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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
黄弈 韩成云 支添添 任春梅
为了探明拟南芥ｓｓｃｄ１–１突变体中ｓｓｃｄ１–１突变基因表达水平的降低是由剪切效率所致还是由自身启动子影响所致，分别构建了由外源３５ｓ启动子驱动的ｓｓｃｄ１正常基因和ｓｓｃｄ１–１突变基因的表达载体及由内源自身启动子驱动的ｓｓｃｄ１正常基因和ｓｓｃｄ１–１突变基因的表达载体，并将其转入到拟南芥ｓｓｃｄ１–１突变体中。采用ＲＴ–ＰｃＲ分析ｓｓｃｄ１–１突变基因的表达。结果显示：外源３５ｓ启动子驱动的ｓｓｃｄ１–１突变基因的表达与正常基因相比没有明显差别，而内源自身启动子驱动的ｓｓｃｄ１–１突变基因的表达显著降低，这表明ｓｓｃｄ１–１的点突变没有影响其剪切效率；ｓｓｃｄ１–１突变基因表达水平的降．．．
关键词：
拟南芥 sscd1–1 启动子 基因表达
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
曾祥如 雷雨婷 姜依何 任春梅
为探索花青素生物合成的调控机制,以模式植物拟南芥野生型Col–0和酪氨酸降解途径缺陷突变体sscd1为试验材料,分析5种浓度(0、0.1、0.5、1.0、2.0mmol/L)外源苯丙氨酸处理后花青素的积累和花青素生物合成相关基因的表达,探讨酪氨酸降解途径受阻是否影响苯丙氨酸诱导花青素的积累。结果发现:外源添加不同浓度苯丙氨酸能提高拟南芥幼苗花青素的含量,而且花青素的含量随着苯丙氨酸浓度的增加而增多;苯丙氨酸处理后,sscd1突变体幼苗中花青素的积累增多,同时花青素生物合成基因,如PAL、CHI、CHS、DFR、LDOX、UF3GT的表达水平在sscd1突变体中都显著上调,表明SSCD1基因突变会阻断酸酪氨酸降解,增加苯丙氨酸诱导花青素的合成。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
曾祥如 姜依何 任春梅
为了解色氨酸处理是否影响sscd1的细胞死亡,以拟南芥野生型Columbia(Col–0)和sscd1突变体为试验材料,用色氨酸处理,观察并统计幼苗的死亡情况,检测叶绿素含量,分析酪氨酸降解途径基因HGO、MAAI和SSCD1以及活性氧诱导基因BAP1、OXI1、ZP的表达。结果表明:色氨酸处理能明显抑制sscd1突变体幼苗死亡,增加叶绿素的合成,抑制sscd1突变体中酪氨酸降解途径基因HGO和MAAI以及活性氧诱导基因BAP1、OXI1、ZP的上调。推测色氨酸可能通过增加叶绿素的生物合成,减少活性氧的产生来抑制酪氨酸降解途径突变体sscd1的细胞死亡。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
曾祥如 姜依何 任春梅
为了解色氨酸处理是否影响sscd1的细胞死亡,以拟南芥野生型Columbia(Col–0)和sscd1突变体为试验材料,用色氨酸处理,观察并统计幼苗的死亡情况,检测叶绿素含量,分析酪氨酸降解途径基因HGO、MAAI和SSCD1以及活性氧诱导基因BAP1、OXI1、ZP的表达。结果表明:色氨酸处理能明显抑制sscd1突变体幼苗死亡,增加叶绿素的合成,抑制sscd1突变体中酪氨酸降解途径基因HGO和MAAI以及活性氧诱导基因BAP1、OXI1、ZP的上调。推测色氨酸可能通过增加叶绿素的生物合成,减少活性氧的产生来抑制酪氨酸降解途径突变体sscd1的细胞死亡。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
武霞 张一南 赵楠 张莹 赵瑞 李金克 周晓阳 陈少良
【目的】Annexins是原核生物和真核生物中普遍存在的一大类膜联蛋白家族,能够参与氧化胁迫、热胁迫、干旱胁迫和盐胁迫等许多胁迫响应过程。但在胡杨中,对膜联蛋白家族在抗逆性中的作用情况还缺乏了解。本文研究胡杨Anneixn1在植物耐受渗透胁迫和干旱中的作用。【方法】本研究对渗透胁迫诱导的PeAnn1基因表达进行检测,对Pe Ann1进行相关生物信息学分析,与毛白杨、拟南芥、大豆和水稻膜联蛋白基因家族成员进行序列比对和系统进化树分析,以过表达PeAnn1拟南芥(PeAnn1-OE1和PeAnn1-OE2)、Annexin1突变体(atann1)和野生型拟南芥(WT)为实验材料,利用不同浓度甘露醇处理(0、150、200、250、300 mmol/L)模拟渗透胁迫,并对各株系进行土壤干旱和复水处理,测定了不同处理株系的萌发率、根长、叶绿素含量及荧光参数、过氧化氢含量、抗氧化酶活性和基因表达等指标,分析了不同基因型拟南芥的抗旱性。【结果】短期渗透胁迫处理诱导了胡杨叶片中PeAnn1基因的上调表达。PeAnn1基因序列与毛白杨PtAnn1相似度最高,与PtAnn1亲缘关系较近。在甘露醇培养基上,过表达PeAnn1拟南芥的生存率和根长生长受到明显的抑制,且随着甘露醇浓度的升高,差异显著(P <0.05)。复水后,PeAnn1转基因拟南芥光合参数的恢复程度也较低。在渗透胁迫下,转基因植株抗氧化物酶SOD、POD、CAT的活性以及编码基因的表达量显著低于野生型和突变体,不能清除过多活性氧,导致氧化伤害。【结论】以上结果表明,过表达PeAnn1降低了拟南芥对水分逆境的抗性。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王艺霖 赵丽伟 李昆志
【目的】构建拟南芥转录因子Dof1基因的原核表达载体,进行原核表达并制备其蛋白抗体。【方法】利用RT-PCR方法从拟南芥中克隆转录因子Dof1基因,将其连接到原核表达载体pET-32a(+)上,构建重组原核表达载体pET32a(+)-Dof1,经酶切鉴定和测序验证后将其转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导后,纯化重组蛋白,以分离到的重组蛋白为抗原免疫小鼠制备抗血清,检测植物中Dof1蛋白表达水平。【结果】成功构建了拟南芥转录因子Dof1基因的原核表达载体pET32a(+)-Dof1,在28℃、1mmol/L IPTG诱导6h的大肠杆菌中可高效表达分子质量约为42ku的重组蛋白,其分泌到细胞...
关键词：
Dof 转录因子 载体构建 原核表达
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
刘晓婧 温馨 赵瑞 陈少良 赵楠 李金克 周晓阳 尧俊
【目的】冷激蛋白（CSPs）是普遍存在于原核和真核生物中的一类蛋白，能够参与冷、干旱和盐等非生物胁迫。在胡杨中，冷激蛋白的抗逆功能还少有研究。本文旨在通过研究胡杨PeCSP1在植物耐盐性中的作用，进一步揭示植物耐盐的生理与分子机制。【方法】参照NCBI数据库信息，使用primer5设计引物，利用Mega7软件进行多重序列比对及进化树分析，利用荧光定量PCR检测基因表达量。以转基因株系PeCSP1(OE1、OE2)，野生型，转空载体为材料，对各基因型拟南芥进行不同盐浓度处理，从生理生化及分子生物学角度研究胡杨PeCSP1在盐胁迫中的响应机制。【结果】胡杨PeCSP1与毛果杨PtCSP1蛋白序列相似度高，亲缘关系较近。在短期盐胁迫下，胡杨叶片PeCSP1基因下调表达。在NaCl(75、100、125 mmol/L)处理后，过表达PeCSP1拟南芥植株种子萌发率和根长的下降幅度高于野生型（WT）和转空载体（VC），而且转基因拟南芥根细胞中Na~+含量显著高于WT和VC。盐胁迫下，WT和VC抗氧化酶（SOD、POD、CAT）的活性显著上升，酶活提高的幅度明显高于OE1、OE2。在土培条件下，盐处理12 d后，转基因株系的最大光量子效率未有明显下降，但相对电子传递效率、实际光合量子产量和叶绿素含量受到的抑制作用高于WT和VC。【结论】过表达胡杨PeCSP1负调控拟南芥耐盐性。
[期刊] 华北农学报
[作者]
张小梅 韩念法 张美祥 李广录 范三红 郭蔼光
从经水杨酸处理的拟南芥开花期植株中获得cDNA,扩增得到Alpha-dioxygenase 1(DOX1)基因,进行原核表达、纯化和生物活性检测。利用原核表达载体pMAL-c4x在T7 Express CompetentE.coli和BL21(DE3)-RIPL codon+菌株中表达DOX1,经Amylose Resin亲和层析柱纯化。SDS-PAGE结果表明,重组融合蛋白在BL21(DE3)-RIPL codon+中的表达通过灰度值比较分析以可溶性为主,表达率约3.7%,纯化的DOX1纯度可达45%。愈创木酚法表明,可溶性重组蛋白不具有过氧化物酶活性;2,4-DNP法测试表明可溶性重组蛋白...
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
柯星星 刘亚坤 徐雪珍 林怡馨 郑志富 郑月萍
【目的】甘油脂是生物膜的重要组成成分，植物中的ATS1催化甘油脂原核合成途径的第1步酰化反应，但目前ATS1在植物正常生长发育中的功能并不完全清楚。本研究目的是运用反向遗传学手段剖析ATS1功能丧失对植物生长发育的影响。【方法】运用CRISPR/Cas9基因编辑技术，构建拟南芥Arabidopsis ATS1基因功能丧失型突变体，并比较分析突变体与野生型在整个生育期的表型差异。【结果】分子鉴定显示：多个突变体中ATS1基因的第1个外显子碱基数呈非3的倍数的缺失或插入，从而导致移码突变或翻译提前终止。这些突变体的叶片中多不饱和脂肪酸C16:3的含量急剧下降，而C18:3含量则显著增加。相随的表型分析显示：ATS1基因功能丧失有时会使叶片略显黄色，但对种子发育未产生可见影响。【结论】在正常生长条件下，ATS1并非拟南芥种子发育所必需的。图3表2参25
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
柯星星 刘亚坤 徐雪珍 林怡馨 郑志富 郑月萍
【目的】甘油脂是生物膜的重要组成成分，植物中的ATS1催化甘油脂原核合成途径的第1步酰化反应，但目前ATS1在植物正常生长发育中的功能并不完全清楚。本研究运用反向遗传学手段剖析ATS1功能丧失对植物生长发育的影响。【方法】运用CRISPR/Cas9基因编辑技术，构建拟南芥Arabidopsis thaliana ATS1基因功能丧失型突变体，并比较分析突变体与野生型在整个生育期的表型差异。【结果】分子鉴定显示：多个突变体中ATS1基因的第1个外显子碱基数呈非3的倍数的缺失或插入，从而导致移码突变或翻译提前终止。这些突变体的叶片中多不饱和脂肪酸C16:3的含量急剧下降，而C18:3含量则显著增加。相随的表型分析显示：ATS1基因功能丧失有时会使叶片略显黄色，但对种子发育未产生可见影响。【结论】在正常生长条件下，ATS1并非拟南芥种子发育所必需的。图3表2参25
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
袁友泉 李超超 许馨月 张志宏 刘月学
为研究草莓ＡＰ１同源基因ＦＡＡＰ１的功能，构建了其植物表达载体ＰＢＩ１２１－ＦＡＡＰ１，并导入到农杆菌菌株ＧＶ３１０１中。利用花序浸染法将该基因导入拟南芥，经抗性筛选、ＰＣＲ检测表明获得了３个转化株系。结果显示，与对照相比，转基因株系明显早花，成花时间可提早１０ｄ以上；同时其营养生长受到抑制，植株个体矮小，莲座叶数目减少；在早花的同时，转化株系花器官异常，不能形成种子。表明草莓ＦＡＡＰ１基因参与了成花过程的调控。
关键词：
草莓 FaAP1 拟南芥 超表达
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
袁友泉 李超超 许馨月 张志宏 刘月学
为研究草莓AP1同源基因Fa AP1的功能,构建了其植物表达载体p BI121GFa AP1,并导入到农杆菌菌株GV3101中.利用花序浸染法将该基因导入拟南芥,经抗性筛选、PCR检测表明获得了3个转化株系.结果显示,与对照相比,转基因株系明显早花,成花时间可提早10d以上;同时其营养生长受到抑制,植株个体矮小,莲座叶数目减少;在早花的同时,转化株系花器官异常,不能形成种子.表明草莓Fa AP1基因参与了成花过程的调控.
关键词：
草莓 Fa AP1 拟南芥 超表达
[期刊] 西南农业学报
[作者]
郭丽红 李念 徐亚 曾洁媛
【目的】探讨热激因子AtHsfA1a突变对热胁迫中拟南芥抗坏血酸过氧化物酶的影响。【方法】以T-DNA插入AtHsfA1a基因突变拟南芥及野生型植株为材料,采用分光光度法比较热胁迫下不同基因型植株的抗坏血酸过氧化物酶(APX,EC1.11.1.7)活性的变化,RT-PCR法研究AtHsfA1a对APX表达的影响,染色质免疫沉淀技术和凝胶阻滞电泳分析体内外研究AtHsfA1a与APX基因启动子区的结合情况。【结果】在热胁迫下AtHsfA1a基因突变拟南芥植株中的APX的活性低于野生型,且AtHsfA1a基因
[期刊] 华北农学报
[作者]
樊新萍 乔永胜 牛西午 Zoe A Wilson
利用不可产生花粉的突变体作为研究花药和花粉发育的途径,以证实涉及花粉发育的基因及其在基因网络中的作用。研究结果表明,拟南芥中MYB26/MALE STERILE35(MS35)雄性不育基因会调控药室内壁次生加厚发育,影响其后的花药开裂,并可上调木质素生物合成途径。而At2g47500基因是在芯片分析ms35/myb26突变体中涉及花粉发育表达下调的一个未被鉴定的基因。通过生物信息学分析发现,At2g47500基因是一个与微管发育有关的基因,在整个植株都表达,包括花发育阶段。利用拟南芥基因库筛选该基因中的T-DNA插入突变体,并通过PCR鉴定,得到插入位点在启动子和外显子的纯合突变体。通过表型分...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
蒋琦 王倩
【目的】分析拟南芥xtc1突变体茎部表皮蜡的组分和含量,并鉴定导致xtc1突变体表型的基因。【方法】通过气相色谱法分析拟南芥xtc1突变体与Ler野生型茎部表皮蜡的成分;利用图位克隆确定突变基因位点,通过在拟南芥xtc1突变体中过量表达FATB基因,验证突变位点与FATB基因的关系。【结果】拟南芥xtc1突变体茎部表皮蜡总量约为Ler野生型的1/3,且各组分含量均明显减少;将突变基因定位在第1染色体顶端物理距离为80kb的2个标记T27G7-3和F22O13-1之间,该区域含有21个基因。T-DNA插入突变体观察及测序分析表明,xtc1突变体在At1g08510(FATB)基因的第1个外显子上...
关键词：
表皮蜡 FATB 图位克隆 拟南芥
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