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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
樊瑾瑛 应琼琼 党亮 奚耕思
【目的】对拟黑多刺蚁（Ｐｏｌｙｒｈａｃｈｉｓ ｖｉｃｉｎａ ｒｏｇｅｒ）成虫热激蛋白９０（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ Ｐｒｏｔｅｉｎ ９０，ｈｓＰ９０）基因进行ｒｎａ干扰（ｒｎａｉ），为分析ｈｓＰ９０基因的功能及将ｒｎａｉ技术用于害虫防治提供参考。【方法】采用ｔｒｉｚｏｌ法提取拟黑多刺蚁总ｒｎａ，反转录合成ｃＤｎａ第一链用于ｈｓＰ９０基因的克隆。利用ｔ７ｒｉｂｏＭａＸｔＭ ｅＸＰｒｅｓｓ ｒｎａｉ ｓｙｓｔｅＭ将ｈｓＰ９０合成双链ｒｎａ（Ｄｏｕｂｌｅ－ｓｔｒａｎＤｅＤ ｒｎａ，Ｄｓｒｎａ），将其配制成１２０，６０，３０，１５和７．５ｎｇ／μｌ的溶液饲喂拟黑多刺蚁雌蚁、雄蚁和工蚁成虫进行ｒｎａｉ，共饲．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
樊瑾瑛 应琼琼 党亮 奚耕思
【目的】对拟黑多刺蚁(Polyrhachis vicina Roger)成虫热激蛋白90(Heat shock protein 90,HSP90)基因进行RNA干扰(RNAi),为分析hsp90基因的功能及将RNAi技术用于害虫防治提供参考。【方法】采用Trizol法提取拟黑多刺蚁总RNA,反转录合成cDNA第一链用于hsp90基因的克隆。利用T7RiboMAXTM Express RNAi System将hsp90合成双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),将其配制成120,60,30,15和7.5ng/μL的溶液饲喂拟黑多刺蚁雌蚁、雄蚁和工蚁成虫进行RNAi,共饲...
[期刊] 水产学报
[作者]
孙丽颖 张木子 黎明 袁莉霞 王日昕
为了探讨急性氨氮胁迫对黄颡鱼组织中抗氧化酶活性及HSP70和HSP90基因mRNA表达水平的影响,实验随机挑选了360尾黄颡鱼[初体质量(17.25±0.05) g],分别暴露于含有0(对照)、5.70(低浓度组)、28.50(中浓度组)和57.00 (高浓度组) mg/L总氨氮浓度的水体中,进行96 h的急性胁迫实验。实验开始后,分别于0、12、24、48和96 h取样。结果显示,氨氮胁迫发生后,低、中浓度组实验鱼肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)活性呈先升高后降低趋势,而高浓度组则持续降低;低、中、高浓度组实验鱼肝脏中丙二醛(MDA)含量在胁迫开始后显著升高;3 h时,高浓度组实验鱼肝脏中SOD活性达到最低,而MDA含量最高;24 h后,高浓度组实验鱼肝脏中过氧化氢酶(CAT)活性显著升高;低、中、高浓度组实验鱼肝脏中HSP70基因的mRNA表达量呈先降低后升高趋势,而鳃中HSP70基因表达量持续升高,但脑中HSP70基因在0 h后显著降低;氨氮胁迫3 h时,低、中、高浓度组实验鱼肝脏和脑中HSP70基因表达量显著低于对照组,而在鳃中正好相反;相比HSP70基因,高氨氮浓度组实验鱼肝脏和鳃中HSP90基因的mRNA表达量在24 h时达到最高。研究表明,不同浓度的氨氮胁迫会对黄颡鱼抗氧化酶活性造成不同程度的抑制,原因与丙二醛的积累量有关;相比HSP90基因,黄颡鱼HSP70基因的表达量在氨氮胁迫发生后迅速上调,这种生理调控机制提示HSP70在应对急性氨氮胁迫时发挥着更重要的作用。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨森 谭娥 奚耕思
【目的】克隆拟黑多刺蚁（Polyrhachis vicina Roger）5-HT2A受体基因的cDNA序列，并对其核苷酸序列和系统进化进行分析，检测其在拟黑多刺蚁不同发育阶段幼虫和不同品级成虫mRNA的表达情况，为探究5-HT2A受体基因对拟黑多刺蚁生长发育的调控规律提供证据。【方法】从拟黑多刺蚁中提取总RNA，RT-PCR扩增并克隆Pv5-HT2A受体基因；用ProtParam预测蛋白质序列，Blast比较蛋白质序列同源性，用Clustal X进行核酸和氨基酸序列比对，MEGA 6.0比邻法生成系统进
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
朱峰 王芳 王东 左青 朱晓峰 王媛媛 段玉玺 陈立杰
Hsp90基因是真核生物中广泛存在且非常保守的热激蛋白基因家族中的重要成员,在生物的抗逆胁迫过程中起重要作用。从番茄基因组扩增Hsp90基因,连接到载体pCAMBIA1302上,构建了表达载体pCAM-Hsp90,利用实时定量荧光技术检测了番茄接种南方根结线虫后Hsp90基因的表达水平,结果表明:在20~25dpi后番茄根部Sl-Hsp90基因大量表达。此外,南方根结线虫的雌虫和二龄幼虫J2的Mi-Hsp90基因在高温和低温胁迫时表达量都高于对照,而且在35℃时表达量要高于4℃时的表达量,在J2中的表达量高于雌虫的表达量。说明Hsp90基因在番茄抗线虫侵染以及线虫适应环境方面起到非常重要的作用...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
王芸 李健 张喆 何玉英 常志强 陈萍 李吉涛 刘德月
研究了pH、氨氮胁迫对中国对虾Fenneropenaeus chinensis血细胞、肝胰腺、鳃和肌肉组织HSP90基因时空表达的影响。分别将中国对虾暴露于pH 7.0、9.0的水体中148h和不同氨氮浓度的水体中96h,结果表明,pH(7.0,9.0)胁迫条件下中国对虾鳃、肌肉和血细胞HSP90基因表达均上调,肝胰腺HSP90基因表达对两种pH胁迫差异明显:pH 7.0胁迫条件下,HSP90基因表达3h达峰值后明显降低;pH 9.0胁迫时,HSP90基因表达水平逐渐升高,整个胁迫过程中均显著高于对照组(P
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
周丹 苏泳霖 钟如卓 郭志诚 邬婧 郑哲 王庆恒
热休克蛋白Hsp90在蛋白质正确折叠、胞内物质运输、细胞增殖调控、配子发生等过程中发挥重要的作用。本研究利用RACE技术克隆获得了光裸星虫热休克蛋白Hsp90 (SnHsp90) cDNA全长序列。SnHsp90全长3110 bp，其中，3′UTR为582 bp，5′UTR为72 bp，开放阅读框为2456 bp，编码818个氨基酸。序列分析结果显示，SnHsp90蛋白具有1个信号肽，存在B型Hsp90的3个标签序列FLREL、IGQFGVGFYS、LPLNVSRE以及保守模块GxxGxG，表明SnHsp90属于Hsp90B亚族。与其他物种的Hsp90氨基酸序列比对发现，SnHsp90与鸭嘴海豆芽(Lingula anatine) Hsp90相似度最高，为77.72%。三维结构建模发现，Hsp90在不同物种之间的空间构象具有较高保守性。系统进化树分析显示，SnHsp90先与小头虫(Capitella teleta)、水蛭(Helobdella robusta)等环节动物的Hsp90聚为一支，再与鸭嘴海豆芽等其他无脊椎动物聚为一大支，而脊椎动物聚为另一大支，表明SnHsp90与小头虫Hsp90亲缘关系最近。RT-PCR结果显示，SnHsp90在光裸星虫的体壁、收吻肌、肾管等组织中均有表达。SnHsp90也可在卵母细胞不同发育时期表达，其中，在Egg2和Egg6期显著高表达(P<0.05)，暗示，SnHsp90可能参与到光裸星虫卵母细胞的蛋白质正确折叠、卵黄合成与环境抗逆等过程。研究结果为进一步探究光裸星虫卵母细胞发育的分子机制积累了基础资料。
[期刊] 水产学报
[作者]
孙田田 苏永全 洪婧妮 邬阳 张曼 毛勇
为深入了解真蛸热应激响应机制,实验以真蛸的应激蛋白为研究对象,借助同源扩增和cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术获得真蛸热休克蛋白90(HSP90)的cDNA全序列(2 709 bp),它包含119 bp的5'非编码区(untranslated regions,UTR)、454 bp的3'UTR和2 136 bp的开放阅读框(opening reading frame,ORF),ORF共编码711个氨基酸,推算其分子量为81.5 ku,理论等电点为5.09。同源分析显示,所推导的氨基酸序列高度保守,并且含有HSP90家族特有的5...
[期刊] 水产学报
[作者]
周向红 李信书 王萍 阎斌伦 滕亚娟 易乐飞
为了研究HSP90在条斑紫菜胁迫耐受中的作用,克隆了条斑紫菜HSP90基因(命名为PyHSP90),采用定量RT-PCR研究了其表达规律。PyHSP90基因包含一个长2274nt的完整开放阅读框,编码757个氨基酸。PyHSP90蛋白定位于细胞质中,具有HSP90蛋白家族的特征序列和保守结构域,与多种生物的HSP90具有较高的序列一致性。在进化树上条斑紫菜等红藻的HSP90与隐藻的亲缘关系最近,与绿藻和陆生植物亲缘关系较远。低温和高温胁迫都能显著性地诱导条斑紫菜叶状体PyHSP90基因的表达,而且表达量与胁迫程度成正相关;低盐胁迫下PyHSP90基因表达上调;而失水胁迫下PyHSP90基因表达...
[期刊] 水产学报
[作者]
张俊玲 施志仪 程琦 贾亮
热休克蛋白90(heat shock protein90,HSP90)是细胞内主要的伴侣蛋白,在激素信号转导、细胞分化、细胞增殖与凋亡、形态发生与进化、变态发育及应激防御等多重调节路径中发挥关键作用。采用实时荧光定量RT-PCR技术检测了牙鲆两种HSP90基因在仔鱼发育和在成年组织中的表达变化。结果表明,HSP90α在成鱼骨骼肌、肠和胃中有较高的表达,而HSP90β在成鱼脑、脾脏和肾脏中有较高的表达。HSP90αmRNA水平在仔鱼变态期间迅速增加,至变态高峰G期达到最高水平;相反,HSP90β转录在仔鱼整个变态期间变化不是特别明显。鉴于甲状腺激素(thyroid hormone,TH)在牙鲆变...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
刘秀荣 王丛丛 许强华
为研究南极鱼类HSP90β蛋白与低温适应的相关性,本研究克隆获得了南极独角雪冰鱼(Chionodraco hamatus,CH)热休克蛋白HSP90β基因的完整开放阅读框,并以尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus,ON)HSP90β蛋白为对照,进行低温胁迫下的原核表达研究。结果表明:克隆获得的独角雪冰鱼HSP90β基因编码区全长为2 184 bp,推定编码728个氨基酸。多重序列比对显示,独角雪冰鱼HSP90β与其他鱼类HSP90β的氨基酸序列同源性在87%以上;蛋白结构域分析发现,独角雪冰鱼HSP90β具有HSP90家族的保守信号区,其重要功能位点的氨基酸残基非常保守。构建...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王冠华 李鑫 郭长宁 于建光 侯茜 辛文
【目的】对金纹细蛾Ｈｓｐ９０基因进行生物信息学和表达模式分析，为深入研究金纹细蛾ｐｒＨｓｐ９０与生长发育和抗逆行为的关系奠定基础。【方法】利用分子克隆技术获得金纹细蛾Ｈｓｐ９０基因片段，并对其进行生物信息学分析。同时利用ｒＴ－ｑｐＣｒ技术检测Ｈｓｐ９０在金纹细蛾不同组织、不同生长发育阶段和高温胁迫后的表达情况。【结果】获得了金纹细蛾Ｈｓｐ９０基因的一条长度为９４２ｂｐ的片段序列，命名为ｐｒＨｓｐ９０，登录号为Ｋｐ６７１６００。序列分析显示，其对应的氨基酸序列与其他昆虫的相似性很高，与棉铃虫（ＡＤｐ３７７１０．１）、斜纹夜蛾（ＡＤＫ５５５１６．１）、烟夜蛾（ＡＤＭ２６７４２．１）等鳞翅目昆虫的同．．．
关键词：
金纹细蛾 热激蛋白 生长发育 高温胁迫
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
生安志 鞠辉明 李贵阳 李杰 莫照兰
利用ｑＰＣＲ方法，检测ＨｓＰ９０α和ＨｓＰ９０βｍ ＲＮＡ在不同月龄牙鲆（ＰＡＲＡｌｉＣＨｔＨｙｓ ｏｌｉｖＡＣｅｕｓ）不同组织的表达水平，进一步检测在不同温度刺激、鳗弧菌感染后的表达变化。结果显示，ＨｓＰ９０α和ＨｓＰ９０β在不同发育期的１３种组织（肝脏、脾脏、头肾、后肾、心、肌肉、背皮、胃、肠、鳃、腹鳍、脑和血液）中均有表达。ＨｓＰ９０β表达水平整体高于ＨｓＰ９０α；８月龄牙鲆在肝、鳃、背皮、背肌、腹鳍的ＨｓＰ９０α表达量要显著高于其他发育期（１月龄、１２月龄、２４月龄）同组织的表达量（Ｐ＜０．０５），而ＨｓＰ９０β在不同月龄牙鲆的表达量也存在差异，在肝和肠的表达量较高，在鳃、背肌和腹鳍的．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王海鸿 雷仲仁
【目的】比较温度胁迫对两种生物型烟粉虱体内hsps诱导表达的差异。【方法】根据烟粉虱hsp70基因、hsp90基因和18Sr RNA序列,设计并合成引物用于实时定量RT-PCR,扩增产物连接到质粒pMD18-T载体上,重组质粒经筛选、签定和10×梯度稀释后作为模板,用于标准曲线的制作和样品检测,检测温度胁迫对B型和ZHJ-1型烟粉虱hsp70和hsp90mRNA转录水平的诱导情况。【结果】在受到34℃、37℃、40℃和43℃的高温胁迫时,两者hsps的诱导水平无显著差异(P>0.05);在受到4℃、7℃、10℃和13℃的低温胁迫时,B型烟粉虱体内hsps的诱导表达水平显著超过了ZHJ-1型烟粉...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
韩俊英 李健 李吉涛 陈萍 李华
将脊尾白虾热休克蛋白90基因克隆到原核表达载体pET-30a中,经酶切验证和DNA测序鉴定后,将重组质粒转化表达宿主大肠杆菌Rosetta,优化温度、时间、IPTG和OD600表达条件进行诱导表达,收集菌液,进行SDS-PAGE和质谱检测,并用Quantity one软件分析蛋白表达水平。结果表明,成功构建了含脊尾白虾HSP90基因的重组表达载体pET-30a-HSP90,表达目的蛋白相对分子量为82.7kD,为HSP90蛋白。通过条件优化认为重组菌株Rosetta/pET-30a-HSP90的最佳诱导温度为37℃,最佳IPTG浓度为1.0mmol/L,最佳诱导时机和诱导时间分别为0.58h、...
关键词：
脊尾白虾 热休克蛋白90 原核表达
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