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[期刊] 淡水渔业
[作者]
柳昭君 郭培红 徐乐 付监贵 肖兰莹 宋学宏
为了评价抗爱德华氏菌（ＥｄｗａｒｄｓｉＥｌｌａ ｉｃｔａｌｕｒｉ）的特异性ｉｇ Ｙ的功能性蛋粉在黄颡鱼（ＰＥｌｔＥｏｂａｇｒｕｓ ｆｕｌｖｉｄｒａｃｏ）＂红头病＂预防及治疗中的应用效果，采用灭活的爱德华氏菌（菌种保藏号：ｃｃｔｃｃＮｏ：Ｍ２０１２０２４）免疫蛋鸡，通过微包膜及高速离心喷雾干燥技术制备抗爱德华氏菌的特异性ｉｇ Ｙ的功能性蛋粉，采用泼洒和口服两种方式检测该功能性蛋粉对黄颡鱼的免疫保护率。结果显示，所制备的功能性蛋粉抗体效价达到１∶５１２０；以剂量为２ Ｍｇ／ｌ功能性蛋粉连续泼洒水体３ ｄ或以饲料重量０．２％的剂量口服１４ ｄ后，再用浓度为２．０×１０７ｃｆｕ／Ｍ ｌ的致病性爱德华氏．．．
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
夏晓翠 周冰峰 魏太云
应用Gateway重组技术构建CSBV非结构蛋白,RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)的原核表达载体,将重组表达载体转化大肠杆菌Rosetta,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(Isopropylβ-D-1-Thiogalactopyranoside,IPTG)诱导获得RdRp基因原核表达蛋白.以重组蛋白为抗原免疫新西兰兔制备相应的多克隆抗体,Western blot检测表明,该抗体能与RdRp重组蛋白和感病中华蜜蜂幼虫蛋白特异性结合,说明获得的抗体特异性高.利用制备的抗体进行免疫荧光标记,发现其能特异地定位在感病中华蜜蜂血淋巴细胞内.
[期刊] 中国农业科学
[作者]
孔祥珍 周惠明 钱海峰
【目的】面筋蛋白的水不溶性极大地限制了其在食品中的广泛应用。为此,对小麦面筋蛋白进行酶法水解来提高其溶解性及其它功能性质,从而拓宽面筋蛋白的应用范围。【方法】分别采用胰蛋白酶、胃酶、胰酶和碱性蛋白酶对小麦面筋蛋白进行酶解,并对其蛋白质回收率和水解进程以及酶解物的功能性质进行比较研究。【结果】4种蛋白酶水解面筋蛋白,其蛋白质回收率变化范围为42.50%～81.33%,Alcalase能够有效水解面筋蛋白,其蛋白质回收率最高为81.33%。与面筋蛋白相比,在pH2～12范围内,不同水解度的AWGHs,其溶解性均大大提高(>60%);较低DH(5%)的乳化和起泡性能相对较好。【结论】Alcalase...
[期刊] 水产学报
[作者]
叶汉梅 魏晓雷 谭肖英
细胞因子信号传导抑制因子(suppressor of cytokine signaling, SOCS)是一类由细胞产生的胞内蛋白,能够反馈性阻断细胞因子信号传导过程的负性调控因子。为深入研究黄颡鱼细胞因子信号传导的发生过程和机制,实验从黄颡鱼cDNA中克隆获得561 bp的黄颡鱼SOCS1(PfSOCS1)基因编码序列,成功构建了重组质粒pET32a(+)-PfSOCS1,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在不同温度、IPTG浓度、诱导时间等条件下进行表达,确定最佳表达条件。本实验采用包涵体纯化的方法得到纯度较高的重组SOCS1蛋白;以重组PfSOCS1蛋白免疫Balb/C小鼠,制备多克隆抗体。通过Western blot鉴定了PfSOCS1抗血清可以特异性识别重组PfSOCS1蛋白。蛋白水平的组织分布显示,黄颡鱼SOCS1蛋白在肝脏中表达水平较高。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
徐进 罗晓松 曾令兵
从患头顶溃疡症的黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)内脏组织中分离出致病力强的菌株JZ086,对该菌进行了形态学、生理生化特性的测定,并进行了Biolog全自动微生物分析系统及16S rDNA序列鉴定。结果显示:人工感染实验证实该菌为黄颡鱼的病原菌,其半数致死量(LD50)为1.7×105CFU。Biolog全自动微生物分析系统鉴定结果显示该菌为鲇爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)。16S rDNA序列分析显示该菌与鲇爱德华氏菌的亲缘关系最近,同源性高达99%;系统进化树中与鲇爱德华氏菌(AB050826)自然聚为一支,二者遗传距离约为0.002。鉴定...
[期刊] 水产学报
[作者]
杜雪莉 周利亘 王锡昌 熊何健 苏文金 曹敏杰
采用Sephacryl S-400凝胶过滤柱层析和电洗脱等纯化方法,首次从黄鳍鲷骨骼肌中分离纯化到伴肌动蛋白,并制备了特异性多克隆抗体。多克隆抗体经Protein A-Sepharose亲和层析柱纯化得到高纯度免疫球蛋白G(IgG)。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫斑点印迹(Dot-Blot)和免疫印迹(Western-Blot)等方法对纯化的伴肌动蛋白及其多克隆抗体进行分析鉴定,并研究了不同贮藏条件下伴肌动蛋白的变化情况。SDS-PAGE结果显示本研究从黄鳍鲷骨骼肌中分离纯化了高纯度伴肌动蛋白;Dot-Blot检测结果显示兔抗黄鳍鲷伴肌动蛋白多克隆抗体效价为5×104;Wes...
关键词：
黄鳍鲷 伴肌动蛋白 纯化 抗体
[期刊] 水产学报
[作者]
孙乐常 孙小舒 林端权 陈玉磊 翁凌 缪松 曹敏杰
为了进一步拓展海洋鱼蛋白在食品中的应用，以蓝圆鲹分离蛋白为原料，利用酶解改性得到溶解性良好的蓝圆鲹分离蛋白酶解物（BPIH），并研究其对大米淀粉（RS）短期老化的抑制作用。通过响应面法优化酶解改性工艺制备BPIH，并分别按RS的3％、6％、9％（质量/质量）进行添加。通过测定RS的凝沉性、动态粘弹性、热学特性以及微观结构分析评价BPIH的抗淀粉老化活性。结果显示，响应面法确定的最佳条件：酶底比5 000∶1（U/g）、酶解时间3 h、料液比1.00∶3.81、酶解温度46.36 ℃、酶解pH 6.30，氮溶指数（NSI）实际值为85.41%±0.82%，与预测值86.37％接近。该酶解条件下BPIH水解度达到21.62%。BPIH中小于1 000 u的肽占79.94%，主要为小分子低聚寡肽。加入BPIH可以减弱RS的凝沉现象，降低RS在4 ℃保存过程中的储能模量（G'），显著降低老化后RS的峰值温度（T_(p)）和焓值（ΔHr）；加入BPIH的大米淀粉，老化后微观结构有较大孔洞，提升了淀粉糊化后保留内部水分的能力。研究表明，BPIH能够抑制RS在4 ℃保存期间凝胶网络和微晶结构的形成，同时可能限制了淀粉分子间的聚集，抑制或延缓RS的短期老化。本研究为蓝圆鲹分离蛋白酶解物在食品蛋白配料中的应用提供理论参考。
关键词：
蓝圆鲹 分离蛋白 酶解 淀粉短期老化
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张玉蕾 赵丽娟 周伟东 艾桃山 林蠡
从患病黄颡鱼上分离出１株柱状黄杆菌（Ｐｆ１），对其进行分类鉴定和药物敏感试验。用Ｐｆ１感染黄颡鱼和翘嘴鳜，发现Ｐｆ１对２种鱼均有致病性。Ｐｆ１可导致翘嘴鳜多个组织细胞坏死和炎症反应，严重损伤肝、体肾和鳃。被感染翘嘴鳜肝细胞肿胀、空泡化坏死；肾小管广泛坏死和大量炎症细胞浸润；鳃小片毛细血管充血，呼吸上皮细胞肿胀变性，鳃的呼吸功能衰退。鳃部病变导致感染鳜呼吸频率加快、游动缓慢，最后大量死亡。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
高琦 党猛 张建超 陆超 薛友林
为确定功能性发芽花生露的制备工艺及花生发芽后功能性物质含量变化情况,以发芽花生为原料,在单因素的基础上,采用响应面试验研究花生的发芽时间、料液比、打浆温度对花生浆感官评分的影响,从而确定最佳打浆工艺;结合单因素和正交试验,研究复配乳化剂和稳定剂对功能性发芽花生露的离心沉淀率和透光率的影响,以确定乳化剂和稳定剂的最佳添加比例和添加量;对发芽前和发芽后的花生以及发芽前和发芽后制取的花生露中的多酚和白藜芦醇等功能性物质的含量进行了测定。结果表明:最优打浆工艺为料液比1∶10,发芽3d,打浆温度40℃,预测感官评分为86.08,验证结果(88.00±0.40)与模型所预测结果接近;乳化剂的最适复配比为蔗糖酯∶分子蒸馏单甘酯为2∶3,乳化剂的最适添加量为0.4%;稳定剂对花生露稳定性的影响为:海藻酸钠>黄原胶>卡拉胶,海藻酸钠添加量为0.03%,黄原胶添加量为0.05%,卡拉胶添加量为0.03%。经过3d的发芽,花生中总多酚含量由2.6mg·g~(-1)增加到3.2mg·g~(-1),花生露中的总多酚含量由18.81mg·100mL~(-1)增加到23.75mg·100mL~(-1);花生中的白藜芦醇由1.1μg·g~(-1)增加到2.5μg·g~(-1),花生露中的白藜芦醇在未发芽时未被检出增加至20μg·100mL~(-1)。在此条件下可制备出稳定可口的功能性花生露且其总多酚及白藜芦醇的含量显著提高。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
李光磊 李新华 金锋
以马铃薯淀粉为原料,采用压热法研制了抗性淀粉的制备条件。分析了淀粉乳浓度、压热时间、pH值以及冷藏时间对抗性淀粉产率的影响。在压热法制备的基础上,进行酶法处理,确定了耐热-α淀粉酶、普鲁兰酶的最佳用量,使抗性淀粉产率得到极大提高。
关键词：
马铃薯抗性淀粉 耐热-α淀粉酶 普鲁兰酶
[期刊] 水产学报
[作者]
李育培 刁晓明 盛晓洒 权恒 翟旭亮 李云
采用凝胶过滤和离子交换两种层析技术,从瓦氏黄颡鱼Ⅳ期卵巢粗提液中分离、纯化出卵黄脂磷蛋白(Lv),采用糖、磷、脂蛋白染色技术验证分离、纯化的蛋白为Lv,该Lv在非变性条件下分子量约为230ku,在SDS变性条件下分子量约为106ku。纯化的瓦氏黄颡鱼Lv经检测显示含有类胡萝卜素,但没有二硫键,对热相对稳定。利用纯化的瓦氏黄颡鱼Lv,制备了兔抗瓦氏黄颡鱼Lv多克隆抗血清。通过双向免疫扩散法测得Lv抗血清的效价为1∶32,还发现瓦氏黄颡鱼卵黄蛋白原(Vtg)和Lv之间有明显的免疫交叉反应性,说明两者具有相同的免疫原性;Western-blotting检测显示抗血清的特异性较好,并能特异性地识别Vt...
关键词：
瓦氏黄颡鱼 卵黄脂磷蛋白 纯化 免疫分析
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘德福 孙世友 彭福峰 王兴礼
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵静 孙洋 谭永安 肖留斌 姜义平 柏立新
【目的】制备甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)多克隆抗体,并检测甜菜夜蛾不同发育时期血淋巴中的Vg蛋白表达量变化,为进一步研究Vg转运与利用机制以及生物学功能打下基础。【方法】以羽化24 h的甜菜夜蛾雌成虫c DNA为模板,通过PCR扩增得到甜菜夜蛾Vg基因片段,其包含vitellogenin-N结构功能区。将Vg目的片段连入pMD-19T载体后进行测序,利用DNAMAN软件分析该基因序列的准确性及编码蛋白的特性。将测序正确的Vg基因片段通过Nde
[期刊] 淡水渔业
[作者]
范成坚 苏博洋 苏建国
为探讨干扰素3(Interferon 3,IFN3)在抗病毒免疫应答中的作用,以草鱼(Ctenopharyngodon idella)巨噬细胞cDNA为模板,PCR扩增IFN3成熟肽基因序列,制备草鱼IFN3蛋白的多克隆抗体,同时研究了IFN3在草鱼不同免疫组织中的蛋白表达,以及草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)感染草鱼肾细胞系(Ctenopharyngodon idella kidney,CIK)后不同时间点的表达。结果显示,细菌表达的重组IFN3大小约为45 kD,主要以包涵体形式存在;抗体效价约为1∶3 200,制备的多克隆抗体既能识别原核表达的重组蛋白,也能识别个体水平上和细胞水平上的内源蛋白。草鱼主要免疫组织中,肝胰腺和皮肤检测到相应条带。CIK细胞感染病毒后12 h开始检测到IFN3蛋白,随感染时间的延长,IFN3蛋白表达量有所增加。蛋白水平上检测IFN3的表达,为深入研究草鱼的抗病毒免疫机制奠定了基础。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘杰 龙宜楠 黄钧 梁静真 胡大胜 龙苏 牛志伟 彭亚 植淇业
为查明黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)暴发性流行病的病原菌及其3种毒力基因的携带情况,以常规方法进行细菌分离,人工感染试验确定病原菌的致病性,API 20NE和16S rRNA基因序列分析进行细菌鉴定,PCR扩增法检测病原菌的3种毒力基因。结果显示,从发病症状典型的黄颡鱼肝脏中分离到1株嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)GXGP1,与嗜水气单胞菌标准株ATCC 7966T的同源性为99.9%,对黄颡鱼有很强致病力,是引起黄颡鱼暴发性流行病的病原菌,该菌携带有Aer、hly和ahp 3种毒力基因。
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