【目的】明确拮抗细菌KRS022的分类地位及对多种病原真菌的抑制作用，重点研究对作物黄萎病的防治效果及其对病原大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）的抑制效果，为抗大丽轮枝菌生防制剂的研发提供资源。【方法】通过形态学、生理生化试验及16S rDNA与gyrB基因序列串联分析确定KRS022的分类地位；采用对峙培养法和对扣熏蒸法测试KRS022对多种真菌的抑制作用；采用发酵菌液平板法、涂布法以及对扣熏蒸法明确KRS022对大丽轮枝菌的平板抑制效果；通过无细胞上清共培养法与对扣熏蒸法明确KRS022对大丽轮枝菌孢子萌发及菌丝形态的影响；通过盆栽试验及大丽轮枝菌生物量测定明确KRS022对棉花和烟草黄萎病的防治效果；利用RT-qPCR法检测KRS022激发植物免疫相关基因的表达特性。【结果】拮抗菌株KRS022为革兰氏阴性细菌，鉴定为产碱假单胞菌（Pseudomonas alcaligenes）。该菌株具有解磷、解钾、固氮功能，可产生嗜铁素，具有蛋白酶、淀粉酶、过氧化氢酶活性，属于好氧产碱型细菌，100μg·mL-1氨苄青霉素可作为该菌株的天然抗性筛选条件。KRS022对多种病原真菌（大丽轮枝菌、尖镰孢、禾谷镰孢、稻瘟病菌、灰葡萄孢、胶孢炭疽菌、果生炭疽菌）均具有不同程度的抑菌活性，对峙和对扣培养对大丽轮枝菌Vd991的抑制率分别达75.19%和99.78%。发酵菌液平板法、涂布法以及对扣熏蒸法对大丽轮枝菌的抑制率分别为96.21%、99.72%和99.44%，均能显著抑制Vd991菌丝生长；KRS022无细胞上清液与大丽轮枝菌分生孢子共培养完全抑制孢子萌发，对扣熏蒸后Vd991菌丝发生膨大、变粗。室内盆栽试验结果表明KRS022能够显著抑制棉花和烟草黄萎病的发生，并发现对植株具有促生作用，与清水处理的烟草盆栽相比，施用KRS022菌液的烟草盆栽的叶维度及单叶面积增幅分别达65.7%和146.4%；施用KRS022菌液后大丽轮枝菌在植株中的生物量显著减少，棉花和烟草对照组（单独接种Vd991）中大丽轮枝菌的生物量分别是处理组（KRS022+Vd991）的1.75和2.57倍。同时KRS022能够激发植物防御反应相关基因的表达，经KRS022处理的棉花植株中水杨酸（SA）通路标记基因GhPR1、茉莉酸（JA）通路标记基因GhAOC4和乙烯（ET）通路标记基因GhEIN2均显著上调表达，上调倍数分别是清水处理的7.23、1.69和15.05倍；经KRS022菌液处理后再接种大丽轮枝菌的棉花植株，GhAOC4和GhEIN2被显著诱导表达，上调倍数分别是只接种大丽轮枝菌的68.09和11.87倍；经KRS022无细胞上清液注射处理后NbHSR203、NbHIN1、NbPR1、NbPR2、NbPR5、NbRbohA、NbRbohB上调表达倍数分别是空白LB处理的1.98、2.79、2.52、1.25、1.70、3.28、3.44倍，均显著上调表达。【结论】拮抗细菌KRS022鉴定为产碱假单胞菌，能够产生铁载体，具有解磷、解钾、固氮并促进植物生长的潜力。对多种病原真菌均具有抑制效果，能够抑制大丽轮枝菌菌丝生长及孢子萌发，具有防治黄萎病及激发植物免疫反应的作用，是一株具有开发前景的防治黄萎病等真菌病害的生防微生物资源。

从根际土壤中筛选出1株对柑橘绿霉病菌Penicillium digitatum Sacc.具有较强拮抗活性的菌株HA-01。采用平板对峙法,测定了该菌株对柑橘绿霉病菌、柑橘青霉病菌Penicillium italicum、柑橘酸腐病菌Geotri-chum candidum等12种果蔬病原菌的拮抗活性。结果表明,菌株HA-01对12种供试病原菌均有不同程度的拮抗作用,表现出广谱抗菌活性。菌落形态观察、生理生化特性分析、16S rDNA序列同源性比对以及特异性PCR检测结果表明,该菌株为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。对马水橘的活体接种试验表明,菌株HA-01...

［目的］以小麦赤霉病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｕｅａｒｕｍ）为筛选靶标，分离石蒜根部土样中的拮抗细菌并研究其抑菌特性及机制。［方法］通过抑菌活性筛选拮抗菌株，根据菌落及细胞形态观察、生理生化试验结果和１６ｓ ｒｒＮａ基因序列分析进行菌种鉴定，并对拮抗菌株产活性抗真菌成分的最佳培养基和培养条件进行优化。通过显微观察拮抗菌发酵上清液对病原菌生长的影响，对活性物质的热稳定性、酸碱稳定性及对蛋白酶Ｋ敏感性进行测定。［结果］共获得有稳定拮抗效果的菌株７株。以其中１株对小麦赤霉病菌具有较好拮抗作用的细菌ＨＨ１作为进一步研究的对象，鉴定其为短小芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ）。抑菌试验发现．．．

【目的】为获得拮抗马铃薯早疫病菌的优良生防菌株,研究其抑菌活性物质对马铃薯早疫病菌的影响。【方法】利用平板对峙法对生防菌进行筛选,通过形态学特征和分子生物学的方法对生防菌进行鉴定,并检测其分泌生防作用相关的酶的能力。通过扫描电镜观察生防菌次级代谢产物对早疫病菌丝影响,利用高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)技术对生防菌次级代谢产物的活性成分进行鉴定,结合琼脂扩散法进一步验证活性成分。【结果】将筛选得到的生防菌株鉴定为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis),命名为C16。菌株C16能分泌淀粉酶和表面活性素,具有固氮能力,发酵液和脂肽粗提物能显著抑制马铃薯早疫病菌丝的生长,发酵液的抑菌圈可达31.5 mm, 10 mg/mL脂肽粗提物的抑菌带可达12.67 mm。早疫病菌分别与发酵液和脂肽粗提物共培养后,经扫描电镜观察发现,菌丝扭曲变形,表面产生褶皱,以及出现囊泡化等现象。对脂肽粗提物进行成分分析,发现其含有表面活性素Surfactin和伊枯草素Iturin两种物质,通过琼脂扩散法测定两种活性物质的抑菌活性,发现伊枯草素Iturin为主要抑菌活性成分。【结论】本研究筛选获得拮抗马铃薯早疫病菌的优良生防菌株为贝莱斯芽胞杆菌C16,其主要抑菌物质为伊枯草素Iturin。本研究结果为利用微生物菌剂防治马铃薯早疫病提供了备选菌种资源,同时为菌株C16的开发利用奠定了基础。

为获取对毁灭柱孢菌（ＣｙｌｉｎｄｒｏＣａｒｐｏｎ ｄｅｓｔｒｕＣｔａｎｓ（Ｚｉｎｓｓ．）ｓＣｈｏｌｔａｎ）防治效果优良的菌株，从人参根际土壤中分离到１１３株细菌，采用平板对峙法筛选出１３株拮抗性良好的拮抗细菌，生长速率法对经过滤和灭菌的菌株发酵液进行抑菌谱测定，采用盆栽试验研究其对人参锈腐病的防治效果及其人参植株促生效果。ｓＺ－２菌悬液对毁灭柱孢菌的抑制率达８８．８０％，同时具有广谱抑菌能力。盆栽试验结果表明，菌株ｓＺ－２对人参锈腐病的防治效果为６８．５０％；其对人参植株具有一定促生作用，经其处理后的人参平均植株高度、整株鲜质量、整株干质量、根长、根鲜质量和根干质量均有不同程度的增加，其中整株．．．

采用细菌学方法及分子生物学技术对菌株1505进行鉴定,并对其在防治采后柑橘炭疽病上的效果进行研究。结果显示,菌株1505对柑橘炭疽病菌具有拮抗活性,其活菌悬浮液在PDA平板上对柑橘炭疽病菌产生明显抑制作用,而灭菌发酵液和去除菌体的发酵液均无抑菌效果;连续8次在人工培养基上转代培养,菌株1505对柑橘炭疽病菌生长的抑制力没有发生明显改变;菌株1505对胶孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides(Penz.)Sacc.]引起的柑橘炭疽病有明显的防治作用,刺伤接种的防效为48.8%,自然发病的防效为46.3%。根据形态学特征和生理生化反应,结合16S rDNA序列分析结...

为筛选可抑制水产养殖中产土臭素（GSM）和2-甲基异莰醇（2-MIB）的链霉菌生长能力的益生菌，以嗜热一氧化碳链霉菌（Streptomyces thermocarboxydus）、蓝微褐链霉菌（S. cyaneofuscatus）和玫瑰黄链霉菌（S. roseoflavus）为指示菌株，进行抑菌活性筛选，并对具有抑菌活性菌株进行鉴定。本研究共筛选获得8株拮抗菌，结果表明其中2株为地衣芽孢杆菌属（Bacillus licheniformis），6株为枯草芽孢杆菌属（B. subtilis）。所筛菌株对供试链霉菌的生长均有抑制作用，其中2株可抑制嗜热一氧化碳链霉菌和玫瑰黄链霉菌的生长，另外6株对嗜热一氧化碳链霉的生长有抑制作用。筛选出的8株细菌可作为防控土腥味的益生菌，为生物控制和去除水产养殖中的土腥味提供了理论参考和实践依据。

从石榴果实中发现一株拮抗细菌,通过对菌体的形态观察、生理生化特性及16SrDNA序列测定鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);其抗菌特性研究表明:该拮抗菌对几种不同林果病原菌均有不同程度的抑制作用。由Botryosphaeria dothidea、B.parva和Zythia versoniana引起的林果病菌菌丝形态变化表现为菌丝分支增多、扭曲,部分菌丝出现断裂和细胞出现原生质浓缩现象,菌丝顶端和中部细胞膨大成球形或椭圆形,有的成念珠状,有的顶端膨大明显聚集成簇并且颜色加深,随着细胞的继续膨大,透明度增加,最后菌丝细胞变成空泡;而由Valsasordida引起的杨树腐烂病...

【目的】从大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)中鉴定木糖苷酶基因,研究其与大丽轮枝菌致病力的关系,为解析大丽轮枝菌致病分子机制提供理论依据,同时为制定更好的棉花黄萎病防治策略提供科学依据。【方法】利用生物信息学方法从大丽轮枝菌基因组数据库中鉴定全部木糖苷酶基因,并对基因编码蛋白的结构域、基因的染色体定位及进化关系等进行分析。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测木糖苷酶基因在不同抗/感棉花品种根系分泌物培养0、6、12、24和48 h大丽轮枝菌中的表达量。利用寄主诱导的基因沉默(host-induced gene silencing,HIGS)技术对木糖苷酶基因VdxyL3在大丽轮枝菌侵染过程中的功能进行初步分析。将VdxyL3的目标片段转化棉花,采用伤根法接种大丽轮枝菌Vd991,观察转化植株的表型,调查病情指数,同时利用qRT-PCR技术对植株中真菌生物量和VdxyL3的表达量进行检测。【结果】利用生物信息学方法从大丽轮枝菌中查找出13个木糖苷酶基因(VdxyL1—VdxyL13),其编码序列长度介于1 461—2 544 bp,蛋白质分子量介于38.78—90.97 kD,理论等电点介于4.67—5.89。结构域和进化树分析发现13个木糖苷酶基因中包括9个糖苷水解酶43家族成员、1个3家族成员和3个31家族成员。染色体定位分析发现13个基因分布在6条染色体上,未形成基因簇。qRT-PCR结果发现选取的6个基因均受到根系分泌物的诱导,在一种或多种根系分泌物中培养6 h或12 h后,表达量均明显升高,然后降低。其中VdxyL3受海岛棉根系分泌物诱导后表达量明显升高,表明该基因的表达明显受海岛棉根系分泌物的诱导。HIGS研究结果表明,接菌14 d和21 d后转化VdxyL3基因干扰片段的棉花发病明显较重,其病情指数(33.3和83.9)明显高于空载体对照(21.7和66.1)。qRT-PCR分析发现转化VdxyL3基因干扰片段的棉花植株茎中VdxyL3的表达量明显低于空载体对照,真菌生物量显著多于对照。【结论】利用HIGS技术将VdxyL3基因沉默后,棉株的抗病性明显降低,表明VdxyL3在大丽轮枝菌致病及宿主-病原体互作过程中可能发挥着重要的作用。

从江苏句容酥梨黑斑病病叶上分离得到1株对梨黑斑病菌有明显抑制作用的拮抗细菌,代号JR-C,经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。胞外酶检测显示:该菌产生蛋白酶和纤维素酶,不产生几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶。此外,该菌的代谢产物粗提物可抑制梨黑斑病菌菌丝的正常生长。代谢产物粗提物处理后的梨黑斑病菌菌丝愈发致密、短粗,分支也明显减少。室内测定该菌对梨轮纹病菌、梨腐烂病菌、梨炭疽病菌和稻瘟病菌等多种病原真菌均具有较好的拮抗作用。梨黑斑病主要是叶部病害,而拮抗细菌JR-C菌株从梨树叶片上分离获得,拮抗活性高,拮抗谱广,这为后续利用该菌研制生防菌剂防治梨黑斑病及其他作物病害提供了...

为了防治棉花黄萎病对棉花生产的危害,利用抗病基因培育抗病品种是最经济有效的方法。从陆地棉中克隆了1个WRKY转录因子基因,命名为GhWRKY48;其编码序列全长为882 bp,编码293个氨基酸残基,预测分子质量和等电点分别为32.68 ku和6.10。qPCR组织特异性表达分析结果表明,GhWRKY48在根、茎和叶中均表达,而在茎中为优势表达;同时GhWRKY48表达受到大丽轮枝菌、茉莉酸和水杨酸的诱导。通过病毒诱导基因沉默技术获得GhWRKY48基因沉默植株。对基因沉默植株接种大丽轮枝菌进行抗病性分析,结果显示,沉默植株的病株率和病指均低于对照植株,表明沉默GhWRKY48基因能够提高棉株抗病性。综上所述,GhWRKY48是一个负调控转录因子,抑制下游抗病基因的表达,从而参与棉花对大丽轮枝菌的抗性;因此,GhWRKY48基因可以作为一个理想的候选基因用于棉花的抗病育种。

从泰山土壤中分离获得1株细菌4'531,对其进行了形态特征观察、生理生化特征测定及16S rDNA序列分析,并构建了包括其在内的10株相关种属菌株的系统发育树,最后研究了其对烟赤星病(Alternariaalternate)、黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、棉立枯病菌(Rhizoctonia solani)3种植物病原真菌的拮抗作用。结果表明,4'531菌株属于类芽孢杆菌属(Paenibacillus),与其亲缘关系较近菌株Paenibacillus polymyxa(AJ320493)的同源性达98%;结合形态和生理生化特征,鉴定该菌株为多粘类芽孢杆菌(Paenibac...

［目的］为获得高效拮抗３种兰花病原真菌胶孢炭疽菌、尖孢镰孢菌和腐皮镰孢菌的菌株。［方法］使用平板对峙法筛选拮抗菌株，结合形态特征观察、生理生化试验和１６Ｓ ｒｒＮＡ基因序列分析的方法对目的菌株进行鉴定。［结果］筛选获得５株同时拮抗三种病原菌的菌株，其中菌株ＧＴ３１２拮抗效果明显。１６Ｓ ｒｒＮＡ基因序列分析显示，该菌株与ＢＡｃｉｌｌｕＳ ＡｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆＡｃｉｅＮＳ（模式菌株ｆＺＢ４２Ｔ）相似性最高，为９９．９３％。菌株形态特征观察、生理生化试验结果与Ｂ．ＡｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆＡｃｉｅＮＳ描述一致。［结论］菌株ＧＴ３１２可同时拮抗３种兰花病原真菌，鉴定为解淀粉芽孢杆菌，为兰花病害的生物防．．．

为寻找防治烟草黑胫病新途径,2001至2003年,从湖南永州和宁乡等地烟草黑胫病发病严重的田块采集健株,共分离到内生细菌株120株,经测定,8株内生细菌菌株在室内有较强的拮抗作用,这8株内生细菌与烟草黑胫病菌共培结果显示,55y,NN-3,YN-4和YN-10对烟草黑胫病菌抑菌效果均在66%以上.根据内生细菌形态特征和生理生化性状,初步鉴定内生细菌55y为假单胞杆菌属铜绿假单胞菌,NN-3为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌,YN-4,YN-10为芽孢杆菌属凝结芽孢杆菌,且这4菌株均为烟草内生细菌.