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[期刊] 中国农业科学
[作者]
杨婉莹 温硕洋 邓小娟 叶明强 夏庆友 曹阳 黄亚东
【目的】Drosomycin(Drs)是从黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中鉴定发现的对丝状真菌有广谱抗性的抗真菌肽因子,此外,在黑腹果蝇基因组中,还存在另外6条Drs同系物的基因序列,对它们推导的氨基酸序列具有与Drs相同的保守位点和CSαβ模体结构。为鉴定Drs及其6个同系物的抗性功能差异,研究其分子结构与功能的关系,需要对这些同系物基因进行克隆表达,获得有生物学活性的纯化样品。【方法】本文采用PCR分段互补合成的方法准确地获得了Drs同系物基因,并克隆至pET-3C载体上,转化到宿主菌E.coli Origami(DE3)中进行诱导表达,表达产物经阳离子CM S...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
张玮玮 袁素素 王财成 叶秀娟
通过柱层析技术从诸葛菜种子中分离抗真菌蛋白,并采用纸片扩散法、琼脂平板稀释法和凹玻片法对抗真菌蛋白的抑菌活性和稳定性进行研究.结果表明:从诸葛菜种子中分离出一种分子质量约为10 ku的抗真菌蛋白,命名为Zp;经QE质谱鉴定,Zp蛋白可能是诸葛菜种子中的一种防御素蛋白.Zp蛋白对11种植物病原真菌均具有较强抑制作用,其中对尖孢镰刀菌生长的半抑制浓度(IC_(50))为54.36μg·mL~(-1),对其孢子萌发的IC_(50)为15.97μg·mL~(-1).Zp蛋白的抑菌活性在温度0～100℃和pH 1～14的范围内稳定,其对有机溶剂(15%甲醇、乙醇、异丙醇、乙醚和丙酮)和金属阳离子(50～250 mmol·L~(-1) Mg~(2+)、K~+、Mn~(2+)和Ca~(2+))也具有较强的耐受力.
[期刊] 中国农业科学
[作者]
彭兵 张树斌 贾宇 王立安
【目的】揭示生防菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株A产生的抗真菌蛋白的性质及作用机理。【方法】采用硫酸铵沉淀菌株A发酵液获粗蛋白;采用DE52离子交换层析技术对粗蛋白进行分离纯化;对具抗真菌活性的纯化组分采用MALDI-TOF-MS进行结构分析;以玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)为材料,对纯化活性蛋白的抗真菌机理进行研究。【结果】从粗蛋白中分离到一种抗真菌活性蛋白(FV),与RNA结合蛋白Hfq Bacillus subtilis subsp.subtilis gi|16078797的匹配率为86.484%,相对分子质量为8 508.5 Da,等电点为8....
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
徐凌飞 王贵章 梁东 张军科 马锋旺
利用抗真菌病害基因转化苹果主栽品种"嘎拉",以期提高其对真菌病害的抗性。通过对影响农杆菌介导苹果遗传转化因素的研究,建立了农杆菌介导的嘎拉叶片遗传转化体系。利用叶盘法转化受体材料,将-β1,3-葡聚糖酶基因及几丁质酶基因导入苹果中。对获得的"嘎拉"转化植株进行PCR检测,结果初步表明,外源基因已经整合到"嘎拉"苹果基因组中。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
桑延霞 邓小娟 杨婉莹 刘文权 王文献 黄亚东 曹阳
【目的】黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)抗真菌肽Drosomycin(Drs)及其同系物Drosomycin-like C(Drs-lC)和斑腹刺螠蝽(Podisus maculiverntris)抗真菌肽Thanatin对丝状真菌具有广谱高效的抑杀作用。实现抗真菌肽基因在酵母中的高效分泌型表达,对探讨利用转基因酵母的发酵液直接进行果蔬、食品和农产品防腐保鲜的生物技术研发有重要意义。【方法】将Drosomycin基因(Drs)及其同系物基因Drs-lC和Thanatin基因分别与酵母分泌型表达载体pPICZαA重组,构建成重组表达质粒pPICZαA-Drs、pPICZ...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
王水琦 陈坚 甘勇辉
用不同浓度的2,4-D与IAA对桉树叶盘进行了愈伤组织的诱导及植株再生的试验,建立了新的桉树再生体系.进一步用含甜椒抗菌基因(hrap)的农杆菌侵染桉树叶盘,发现侵染后对愈伤组织诱导率无明显影响,却抑制了桉树的植株再生.对再生苗的PCR和Sou thern杂交检测证实已将hrap基因已转入桉树植株的基因组中.
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李红娟 刘鹭 张书文 孔凡丕 孙卓 吕加平
[目的]考察来源于中国传统发酵制品中乳酸菌的抑真菌特性,研究其在酸奶贮藏中的抑制霉菌效果。[方法]高效液相色谱法(HPLC)检测7株具有抗真菌效果的乳杆菌发酵液中苯乳酸(PLA)含量,研究PLA与乳杆菌发酵液抗真菌活性的相关性。选取抑菌活性最强的菌株Lactobacillus casei AST18进行抑菌特性研究。Lactobacillus casei AST18分别以2%、4%、6%、8%接种量作为辅助发酵剂添加至酸奶发酵工艺中,成品酸奶贮藏期间,监测酸奶中霉菌生长状况,检测酸奶理化指标并进行感官评定。[结果]乳杆菌发酵液中苯乳酸含量与其抑真菌直径间相关关系不显著。Lactobacillu...
关键词：
干酪乳杆菌 抗真菌 辅助发酵剂 酸奶
[期刊] 西南农业学报
[作者]
宋利沙 蒋妮 蓝祖栽 张占江
【目的】分析药用植物肿节风的内生真菌多样性,筛选具有较强抗菌活性的菌株,为寻找新的抗菌药物资源打下基础。【方法】采用平板对峙法从肿节风的不同组织中分离出具有抗菌活性的内生真菌,结合形态特征和ITS序列对其进行种类鉴定,筛选出抗菌活性强的内生真菌菌株。【结果】从肿节风的不同组织中分离、纯化得到111株内生真菌,选择42株不同形态类型的菌株进行分子鉴定,分属于9目20属28种。筛选出抗菌活性强的RJ-1和JJ-1菌株[分别鉴定为橡胶生拟茎点霉菌(Phomopsis heveicola)和新壳梭孢菌(Neofusicoccum parvum)],对15种病原真菌具有较强的抑制作用,其中对三七灰霉病菌(Botrytis sp.)、三七根腐病菌(Fusarium solani)、三七炭疽病菌(Colltetorrichum gloeosporioides)、香蕉炭疽病菌(Colltetorrichum sp.)、艾纳香褐斑病菌(Phoma sp.)、苦玄参叶斑病菌(Alternaria sp.)和肿节风炭疽病菌(Colletotrichum dematium)等7种病原菌的抑制率均在80%以上,具有强的抑菌广谱性。【结论】肿节风存在丰富的内生真菌,其中的RJ-1和JJ-1菌株对15种病原真菌具有较强的抑制作用,可作为抗菌活性菌株开展深入研究。
关键词：
肿节风 内生真菌 抗菌活性 鉴定
[期刊] 西南农业学报
[作者]
谭悠久 钟娟 周金燕 谭红
对实验室分离保存的40株毛壳菌菌株代谢产物进行抗真菌活性筛选,5个菌株代谢产物对植物病原真菌具有选择性抑制效果。其中,菌株CH08、CH23发酵液对芒果炭疽菌、苹果炭疽菌、小麦根腐菌有较强的抑制作用;菌株CH16、CH17发酵液对芒果炭疽菌、苹果炭疽病具有较强的抑制作用;菌株CH21发酵液对西瓜枯萎菌、辣椒炭疽菌有较强的抑制作用。经形态学鉴定,CH08、CH16、CH17、CH23为球毛壳菌,CH21为角毛壳菌。
关键词：
抗真菌活性筛选 球毛壳菌 角毛壳菌
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
任昂 曹鹏飞 吴凤礼 李梦娇 姜爱良 师亮 赵明文
[目的]利用比较基因组学方法，对药用模式真菌灵芝的基因组中的小G蛋白基因家族成员进行系统的预测分析和比较。[方法]利用真菌物种中已经报道的小G蛋白，对灵芝全基因组进行BLAST分析，筛选出所有灵芝的小G蛋白基因，并分析这些同源小G蛋白的基本特性。通过小G蛋白家族的进化树分析和功能域分析，解析灵芝小G蛋白家族成员的进化关系。设计每一个小G蛋白同源基因的特异性引物，通过荧光定量PCR检测小G蛋白同源基因的表达。[结果]灵芝中发现了29个小G蛋白家族基因，其中Ras亚家族4个，Rho亚家族4个，Rab亚家族12个，Arf亚家族7个，Ran亚家族1个,还有一个线粒体小G蛋白。菌丝体中有28个小G蛋白基...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张燕 李娟 姚青 陈杰忠 胡又厘
【目的】克隆‘早钟6号'枇杷(Eriobotrya japonica‘Zaozhong 6')的一个质膜水孔蛋白(plasma membrane intrinsic protein,PIP)基因,分析其序列特征,研究接种丛枝菌根(Arbuscular mycorrhizal,AM)真菌对枇杷水分利用效率(water use efficiency,WUE)及对质膜水孔蛋白基因表达模式的影响。【方法】以‘早钟6号'枇杷实生苗为材料,通过盆栽试验,设置2个处理(AM和NM),5个重复,利用光合测定系统对叶片水平上水分利用效率进行测定;采用RT—PCR和RACE技术克隆该基因的cDNA全长,结合生物信...
关键词：
枇杷 丛枝菌根 水孔蛋白 克隆 表达分析
[期刊] 西南农业学报
[作者]
夏雄飞 张凯强 任文来 韩长志
【目的】通过对小麦3种不同营养型病原真菌的候选GPCR蛋白进行找寻及性质对比分析，为进一步找寻新型农药作用靶标奠定理论基础。【方法】选择全基因组序列已经公布的小麦3种营养型病原真菌，基于GPCR蛋白所具有的7重跨膜结构典型特征，利用3种蛋白跨膜在线预测程序（TOPCONS、TMHMM、Philius）对上述病原真菌的候选GPCR蛋白开展找寻，以及候选GPCR蛋白序列长度、理论等电点、不稳定系数、最强亲（疏）水性残基等特征和遗传关系进行对比分析。【结果】小麦白粉病菌、叶枯病菌、叶斑病菌中分别含有候选GPCR蛋白11、32、69个，蛋白序列平均长度为396 aa。蛋白的理论等电点平均值在8.78左右、不稳定系数在40左右，亲水性在-2.70左右，疏水性在3.20左右，而最强亲（疏）水性氨基酸残基分布不一致。上述112个候选GPCR蛋白的遗传关系聚类为三大类，分别具有71、36、5个蛋白。【结论】小麦不同营养型病原真菌的候选GPCR蛋白数量以活体型真菌数量最少、死体型真菌数量最多，半活体型真菌介于两者之间。不同候选GPCR蛋白在理论等电点、不稳定系数等理化性质及遗传关系等方面具有一定同质性特征，然而最强亲（疏）水性氨基酸残基相对具有较大差异。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李伟 郭建夫 袁红旭 李玥仁 刘月廉 黄永相 蒋世河
【目的】评价抗真菌转基因水稻对靶标真菌病害的抗性和稻田非靶标病虫害发生的影响。【方法】以过表达水稻酸性几丁质酶基因(RAC22)和水稻碱性几丁质酶基因(RCH10)及转化苜蓿β-1,3-葡聚糖酶基因(β-Glu)和大麦核糖体失活蛋白基因(B-RIP)的四价抗真菌转基因水稻品系E122-1和E127-1以及对照非转基因亲本E32为材料,通过温室接种和田间调查开展E122-1和E127-1对稻瘟病、稻曲病和胡麻叶斑病等靶标真菌病害的抗性和对白叶枯病、细菌性条斑病、三化螟和稻纵卷叶螟等非靶标病虫害的影响。【结果】E122-1和E127-1对稻瘟病菌株的抗性比对照明显提高,同时,E122-1和E127...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
曾凡松 尹合兴 史文琦 汪华 杨立军 龚双军 张学江 向礼波 喻大昭
【目的】揭示β1-微管蛋白基因(β1-tub)和β2-微管蛋白基因(β2-tub)在赤霉病菌(Gibberella zeae)对多菌灵的抗性过程中所起的作用。【方法】采用PCR克隆测序法测定Js449(EC50=7.911μg·m L-1)、Js462(EC50=6.515μg·m L-1)、Js484(EC50=5.031μg·m L-1)、Js506(EC50=8.455μg·m L-1)和Js519(EC50=6.280μg·m L-1)等5个多菌灵抗性菌株的α-、β1-、β2-、γ-tub序列,并与敏感菌株HG-1(EC50=0.552μg·m L-1)进行比对。采用实时荧光定量PCR...
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