质的时间由30 min增加到1 h,使蛋白质的得率最高为3.243μg/μL,上样量5μL得到的蛋白质条带数量最多,条带最清晰为41条。利用这一改良方法对苹果实生树不同节位蛋白质的动态变化进行了研究,共发现6条蛋白...

以黄瓜幼苗的叶片为材料,分别采用酚提取法、盐提法、尿素提取法和真空渗透提取法分离细胞壁蛋白,比较不同提取方法的提取效果,以期为黄瓜细胞壁蛋白质组学研究的开展奠定基础。结果表明:盐提法的蛋白产率最高,尿素提取法次之,真空渗透提取法和酚提取法的蛋白产率较低;采用六磷酸葡萄糖脱氢酶活性测定法检测细胞质蛋白的污染率,其中,真空渗透提取法获得的细胞壁蛋白污染率最低(1.07%),其次为盐提法(2.17%),而酚提法和尿素提取法的污染率分别高达25.90%和2.60%;SDSPAGE电泳分析表明盐提法的蛋白条带清晰,且细胞质中高丰度蛋白Rubisco的条带不明显。

采用大田试验,对中国北方1990s以来种植面积较大的50个玉米品种粗蛋白质含量(CPC)进行了研究。通过探测分析和正态分布测试检测表明,秸秆CPC、籽粒CPC和整株粗蛋白产量(CPY)分别符合正态分布N(5.48,0.532)、N(9.42,0.792)和N(530.67,64.632),三者的变化范围分别为4.38%～7.09%、7.03%～11.00%和417.43～726.72g/plant。籽粒CPC与秸秆CPC相关性不显著(P>0.05)。对籽粒和秸秆的CPC进行分层聚类,将北方玉米品种划分为籽粒高秸秆低型(HGLS)、籽粒与秸秆双低型(LGLS)和籽粒与秸秆双高型(HGHS)。目前...

以低次烟叶为材料,研究了烟叶蛋白质最佳提取工艺。采用L9(34)正交试验设计研究了烟叶磨浆 工艺。结果表明,磨浆工艺的最佳工艺参数为固液比(烟叶:水)1:17,提取温度60℃,提取液pH 8．0,磨浆2次。 采用响应曲面分析法研究了烟叶蛋白碱溶工艺,得到其最佳工艺参数为温度60℃,pH 8．0,时间60 min,搅拌条件 下碱溶3次。烟叶蛋白酸沉操作中,在pH 3．0,4℃下静置8 h效果最佳,最终烟叶蛋白提取率为76．62％。

研究结果表明 ,酸法提取鲢鱼鱼肉蛋白质时 ,蛋白质酸溶解的最适条件是 :酸液 pH值为2 39,溶解时间为 1 5h ,固液比为 1∶9,溶解温度为 4℃ ,鱼肉蛋白质等电点沉淀的最适 pH值为5 74。用酸法提取的鲢鱼肉蛋白质无腥味 ,色泽洁白 ,蛋白质产率高 ,可达 90 %左右。

【目的】探讨日粮中添加蛹虫草对断奶仔猪生长和免疫性能的影响及调节断奶仔猪免疫应激的机制，为新型饲料添加剂筛选提供依据。【方法】选取相同日龄、初始体重相似的杜×长×大早期断奶仔猪144头并随机分为4组：NC组（基础日粮）、LPS组（LPS+基础日粮）、LPS+500CM组（LPS+基础日粮+500 mg·kg~(-1) CM）、LPS+1 000 CM(LPS+基础日粮+1 000 mg·kg~(-1)CM)。NC组和LPS组饲喂基础日粮，LPS+500CM组和LPS+1000CM组分别按照比例将蛹虫草粉与基础日粮充分混匀后饲喂。饲养结束后，每组随机挑选6头（公母各半）屠宰，屠宰前4h对LPS组、LPS+500CM组和LPS+1000CM组腹腔注射LPS,NC组注射等量生理盐水。屠宰后采集背最长肌、心脏、肝脏、脾脏、胰脏和肾脏进行检测。【结果】对体重及采食量统计分析，结果显示，日粮添加蛹虫草饲喂仔猪对仔猪平均日采食量无显著影响，而添加500 mg·kg-1CM和1 000 mg·kg-1CM的仔猪分别比对照组仔猪体重提高了8.58%(P<0.05)和9.08%(P<0.05)。相比于NC组，LPS组仔猪脾脏指数显著降低（P<0.05），而LPS+500CM组和LPS+1000CM组仔猪脾脏指数均显著高于LPS组（P<0.05）。肝功能生物标志物和总胆汁酸检测表明，LPS组仔猪肝脏ALT水平比NC组显著升高（P <0.05）,AST、LDH、总胆汁酸水平有上升趋势。而饲料中添加有蛹虫草的LPS+500CM组和LPS+1000CM组的ALT、AST、LDH和总胆汁酸水平均比LPS组的指标显著降低。肝脏抗氧化指标和炎症因子表达检测显示，LPS组仔猪肝脏的MDA、LPO、T-AOC水平及炎症因子表达显著升高（P<0.05），而CAT、GSH-Px、T-SOD水平显著降低（P<0.01），而用蛹虫草饲喂仔猪可以显著缓解这些指标的升高或降低。LPS组骨骼肌粗蛋白和氨基酸含量显著减低（P<0.01），而日粮添加蛹虫草饲喂可以显著缓解LPS导致的蛋白和氨基酸含量减少（P<0.01）。与NC相比，LPS组炎症因子表达显著升高（P<0.05），而日粮添加蛹虫草饲喂后炎症因子表达比LPS组显著降低（P<0.05）。LPS组仔猪背最长肌中的MDA和LPO和水平显著高于NC组（P<0.01），而T-AOC、CAT、GSH-Px和T-SOD水平则显著降低（P<0.01），日粮添加蛹虫草可缓解这种异常的升高或降低。对Akt、t-mTOR、4EBP1、FOXO1磷酸化水平进行检测，发现LPS组相比于NC组具有降低的趋势，而MAFbx、MuRF1的蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。日粮中添加蛹虫草饲喂后，仔猪背最长肌Akt、FOXO1磷酸化水平显著提高（P<0.05），而MAFbx、MuRF1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。【结论】日粮中添加蛹虫草可以提高断奶仔猪生长性能和免疫性能；蛹虫草可以抑制LPS导致的背最长肌粗蛋白和总氨基酸含量降低；蛹虫草可以抑制肝脏炎症和肝细胞过度增殖和凋亡，并提高了肝脏抗氧化能力；蛹虫草可以抑制断奶仔猪背最长肌炎症、氧化应激和蛋白质分解。总之，日粮中添加蛹虫草可以提高断奶仔猪生长和免疫性能，缓解LPS导致的肝损伤及蛋白质的降解，为筛选新型饲料添加剂及预防断奶仔猪免疫应激提供理论依据。

采用分析型高效液相色谱仪对鼠曲草提取物进行分离、鉴定,并测定了鼠曲草提取物及其中3个组分对α–淀粉酶活性的影响。结果表明:从鼠曲草提取物中分离出7个组分,并鉴定出3个组分,分别为3,5–O–咖啡酰基奎宁酸,3,4–O–咖啡酰基奎宁酸,2′,4,4′–三羟基–6′–甲氧基–查尔酮–4′–O–β–D–葡萄糖;当α–淀粉酶质量浓度达到1.67 mg/m L时,鼠曲草提取物、3,5–O–咖啡酰基奎宁酸、3,4–O–咖啡酰基奎宁酸、2′,4,4′–三羟基–6′–甲氧基–查尔酮–4′–O–β–D–葡萄糖的抑制率分别为32.37%、84.53%、63.07%、71.22%,半抑制浓度IC50分别为2.71、...

应用超速离心技术对中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)血浆样品进行处理,比较去除和未去除高丰度蛋白血浆的双向凝胶电泳(2-DE)图谱。结果表明:对虾血浆高丰度蛋白经去除后,血浆样品中的低丰度蛋白得到较好的分离和浓缩。未处理样品的2-DE图谱分离的蛋白质170个,而去除高丰度蛋白后血浆2-DE图谱上分辨率增高,分离出蛋白质点520个,一些低丰度蛋白质被有效分离出来。研究证实,超速离心技术可有效去除对虾血浆高丰度蛋白(血蓝蛋白),提高低丰度蛋白的检出敏感性,为对虾等甲壳动物的血浆蛋白质组学研究提供了基础保障。