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[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙健 王金信 张宏军 刘君良 卞圣楠
【目的】近几年,中国大部分冬小麦田猪殃殃(Galium aparineL.)用苯磺隆已无法有效控制。为明确猪殃殃对苯磺隆产生抗药性的分子机制,本试验从分子水平上开展研究,以初步明确乙酰乳酸合成酶(ALS)氨基酸序列的突变位点。【方法】通过对敏感和抗药性猪殃殃生物型ALS基因片段进行扩增、克隆和测序,比对2种生物型的ALS序列。【结果】与敏感生物型猪殃殃的ALS相比,抗药性猪殃殃生物型ALS有3个位点发生突变,其中位于高度保守区Domain B的第574位色氨酸被甘氨酸所取代。【结论】该位点的突变可能是猪殃殃对苯磺隆产生抗药性的主要原因。
关键词：
抗药性 猪殃殃 乙酰乳酸合成酶 基因突变
[期刊] 中国农业科学
[作者]
胡茂龙 浦惠明 高建芹 龙卫华 戚存扣 张洁夫 陈松
【目的】分离和鉴定自然突变的油菜乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂抗性突变体M9抗性基因,阐明抗性产生的分子基础。【方法】通过配置杂交组合研究其遗传规律,应用同源序列法克隆油菜ALS家族基因,采用杂交转育和小孢子培养技术将抗性基因转育到陆奥-五十铃细胞质雄性不育(MICMS)恢复系中,进行PCR鉴定。【结果】该突变体抗性由1个显性核基因控制。克隆获得BnALS1—BnALS3,核酸序列比对发现,M9抗性是由BnALS1的点突变使蛋白序列的第638位丝氨酸(AGT)残基被天冬酰胺酸(AAT)替代所致,将此抗性基因命名为BnALS1R。抗性基因BnALS1R转育到MICMS恢复系中的PCR检测表明,所有...
[期刊] 华中师范大学学报(自然科学版)
[作者]
范亚 吴丽 尹娴 张浪 何峰 向梅先
采用正相、反相硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶柱、半制备高效液相色谱(HPLC)对猪殃殃氯仿和乙酸乙酯部位进行了化学成分的研究,分离得到了9个酚类化合物,分别为:对苯二甲酸二丁酯(1),原儿茶酸丁酯(2),原儿茶酸乙酯(3),二氢咖啡酸乙酯(4),顺式咖啡酸乙酯(5),没食子酸甲酯(6),7-羟基-6-甲氧基色酮(7),1-丙烯酸-3-(3,4-二羟苯基)戊酯(8),1-(3,4-二羟基苯)丙酮(9).这9个化合物都是首次从该属植物中分离得到.
关键词：
猪殃殃 氯仿部位 乙酸乙酯部位 化学成分
[期刊] 中国农业科学
[作者]
宋小燕 耿梅梅 褚武英 李铁军 王文策 顾莞婷 石常友 黄瑞林 印遇龙 伍国耀
【目的】探讨藏猪仔猪肠道N-乙酰谷氨酸合成酶(NAGS)在哺乳期的表达变化。【方法】克隆藏仔猪的NAGS基因,并制备其多克隆抗体,分别采用实时定量PCR和Western blotting方法检测1、7、21、28和35日龄的哺乳藏仔猪空肠和回肠中NAGS mRNA的表达水平和蛋白丰度。【结果】7～35日龄藏仔猪空肠与回肠的NAGS mRNA表达水平(P<0.05)和蛋白丰度(P
关键词：
N-乙酰谷氨酸合成酶 藏猪 哺乳期
[期刊] 中国农业科学
[作者]
卢宗志 张朝贤 傅俊范 李茂海 李贵军
【目的】近年来,中国东北水稻田抗药性雨久花发生严重,部分地区用苄嘧磺隆已无法有效控制该杂草的危害。为明确该杂草抗药性发生的根本原因,本试验从分子水平上研究了稻田杂草雨久花(Monochoria korsakowii)对苄嘧磺隆的抗药性机理,以确定导致抗药性产生的乙酰乳酸合成酶(ALS)氨基酸突变位点。【方法】利用PCR技术,通过对抗药性雨久花生物型和敏感性雨久花生物型ALS片段进行扩增和基因克隆,最后对DNA序列进行测序比对。【结果】与敏感性的雨久花ALS相比,抗药性雨久花生物型的ALS共有3处发生突变,即第197位脯氨酸突变为组氨酸,第200位蛋氨酸突变为缬氨酸,第388位精氨酸突变为组氨酸...
关键词：
乙酰乳酸合成酶 苄嘧磺隆 雨久花 抗药性
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张震 李小华 黄新凤 邵小虎 李林
克隆了乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)菌株AS1.2829的1种主要细胞壁自溶素-N-乙酰葡萄糖胺糖苷酶的编码基因acmAas,并对其编码蛋白AcmAas的结构进行了预测,发现该蛋白由1个具催化活性的N-末端和1个具细胞壁锚定活性的C-末端结构域组成,其中C-末端又由3个LysM(lysin motif)结构域组成,具有典型的"βαβα"型二级结构。进一步通过体外在acmA基因中引入红霉素抗性基因(Emr)而构建具有与宿主菌染色体acmA基因进行整合作用的重组基因,并导入宿主菌后筛选得到发生染色体整合重组的重组菌株MB257,对该菌株的形态与生长特性进行了初步研究,结果表明该...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张金 邹红 姚卫建 聂品
柱状黄杆菌(Flavobacterium columnare)是世界范围内危害淡水鱼类的柱形病的病原。目前对该病原菌遗传操作系统的研究进展较慢,而寻找高效稳定的启动子来调控外源基因在细菌体内的表达,有可能促进该细菌遗传操作系统的构建。本研究获得了柱状黄杆菌乙酰辅酶A合成酶基因(acetyl-coenzyme A synthetase gene,acs)的编码序列及其上游调控序列,该基因全长2 323 bp,编码635个氨基酸。通过序列分析,发现在该基因起始密码子ATG的上游存在核糖体结合位点(ribosome biding site,RBS)序列TAAAA,和启动子–7和–33的保守基序TAT...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马延森 李晓 陈志 兰向丽 武小椿 靳亚平 刘伟
【目的】制备抗果蝇组蛋白乙酰转移酶Atac2的单克隆抗体,为进一步研究Atac2基因的功能提供重要的试验工具。【方法】PCR扩增果蝇Atac2蛋白N端前26个氨基酸的编码基因,构建GST-Atac2融合蛋白表达载体pGEX-Atac2。转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),进行诱导表达,通过GST亲和层析法纯化GST-Atac2融合蛋白。以GST-Atac2为抗原免疫8周龄的Balb/c小鼠,取脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA法检测阳性孔,经有限稀释法亚克隆,筛选单克隆杂交瘤细胞株,检测抗体的特异性、效价和亚型,并检测其亲和常数。【结果】PCR扩增获得了目的片段。成功...
关键词：
果蝇 Atac2 原核表达 单克隆抗体
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
杨红建 岳群 曹阳春
为研究瘤胃液中阿魏酸酯酶和乙酰酯酶的酶学特性,自安装永久瘤胃瘘管的成年荷斯坦阉牛瘤胃中采集瘤胃食糜液,4℃1 000g离心10min制备成粗酶液,测定了粗酶液中阿魏酸酯酶和乙酰酯酶活性及其酶促反应动力学参数。结果表明,瘤胃液中阿魏酸酯酶酶促反应最适pH为9.0,最适温度为40～50℃;用阿魏酸甲酯作为为酶促反应标准底物,测得米氏常数(Km)为0.76mmol/L,最大反应速度(Vmax)为5.43mU;乙酰酯酶酶促反应最适pH为8.0,最适反应温度为50℃。用对-硝基苯乙酰酯作为标准底物,测得Km为0.64mmol/L,Vmax为91.00mU。研究发现Fe2+可以促进阿魏酸酯酶酶促反应,而C...
[期刊] 华北农学报
[作者]
钱颖 彭永康
５００ｍｇ／ｋｇ苯黄隆对昆白小鼠精子畸型率的影响低于对照，１００ｍｇ／ｋｇ引起的精子畸型率接近对照，而２０００ｍｇ／ｋｇ下则比对照组高出０．５倍。上述３种剂量浓度对胃中的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）同工酶未产生影响，但在解毒器官肝脏中ＬＤＨ同工酶活性高于对照。结果表明，苯黄隆属低毒农药，然而潜在危险性尚存在，使用时需掌握合适浓度。
关键词：
乳酸脱氢酶同工酶,低毒,潜在危害
[期刊] 中国林业科学研究院
[作者]
王义刚
我国是农业大国,每年产生的大量农作物剩余物多以焚烧等形式处置,利用效率很低,造成极大的资源浪费,而且环境污染严重。随着人们对环保意识以及可再生资源的高效利用意识的增强,利用农作物生物质制备高附加值产品已经成为研究的重点和热点。随着科学技术的发展,通过液化、气化或者物理化学相结合等方法可以将生物质制备成液体燃料、生物质化学品等,有效地提高了生物质的利用率。本研究以生物质葡萄糖为原料,采用自制的磁性固体超强酸为催化剂,利用葡萄糖为原料合成平台化合物乙酰丙酸,该平台化合物同时含有羰基和羧基两类高反应活性的基团,
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
严梦涵 许丽惠 游泽龙 陆芍华 何晴 郑娱 许高琳 王全溪
利用生物信息学软件I-Mutant2.0分析植物乳酸菌素PlnJ的氨基酸序列，筛选出最不稳定的氨基酸位点，进行定点突变，构建点突变重组表达质粒。对点突变重组表达质粒进行原核表达，并筛选表达最适条件；采用镍亲和层析法纯化重组蛋白。以大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌作为指示菌，探究100℃水浴加热0、5、15、30 min对重组PlnJ抑菌功能的影响。结果表明，PlnJ第3位氨基酸——赖氨酸(AAG)对其稳定性具有重大影响。以人工合成第5位氨基酸，即赖氨酸(AAG)突变为缬氨酸(GTG)的PlnJ核苷酸序列作为模板，成功构建重组表达质粒，PCR和酶切鉴定结果显示目的条带184 bp,测序后证明突变成功。重组蛋白诱导表达条件的优化结果表明：在37℃、12 h、0.8 mmol·L~(-1)IPTG的最优诱导条件下，特异目的蛋白表达显著(27.5 ku);咪唑洗脱液浓度280 mmol·L~(-1)是最优洗脱条件，可获得较为单一的目的蛋白。采用牛津杯抑菌试验法及麦氏比浊法比较突变前后的PlnJ蛋白的抑菌效果，结果表明，突变后的蛋白[PlnJ(G5)]与突变前的蛋白(PlnJ)100℃加热0、5、15、30 min,对大肠杆菌的抑菌效果均差异显著(P<0.05),而对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的抑菌效果均差异极显著(P0.05)。综上，第5位氨基酸，即赖氨酸(AAG)突变为缬氨酸(GTG)后，PlnJ(G5)的热稳定性得到了提高，且不改变其抑菌效果。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李国华 杨红
2-甲基苯甲酰甲酸甲酯通过与甲胺、甲氧基胺的盐酸盐、N-溴代丁二酰亚胺(NBS)和取代苯乙酮肟多步反应合成了11个含双肟醚结构的2-甲氧亚氨基-2-(2-(取代苯基)苯基)乙酰甲胺的衍生物(G1～G11)。目标化合物的结构经IR、1H NMR和GC-MS确认。用10μg.mL-1目标化合物进行初步离体抑菌活性试验,结果表明:G4对油菜菌核病、蔬菜灰霉病、小麦赤霉病、小麦纹枯病有抑菌活性;G11对蔬菜灰霉病、小麦赤霉病、小麦纹枯病有抑菌活性。
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