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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李依驰 崔看 程鹏 陈锦 莫旭东 张小波 肖浪涛 夏石头
以拟南芥野生型(Col)植株和突变体rfc3–1植株为材料,经叶片酶解、细胞裂解和细胞核收集与染色后,采用流式细胞仪检测分析了RFC3基因突变对叶片细胞数的影响,以建立植物细胞数直接高效检测试验体系。结果表明,野生型植株第1、2片真叶与第3、4片真叶的平均细胞数分别是rfc3–1植株相应叶片平均细胞数的1.6倍和2.6倍,说明RFC3基因突变严重影响了植物细胞的分裂增殖;建立了拟南芥叶片细胞数直接高效检测体系,其检测结果的变异值(CV)均小于5%。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陶章生 徐雯 张苗苗 彭良才 丰胜求
将拟南芥CesA家族基因的高变区克隆到融合表达载体pGEX-4T-3中,构建重组质粒pGEX-AtCe-sAs,在大肠杆菌JM109中经IPTG诱导表达谷胱甘肽巯基转移酶融合蛋白(GST-AtCESAs)。采用GST亲和层析法纯化GST-AtCESAs并制备了多克隆抗体。Western-blotting检测表明,抗体Anti-CESA4和Anti-CE-SA7存在明显的交叉反应,Anti-CESA1、Anti-CESA3、Anti-CESA6、Anti-CESA2、Anti-CESA5、Anti-CESA8均能在拟南芥原生质膜上检测到特异免疫条带,这为进一步深入研究拟南芥纤维素合成机制提供了有...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
林梓浩 李玉红 董从娟 陈鹏
【目的】建立一套适合黄瓜叶片细胞壁蛋白质组学研究的双向电泳体系,为黄瓜细胞壁蛋白质组学的后续研究奠定基础。【方法】以黄瓜品种"长春密刺"幼苗叶片为材料,比较2种不同提取介质(CaCl2和LiCl溶液)对细胞壁蛋白的提取效果,对比IPG胶条梯度、裂解液、上样量及等电聚焦程序对黄瓜叶片细胞壁蛋白双向电泳结果的影响。【结果】以0.2mol/L CaCl2和3mol/L LiCl溶液依次提取黄瓜叶片细胞壁蛋白,选用17cm pH 3~10NL IPG胶条和裂解液Ⅱ(7mol/L尿素、2mol/L硫脲、40g/L CHAPS、10g/L DTT和1mmol/L PMSF),上样量800μg,按聚焦程序Ⅰ...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
邓艺 曾炳山 刘英 裘珍飞 李湘阳
以巨桉栽培无性系EG5无菌苗的叶片为外植体进行愈伤组织诱导与植株再生研究。结果表明:愈伤组织高效诱导和不定芽分化的最适培养基为改良MS+0.12 mg·L-1TDZ+0.25 mg·L-1NAA;硝酸铵对EG5叶片愈伤组织生长及植株分化的影响较大,最适宜质量浓度为0.412 5 g·L-1;最佳伸长培养基配方为改良MS+0.3 mg·L-16BA+0.05 mg·L-1IBA+0.3 mg·L-1IAA;暗培养10 d能促进不定芽分化,延缓愈伤组织老化和褐变速度。生根培养基为改良MS+0.4 mg·L-1NAA时生根率最高,为65.47%,移植成活率为90%以上。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
高艺 薄文浩 李颖岳 曹明 庞晓明
【目的】‘京枣39’是一种优质的枣鲜食新品种，目前尚无有效的离体再生体系，影响了自根苗的培育和苗木纯度。为了解决枣遗传转化效率低等问题，本研究探究了枣叶片再生的不同影响因素，以期建立高效的叶片再生体系。【方法】以‘京枣39’组培苗叶片为试材，研究了不同接种方式、基本培养基种类、植物生长调节剂种类和浓度配比对离体叶片直接诱导不定芽再生的影响。【结果】正交试验结果表明：叶片正放的接种方式再生率远高于叶片反放，是‘京枣39’叶片再生不定芽的最佳放置方式；基本培养基对‘京枣39’叶片再生的影响要大于植物生长调节剂，且最优培养基为1/2 MS，最佳植物生长调节剂为细胞分裂素6-BA，本研究确立的‘京枣39’组培苗叶片再生的最优体系为1/2 MS+1 mg/L噻苯隆+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+30 g/L麦芽糖+6 g/L琼脂，再生率可达79.17%，平均每叶片再生不定芽能达到4.67个。进而初探并建立了‘京枣39’组培苗的最佳扩繁体系为：MS+20 g/L麦芽糖+6 g/L琼脂+3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA，分枝率高达88%，平均分枝数达2.76枝；以及最适生根体系为：1/2MS+20 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+1.5 mg/L IBA+0.3 mg/L NAA，生根率达90.91%，平均根长达4.08 cm。【结论】‘京枣39’叶片再生效率受外界影响因素很大，尤其是基本培养基种类和接种方式，且每个因素都不是独立起作用的。本研究为之后以‘京枣39’叶片为转基因材料进行枣相关基因功能验证建立了完整的培育体系，同时为加快枣的相关研究进程奠定基础。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
曹雅琴 刘峰 陈建荣 郭清泉
以湘苎2号、湘苎3号、新宁青麻、四川洪县园麻的叶片为材料,构建4个品种高效、稳定的不定芽再生体系.湘苎2号、湘苎3号、新宁青麻、四川洪县园麻最适诱导愈伤组织及分化不定芽的培养基分别为MS+0.7 mg/L TDZ+0.02 mg/L 2,4-D,MS+0.3 mg/L TDZ+0.01 mg/L 2,4-D,MS+0.3 mg/L TDZ+0.05 mg/L 2,4-D,MS+0.9 mg/L TDZ+0.05 mg/L 2,4-D;不定芽分化率分别为83.3%,81.7%,90.0%,86.7%;4个品种再分化时出现丛生芽,新宁青麻愈伤组织的平均再生不定芽数达2.62个,其他3个品种也都有数...
关键词：
苎麻 愈伤组织 不定芽 再生体系
[期刊] 华北农学报
[作者]
张小梅 韩念法 张美祥 李广录 范三红 郭蔼光
从经水杨酸处理的拟南芥开花期植株中获得cDNA,扩增得到Alpha-dioxygenase 1(DOX1)基因,进行原核表达、纯化和生物活性检测。利用原核表达载体pMAL-c4x在T7 Express CompetentE.coli和BL21(DE3)-RIPL codon+菌株中表达DOX1,经Amylose Resin亲和层析柱纯化。SDS-PAGE结果表明,重组融合蛋白在BL21(DE3)-RIPL codon+中的表达通过灰度值比较分析以可溶性为主,表达率约3.7%,纯化的DOX1纯度可达45%。愈创木酚法表明,可溶性重组蛋白不具有过氧化物酶活性;2,4-DNP法测试表明可溶性重组蛋白...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
蒋细旺 刘国锋 包满珠
以 9个菊花品种为试材 ,利用 6种分化培养基和 3种生根培养基 ,以叶片、茎段为外植体 ,研究不同基因型、激素组合以及附加不同浓度的AgNO3 对高效、快速、经济的再生体系建立的影响。结果表明 ,最适分化培养基分别为 :‘日本黄’ :6 BA0 .5mg/L +NAA0 .1mg/L或 6 BA2 .0mg/L +NAA0 .5mg/L ;‘9718’、‘RH3’、‘寒紫’、‘寒黄’ :6 BA2 .0mg/L +NAA0 .5mg/L ;‘日本白’ :6 BA0 .5mg/L +NAA0 .1mg/L ;‘寒红’、‘杭白菊’ :6 BA1.0mg/L +NAA0 .1mg/L ;...
关键词：
菊花 叶片 茎段 植株再生 AgNO3
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
冯莹 赖钟雄
以石斛兰叶片为材料,建立了叶片外植体的离体再生体系.结果表明:KC+4 mg·L-16-BA+1 mg·L-1NAA是石斛兰叶片诱导原球茎的最佳培养基,诱导率为11.99%;原球茎适宜的增殖培养基为KC+2 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA,增殖倍数达到8.02;分化培养基为1/2 MS+0.5 mg·L-16-BA;最佳的壮苗生根培养基为1/2 MS+1 mg·L-1NAA,最佳移栽基质为棕树皮,成活率达到93.33%.
关键词：
石斛兰 原球茎 增殖 分化 小苗
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
李建安 胡芳名 谭晓风 孙颖
试验探索了一般实验室条件下拟南芥悬浮细胞超低温保存具有较高TTC检测活性的简便方法.结果表明:选择继代后2 d的拟南芥悬浮细胞,洗涤1次,细胞沉淀重悬浮于6%蔗糖培养基,于4℃低温下锻炼6 h;浓缩细胞使之有较高的细胞密度(0.25~0.30 g/mL),加入160 g/L甘油作为冰冻保护剂,直接置于-80℃深冷冰箱保存;使用时以37℃快速解冻,离心后除去保护剂,然后用去离子水洗涤后进行TTC活性检测,保存30 d后的细胞相对活性达0.8左右,可以满足实验室一般研究用.
关键词：
生物技术 拟南芥 悬浮细胞 超低温保存
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张敏 朱明 李文宗 马洁 刘悦萍 江海洋 王磊 徐妙云
【目的】探究ath-miR169d在拟南芥叶片发育过程中的作用,明确其调控的分子机制,为增强叶菜类植物的光合效率以及增加生物量和提高作物产量提供理论依据。【方法】选取ath-miR169d过表达和降低表达的拟南芥转基因株系以及野生型拟南芥,在22℃、相对湿度60%、16 h/8 h光周期条件下培养,观察不同生长阶段叶片发育表型的差异;同时构建pmiR169d::GUS表达载体,转化农杆菌EHA105,并利用蘸花法转化野生型拟南芥(Columbia,Col-0),获得转基因拟南芥,利用GUS染色对ath-m
[期刊] 华北农学报
[作者]
潘怡欧 刘琳琳 张炬红 张静 安少利 许鹏 靳军灵 刘志伟 席景会
植物在长期进化过程中形成了自我防御机制,能够产生特异的抗性蛋白来应对各种生物因子的胁迫,其中茉莉酸信号途径是植物必需的防御机制。本研究对拟南芥施用茉莉酸处理和对照叶片蛋白质的差异表达变化,并试图通过蛋白质组学技术来检测茉莉酸诱导的蛋白质,通过蛋白质双向电泳发现有28个蛋白点发生了显著的变化,其中19个蛋白点上调表达,9个蛋白点下调表达。选择10个差异蛋白点进行了质谱鉴定,它们分别是苏氨酸蛋白激酶、热激蛋白、不依赖于维生素B12的蛋氨酸合酶、腺嘌呤琥珀酸合酶、碳酸酐酶等,这些蛋白质可能在拟南芥叶片应答茉莉酸反应的过程中起到重要作用,进一步进行差异蛋白的功能分析对揭示茉莉酸信号通路和植物防御机制的...
关键词：
拟南芥 茉莉酸甲酯 双向电泳 质谱
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
张艺函 徐凡 蒋太英 崔胜男 马殿荣
衰老是植物界广泛存在的一种自然现象,在植物整个发育过程中具有重要的地位和生物学意义。叶片衰老是植物生长发育的最后一个阶段,在该过程中叶绿素、核酸、脂质、蛋白和其他大分子等被降解,细胞程序化死亡并引起叶色发生变化,然而目前关于这个生物学过程如何启动和如何调控的研究还比较有限。当植物受到外界环境的影响时也会加速其自身的衰老,蛋白磷酸酶催化的蛋白质去磷酸化反应会在植物适应外界环境的多种生命活动过程中发挥重要的作用。2C型蛋白磷酸酶是植物中数量较多的一类,其通过脱磷酸化来调节细胞的生长发育以及信号传递,从而调整体内相关基因的变化来对抗逆境的胁迫。通过试验研究发现并克隆了一个新的参与水稻(Oryza sativa)叶片衰老进程调控的2C型蛋白磷酸酶编码基因OsSAPP2,并通过双元表达载体构建获得了组成型异源过表达OsSAPP2基因的转基因拟南芥(Arabidopsis thaliana)。通过对35S-OsSAPP2转基因拟南芥的表型观察可知,35S-OsSAPP2转基因拟南芥出现莲座叶片变小、数量减少,抽苔和开花时间明显提前,株高增加,叶片颜色变浅、衰老加速等表型。在叶龄依赖和人工黑暗诱导的衰老过程中,过表达OsSAPP2基因导致转基因拟南芥叶绿素含量下降,叶片萎蔫加剧。实时荧光定量PCR检测结果表明,35S-OsSAPP2转基因拟南芥中衰老标志基因SAG12,衰老关键转录因子NAC2、NAP、WRKY6和叶绿素降解关键酶编码基因ACD1等表达量上升;从植物进入衰老过程开始,光合作用关键基因RbcS和RbcL表达量快速下降。可见,OsSAPP2基因参与植物叶片衰老进程的调控,是衰老进程的正向调控因子。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
杨伟聪 张晨星 赵汗青 刘欣茹 庞晓明 李颖岳
【目的】以四倍体酸枣组培苗为材料，优化其组织培养体系并构建适宜的四倍体酸枣叶片离体再生体系，为该种质的保存、推广以及利用奠定基础。【方法】本研究以秋水仙素加倍获得的酸枣同源四倍体种质为材料，设计试验，利用组织培养技术探索了不同植物生长调节剂的种类、浓度对于四倍体酸枣的增殖、生根、不定芽再生的影响情况；并利用石蜡切片法对叶片不定芽再生过程进行了细胞学观察。【结果】（1）当四倍体酸枣以带顶芽的茎段作为外植体时，最佳增殖培养基为：1/2MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+TDZ 0.5 mg/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂5.9 g/L，适宜生根培养基为：1/2MS+IBA 0.8 mg/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂5.9 g/L。生根苗经炼苗后移栽至大田，成活率可达93.33%。（2）诱导四倍体酸枣叶片离体再生不定芽的最佳培养基为WPM+TDZ 1.0 mg/L+IBA 0.3 mg/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂5.9 g/L，在该培养基上叶片可通过直接再生途径再生出不定芽。（3）再生不定芽主要起源于叶脉维管束周围的薄壁细胞，在预培养8～12 d时，分生细胞的分裂能力最强且未出现分化现象。【结论】本研究优化了四倍体酸枣组培体系，并成功建立了四倍体酸枣叶片离体再生体系，同时对叶片不定芽的再生过程进行组织学研究，为酸枣多倍体培养体系完善以及后续多倍体种质的利用奠定了基础。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘凯 胡春华 杜发秀 张玉娥 魏岳荣 易干军
【目的】研究超表达拟南芥CBF1基因(AtCBF1)对大蕉抗寒性的影响,为从大蕉克隆抗寒相关基因奠定基础。【方法】采用农杆菌介导法转化东莞大蕉的胚性细胞悬浮系,获得转AtCBF1基因的大蕉植株;利用GUS组织染色、PCR、RT-PCR以及RT-qPCR对转基因植株进行鉴定;比较低温处理后的转基因株系和对照的冷害特征以及超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量等生理生化指标,鉴定转基因大蕉植株的抗寒能力。【结果】试验共获得6个抗性再生转化系。GUS组织染色结果表明,除T1外,其余均为阳性;PCR鉴定结果表明,AtCBF1在6个抗性再生转化系均为阳性,而GUS基因在T1转化系中没有检测出...
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